Summary
Das vorliegende Protokoll beschreibt eine detaillierte Echtzeit-NIR-II-Fluoreszenz-Bildgebungsoperation einer Maus unter Verwendung eines NIR-II-optischen Bildgebungsgeräts.
Abstract
Als aufstrebende Bildgebungstechnologie hat die Nahinfrarot-II-FLUORESZENZBILDGEBUNG (NIR-II, 1000-1700 nm) aufgrund ihrer hohen Empfindlichkeit, ihrer tiefen Gewebedurchdringung und ihrer überlegenen Bildgebung mit räumlicher und zeitlicher Auflösung ein erhebliches Potenzial im biomedizinischen Bereich. Die Methode zur Erleichterung der Implementierung der NIR-II-Fluoreszenzbildgebung für einige dringend benötigte Bereiche wie Medizin und Pharmazie hat jedoch relevante Forscher verwirrt. Dieses Protokoll beschreibt detailliert den Aufbau und die Bioimaging-Anwendungen einer molekularen NIR-II-Fluoreszenzsonde, HLY1, mit einem D-A-D-Skelett (Donor-Akzeptor-Donor). HLY1 zeigte gute optische Eigenschaften und Biokompatibilität. Darüber hinaus wurde die NIR-II-Gefäß- und Tumorbildgebung bei Mäusen mit einem NIR-II-Optik-Bildgebungsgerät durchgeführt. Es wurden hochauflösende NIR-II-Fluoreszenzbilder in Echtzeit aufgenommen, um die Erkennung von Tumoren und Gefäßerkrankungen zu steuern. Von der Sondenvorbereitung bis zur Datenerfassung wird die Bildqualität erheblich verbessert und die Authentizität der molekularen NIR-II-Sonden für die Datenaufzeichnung in der intravitalen Bildgebung sichergestellt.
Introduction
Die Fluoreszenzbildgebung ist das am häufigsten verwendete molekulare Bildgebungswerkzeug in der Grundlagenforschung und wird auch häufig zur Steuerung der chirurgischen Tumorresektion in Klinikeneingesetzt 1. Das wesentliche Prinzip der Fluoreszenzbildgebung besteht darin, eine Kamera zu verwenden, um die von einem Laser emittierte Fluoreszenz nach der Bestrahlung von Proben (Gewebe, Organe usw.) zu empfangen. 2. Der Vorgang ist innerhalb weniger Millisekunden abgeschlossen3. Die Wellenlängen der Fluoreszenzbildgebung können in ultraviolette (200-400 nm), sichtbare Bereiche (400-700 nm), Nahinfrarot I (NIR-I, 700-900 nm) und Nahinfrarot II (NIR-II, 1000-1700 nm) unterteilt werden4,5,6. Da die endogenen Moleküle wie Hämoglobin, Melanin, Desoxyhämoglobin und Bilirubin in biologischen Geweben eine starke Absorption und einen Streueffekt auf das Licht in sichtbaren Bereichen haben, werden das Eindringen und die Empfindlichkeit des Lichts stark reduziert, und die Fluoreszenzbildgebung in Wellenlängen des sichtbaren Lichts wird nachteilig beeinflusst 7,8,9.
Die NIR-II-Fluoreszenzbildgebung weist eine geringe Photonenabsorption und -streuung, eine hohe Abbildungsgeschwindigkeit und einen hohen Bildkontrast (oder eine hohe Empfindlichkeit) auf10,11. Mit zunehmender Fluoreszenzwellenlänge nimmt die Absorption und Streuung von Fluoreszenz in biologischen Geweben allmählich ab, und die Autofluoreszenz in der NIR-II-Region ist extrem niedrig12. Somit erhöht das NIR-II-Fenster die Eindringtiefe von Geweben signifikant und erhält eine höhere Auflösung und ein höheres Signal-Rausch-Verhältnis13,14,15. Das NIR-II-Fenster kann weiter unterteilt werden in die Fenster NIR-IIa (1300-1400 nm) und NIR-lIb (1500-1700 nm)16. Bisher wurden mehrere Meilensteine von NIR-II-Materialien berichtet, darunter einwandige Kohlenstoffnanoröhren aus anorganischem Material, Seltenerd-Nanopartikel, Quantenpunkte und Halbleiterpolymer-Nanopartikel aus organischem Material, niedermolekulare Farbstoffe, aggregationsinduzierte Lumineszenzmaterialien usw. 1,17,18,19,20,21,22. Anorganische Nanomaterialien reichern sich leicht in Leber, Milz usw. an und haben eine potenzielle langfristige Biotoxizität23. Organisches niedermolekulares Fluorophor hat die Vorteile eines schnellen Stoffwechsels, einer geringen Toxizität, einer einfachen Modifikation und einer klaren Struktur, die die vielversprechendste Sonde für den klinischen Einsatz ist24.
Das optische Bildgebungssystem NIR-II ist auch eine wichtige Komponente der Fluoreszenz-Biobildgebung, da es NIR-II-Fluoreszenzsignale von der NIR-II-Sonde effizient erfassen und so präzise funktionelle, anatomische und molekulare Bilder liefernkann 25,26. Das NIR-II-Bildgebungssystem besteht hauptsächlich aus Kurzwellen-Infrarotkameras, Langpassfiltern, Lasern und Computerprozessoren. Im lebenden Organismus Die NIR-II-Fluoreszenzbildgebung gilt als einer der praktikabelsten bildgebenden Ansätze zur Aufklärung der Mechanismen von Krankheiten und der Natur des Lebens27,28,29. Die NIR-II-Bildgebungstechnologie ist in biomedizinischen Bereichen wie der Erkennung von Krebszellen, der dynamischen Bildgebung, der gezielten In-vivo-Verfolgung und der gezielten Therapie, insbesondere in der onkologischen Forschung, weit verbreitet30,31. Angesichts der hohen technischen Anforderungen der NIR-II-Bildgebungstechnologie an bildgebende Sonden und Instrumente verwirrt und schränkt sie jedoch auch den praktischen Einsatz von Forschern in verschiedenen Bereichen ein. Daher werden in diesem Artikel die Herstellung von NIR-II-Bildgebungssonden und die Anwendungen der NIR-II-Bildgebung ausführlich vorgestellt.
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Protocol
Tierversuche für NIR-II-Bildgebungsstudien wurden am Tierversuchszentrum der Universität Wuhan durchgeführt, das mit der International Association for Experimental Animal Care (AALAC) ausgezeichnet wurde. Alle Tierstudien wurden gemäß den Richtlinien der China Animal Welfare Commission für die Pflege und Verwendung von Versuchstieren durchgeführt und vom Animal Care and Use Committee (IACUC) des Animal Experimental Center der Universität Wuhan genehmigt.
Für die vorliegende Studie wurden weibliche BALB/c-Nacktmäuse (~20 g) im Alter von 6 Wochen verwendet.
1. NIR-II-Bildgebungsvorbereitung
- Legen Sie handelsüblichen schwarzen Karton (siehe Materialtabelle) in die Mitte des Trägers. Legen Sie dann die Probe auf den schwarzen Karton, so dass sich die Probe in der Mitte des Trägers befindet (eine Stufe, die sich im Bildgebungsgerät befindet).
HINWEIS: Im Vergleich zu weißem Karton weist schwarzer Karton während der NIR-II-Bildgebung weniger Hintergrundinterferenzen auf. - Wählen Sie einen geeigneten Filter basierend auf der Wellenlänge der NIR-II-Sonde. Drücken Sie lange (>2 s), um den Boxbereich (z. B. 900 LP) entsprechend dem Filtermodell in der Bildschirmoberfläche zu steuern, wenn das System den Filter in den optischen Abbildungspfad bewegt.
- Drücken Sie die Plattform lange auf die Touchscreen-Oberfläche des Bedienbereichs der Trägerkonsole, so dass die Trägerkonsole nach oben gerichtet ist. Drücken Sie die Plattform lange nach unten, damit sich der Träger nach unten konsoliert.
- Stellen Sie die Plattformhöhe auf "0 mm" (Höhenverstellung) ein und verwenden Sie die automatische Fokussierung, um das NIR-II-Bild klar zu machen.
2. Synthese des NIR-II-Farbstoffs (HLY1)
- Wiegen Sie die für das Syntheseexperiment benötigten Rohstoffe. Stellen Sie sicher, dass sie sich nicht verschlechtern.
- Verbindung 1 (200 mg, 0,18 mmol), PdCl 2(dppf)2CH2Cl2 (28 mg, 0,04 mmol), N-Phenyl-N-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)phenyl)naphthalin-2-amin (170 mg, 0,4 mmol) und K 2 CO3 (46 mg, 0,34 mmol) zu Tetrahydrofuran (THF) -Lösung in einen 25 ml Rundkolben geben. Das Gemisch wird 4 h lang bei 75 °C unterN2-Atmosphäre gerührt (Abbildung 1A).
ANMERKUNG: Für das Syntheseverfahren von Verbindung 1 und N-Phenyl-N-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)phenyl)naphthalin-2-amin siehe Li et al.21. Die chemischen Strukturen sind in Abbildung 1A dargestellt. - Nach dem Abkühlen auf Umgebungstemperatur wird die Reaktion mit destilliertem (DI) Wasser (80 ml) abgeschreckt und das Gemisch mit DCM (Dichlormethan)/H2O (30 ml) (dreimal) extrahiert. Das Rohprodukt wird durch Säulenchromatographie 16 (Petrolether:DCM =10 :1) gereinigt, um HLY1 zu einem grünen Feststoff (78 mg, 30 % Ausbeute) zu machen.
- Legen Sie den Farbstoff HLY1 zur späteren Verwendung unter den Schutz von Stickstoff in den Kühlschrank. Diese kann bis zu 6 Monate gelagert werden.
3. Herstellung einer wasserabhängigen Nanosonde
- Wiegen Sie HLY1 (1 mg) und amphipathische Verkapselungsmaterialien, 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin-N-[amino(polyethylenglykol)-2k (DSPE-PEG2k, 10 mg; siehe Materialtabelle).
- Bereiten Sie HLY1-Punkte20 vor, indem Sie DSPE-PEG2k als Verkapselungsmatrix verwenden (Nanopräzipitationsmethode12) (Abbildung 1C). HLY1 wird in THF (1 ml) gelöst und langsam in ein Becherglas gegeben, das die wässrige Lösung DSPE-PEG2k (9 ml) mit Beschallung bei 25 °C enthält. Anschließend wird THF durch Dialyse20 aus dem Gemisch entfernt.
- Konzentrieren Sie die obige Lösung zentrifugal mit Ultrafiltration 18 (7100 x g für10 min) und stellen Sie sie dann zur zukünftigen Verwendung in einen Kühlschrank bei 4 °C. Diese kann bis zu 1 Monat gelagert werden.
HINWEIS: Die mit DSPE-PEG2k beladene wässrige Nanosondenlösung sollte über 0 °C gelagert und so schnell wie möglich verwendet werden.
4. Konstruktion tumortragender Mäuse
- Kultivieren Sie 4T1-Brustkrebszellen der Maus (4T1) in Dulbeccos modifiziertem Eagle Medium (DMEM), ergänzt mit 10 % (v/v) fötalem Rinderserum (FBS) und 1 % (v/v) Penicillin-Streptomycin (siehe Materialtabelle) und halten Sie sie in einem befeuchteten Inkubator mit 5 % CO2 bei 37 °C.
- Für das NIR-II-Fluoreszenzbildgebungsexperiment werden 4T1-Zellen (5 x 107) 24 h lang kultiviert, mit Trypsin (1 ml) verdaut und zweimal mit serumfreiem DMEM (4 ml) gewaschen.
- Betäuben Sie die Mäuse durch Behandlung mit Isofluran (2%). Bestätigen Sie eine ausreichende Anästhesie, indem Sie die Zehen oder Fußsohlen der Mäuse stimulieren, und beobachten Sie, ob die Mäuse reagieren. Wenn es keine Reaktion gibt, bedeutet dies, dass die Anästhesie ausreichend ist32.
- Dann injizieren Sie mit einer Insulininjektionsnadel die 4T1-Zellmischung durch subkutane Injektion (100 μl) in die Mäuse.
HINWEIS: NIR-II-Bildgebungsstudien wurden ~2 Wochen nach der Inokulation durchgeführt, als der Tumor auf ein Volumen von ~100 mm3 angewachsen war. Bitte bestätigen Sie vor der NIR-II-Tumorbildgebung die Tumorgröße. Die Tumorgröße wurde für die vorliegende Studie mit einem elektronischen Messschieber geschätzt11.
5. In-vivo-NIR-II-Fluoreszenzbildgebung
- Anästhesieren Sie die Mäuse durch Behandlung mit Isofluran (2%) und führen Sie eine NIR-II-Bildgebung des gesamten Körpers der Mäuse mit einem optischen NIR-II-Bildgebungssystem durch (siehe Materialtabelle).
HINWEIS: Achten Sie auf die Dosierung des Anästhetikums, um den Tod von Mäusen zu vermeiden. Im Allgemeinen dauert die Anästhesie 5-10 Minuten. Stimulieren Sie die Zehen oder Fußsohlen der Mäuse und beobachten Sie, ob die Mäuse reagieren. Wenn es keine Reaktion gibt, bedeutet dies, dass die Anästhesie ausreichend ist. - Nehmen Sie eine Lösung von HLY1-Punkten (0,8 mg/ml, 200 μl). Injizieren Sie die HLY1-Punkte intravenös in die anästhesierten Mäuse und führen Sie 3 Minuten später eine NIR-II-Fluoreszenzbildgebung der Blutgefäße des gesamten Körpers von Mäusen mit einem NIR-II-Bildgebungssystem durch. Konzentrieren Sie sich weiter auf den Kopf der Maus, um die Gefäßbildgebung des Gehirns zu erfassen.
HINWEIS: Verwenden Sie während der Bildgebung saubere experimentelle Handschuhe, um saubere NIR-II-Bilder zu erhalten. - Sammeln Sie die Bilder 5 Minuten nach der Injektion von HLY1-Punkten in Mäuse und verarbeiten Sie die Daten mit der ImageJ-Software. Die Geräteparameter des optischen NIR-II-Bildgebungssystems liegen bei 90 mW/cm2 (808 nm Laser).
- Nach Abschluss des Experiments werden die Tiere nach institutionell genehmigten Protokollen eingeschläfert.
HINWEIS: Für die vorliegende Studie wurden die Tiere eingeschläfert, indem sie überschüssigem Isofluran32 ausgesetzt wurden.
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Representative Results
Die Fluoreszenzintensität und Helligkeit von wasserabhängigen HLY1-Punkten wurde mit einem NIR-II-Bildgebungsgerät bestimmt. Die Fluoreszenzintensität von HLY1 in der 90% fwTHF/H2O-Mischungwar fünfmal so hoch wie in der THF-Lösung, was auf ein markantes AIE-Merkmal von HLY1 hindeutete (Abbildung 1B). Darüber hinaus emittierten HLY1-Punkte starke Fluoreszenzsignale unter einem 1.500-nm-LP-Filter, was zeigt, dass HLY1-Punkte für die NIR-IIb-Bildgebung verwendet werden können (Abbildung 1D). Die maximale Absorption und die maximale Emissionswellenlänge von HLY1-Punkten betrugen 740 nm bzw. 1.040 nm (Abbildung 2A). Darüber hinaus wurde die hydrodynamische Größe von HLY1-Punkten durch dynamische Lichtstreuung (DLS) auf 145 nm bestimmt (Abbildung 2B). HLY1-Punkte (0,2 ml, 0,8 mg/ml) wurden normalen Balb/c-Mäusen über eine Schwanzveneninjektion zur vaskulären Bildgebung verabreicht (ergänzende Abbildung 1). Die Mikrogefäße in den Hinterbeinen wurden unter einem 1.500 nm LP-Filter deutlich identifiziert (Abbildung 3B). Darüber hinaus wurden die Hirngefäße auch unter einem 1.500 nm LP-Filter eindeutig identifiziert (Abbildung 3A). Die NIR-II-Bildgebungsleistung der HLY1-Punkte in 4T1-Tumor-tragenden Mäusen wurde ebenfalls durch das NIR-II-Bildgebungssystem bewertet. HLY1-Punkte (0,2 ml, 0,8 mg/ml) wurden 4T1-Mäusen intravenös durch die Schwanzvene injiziert. Der 4T1-Tumor der tumortragenden Mäuse war durch NIR-II-Bildgebung deutlich sichtbar (Abbildung 3C), was auf den EPR-Effekt von HLY1-Punkten hinweist. Alle diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass HLY1-Punkte eine helle NIR-II-Fluoreszenzsonde sind, die für die Gefäß- und Tumorbildgebung geeignet ist.
Abbildung 1: Synthese von Farbstoffmolekülen und Herstellung von wasserabhängigen Sonden. (A) Der Synthesepfad von HLY1 (a: Pd(dppf)Cl 2 CH 2 Cl 2, K 2 CO3, 75 °C). (B) Die NIR-II-Bilder von HLY1 in THF und 90% fw THF/H 2 O (1.000 nm LP,2ms). (C) Eine schematische Darstellung der Herstellung von HLY1-Punkten. (D) Die NIR-IIb-Fluoreszenzintensität von HLY1-Punkten in wässriger Lösung (1.500 nm LP, 200 ms). Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.
Abbildung 2: Die optischen Eigenschaften und die hydrodynamische Größe von HLY1-Punkten. (A) Die Absorptions- und Emissionsspektren von HLY1-Punkten in wässriger Lösung. (B) Das DLS von HLY1-Punkten. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.
Abbildung 3: NIR-II-Fluoreszenzbildgebung mit HLY1-Punkten . (A) Gefäßbildgebung des Gehirns bei Mäusen (1.500 nm LP, 300 ms Expositionszeit). Maßstabsleiste: 2 cm. (B) Ganzkörper-Gefäßbildgebung bei Mäusen (1.500 nm LP, 300 ms). (C) 4T1-Tumorbildgebung (1.250 nm LP, 30 ms). Maßstabsleiste: 1 cm. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.
Ergänzende Abbildung 1: NIR-II-Bildgebungsaufbau. (A) Schematische Darstellung der Injektion von HLY1-Punkten in Mäuse. (B) Das Foto des NIR-II-Bildgebungsgeräts. Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.
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Discussion
Die NIR-I-Fluoreszenzbildgebung kann bis zu einem gewissen Grad für die Tumor- und Gefäßbildgebung verwendet werden, führt jedoch aufgrund der begrenzten maximalen Emissionswellenlänge von NIR-I-Fluorophoren (<900 nm) zu einer schlechten Gewebepenetration und einem Tumorsignalhintergrundverhältnisvon 33,34. Eine schlechte und niedrige Bildgebungsauflösung kann zu einer Abweichung zwischen dem Ergebnis der bildgebenden Feedbackbehandlung und dem tatsächlichen therapeutischen Effekt führen. Darüber hinaus weisen die meisten NIR-I-Fluorophore eine schlechte optische Stabilität und einen extrem schnellen Stoffwechsel auf, was zu einer Instabilität des Bildgebungsprozesses führt. Aufgrund der geringen Gewebedurchdringung und Instabilität von NIR-I-Fluorophoren ist die Anwendung in der Tumor- und Gefäßbildgebung stark eingeschränkt35. Im Vergleich zu NIR-I-Licht hat die NIR-II-Fluoreszenzbildgebung die Vorteile einer deutlich reduzierten Photonenstreuung und -absorption, einer geringeren Gewebe-Autofluoreszenz, einer stärkeren Durchdringung des Körpergewebes und einer besseren Bildgebungs-Raumzeitauflösung36.
Dieser Artikel beschreibt einen hellen AIE-Farbstoff, der auf einem D-A-D-Skelett basiert und eine ausgezeichnete Stabilität aufweist. Eine effektive Nanopräzipitationsmethode wurde verwendet, um eine Nanosonde für die Mehrzweck-Biobildgebung, einschließlich Gefäßerkrankungen und Tumorbildgebung, herzustellen. Die hohe Quantenausbeute in der wässrigen Lösung ist auf die durch Aggregation induzierten Lumineszenzeigenschaften zurückzuführen, die eine hochauflösende NIR-II-Bildgebung mit niedriger Dosis und hoher Biosicherheit erreichen können. Die Helligkeit der NIR-II-Sonde und die Wasserlöslichkeit bestimmen die Qualität der Bildgebung. Darüber hinaus muss beim Injizieren einer Sonde in eine Maus vermieden werden, dass die Sonde in den Schwanz der Maus gelangt, was die Genauigkeit der Bildgebungsergebnisse beeinträchtigt. Die derzeitige Verabreichungsmethode ist nur auf die intravenöse Injektion beschränkt und kann nicht mehrere Injektionsmethoden verwenden, was eine Einschränkung der derzeitigen Methode darstellt. Darüber hinaus kann die NIR-II-Nanosonde dieser Methode nur durch passives Targeting auf das Ziel akkumuliert werden und kann keine spezifischen Ziele durch aktives Targeting identifizieren.
Bei der Implementierung der NIR-II-Bildgebung ist der Betrieb des NIR-II-Geräts auch für die Aufnahme von Bildern wichtig. Um eine hochauflösende Gefäßbildgebung zu erhalten, muss die InGaAs-Kamera auf die Maus fokussiert und in der Nähe der Maus positioniert werden, damit die winzigen Blutgefäße leicht beobachtet werden können. Für die Tumorbildgebung müssen Sonden effektiv in den Tumor akkumuliert werden, und NIR-II-Fluoreszenz sollte von den im Tumor angesammelten Sonden emittiert werden, um die Grenze zwischen dem Tumor und dem umgebenden Gewebe effektiv zu unterscheiden. Aufgrund der hohen Empfindlichkeit der NIR-II-Fluoreszenzbildgebung können Bilder während der Bildgebung dynamisch beobachtet werden, was bei vielen anderen bildgebenden Verfahren fehlt.
In dieser Studie wird die Herstellung einer Fluoreszenzsonde vorgestellt. Gleichzeitig wird eine hochauflösende Gefäß- und Tumorbildgebung durch eine NIR-II-Fluoreszenz-Nanosonde realisiert, die eine genaue und effektive Methode zur Erkennung von Gefäßerkrankungen und Krebs bietet.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts zu offenbaren.
Acknowledgments
Diese Arbeit wurde teilweise durch Zuschüsse der NSFC (82273796, 82111530209), Sonderfonds zur Steuerung der lokalen Wissenschafts- und Technologieentwicklung der Zentralregierung (XZ20220202YD0021C, XZ202102YD0033C, XZ202001YD0028C), des Schlüsselprojekts für wissenschaftliche und technische Innovation der Provinz Hubei (2020BAB058), der Grundlagenforschungsfonds für die zentralen Universitäten und der COVID-19-Präventions- und Kontrollprogramme der Autonomen Region Tibet für die Entwicklung von Wissenschaft und Technologie unterstützt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anhydrous pyridine | Perimed | 110-86-1 | |
| Anhydrous sodium sulfate | China national medicines Co.,Ltd | SY006376 | |
| Black cardboard | Suzhou Yingrui Optical Technology Co., Ltd | AO00158 | |
| Column chromatography | Energy Chemical | E080498 | |
| Diphenylphosphine palladium dichloride | Sigma-Aldrich | B2161-1g | |
| DSPE-PEG2000 | Ponsure | PS-E1 | |
| Dulbecco's modified eagle medium | Gibco | 8121587 | |
| EGTA | Biofroxx | EZ6789D115 | |
| Fetal bovine serum | Gibco | 2166090RP | |
| Isoflurane | GLPBIO | GC45487-1 | |
| K2CO3 | Macklin | P816305-5g | |
| N. N '- dimethylformamide | China national medicines Co.,Ltd | 02-12-1968 | |
| NIR-II imaging instrument | Suzhou Yingrui Optical Technology Co., Ltd | 16011109 | |
| N-sulfenanilide | Enerry chemical | 1250030-5g | |
| PdCl2(dppf)2CH2Cl2 | TCI | B2064-1g | |
| penicillin-streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| Tetrahydrofuran | China national medicines Co.,Ltd | M005197 | |
| Tetratriphenylphosphine palladium | Immochem | 1021232-5g | |
| Tetratriphenylphosphine palladium | Sigma-Aldrich | 1021232-5g | |
| Tributyltin chloride | Immochem | QH004335 | |
| Trimethylchlorosilane | China national medicines Co.,Ltd | 40060560 |
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