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Engineering

माउस में नॉर्मोथर्मिक एक्स विवो लिवर मशीन छिड़काव

Published: September 25, 2023 doi: 10.3791/65363
Automatic Translation
1, 2, 1,3, 1, 1
1Experimental Transplantation Surgery, Department of General, Visceral and Vascular Surgery, Jena University Hospital, 2Institute of Pathology, Klinikum Chemnitz GmbH, 3Department of Pathology, Faculty of Veterinary Medicine, Menoufia University

Summary

माउस लिवर के लिए एक नॉर्मोथर्मिक एक्स विवो लिवर परफ्यूजन (एनईवीएलपी) सिस्टम बनाया गया था। इस प्रणाली को माइक्रोसर्जरी में अनुभव की आवश्यकता होती है लेकिन प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य छिड़काव परिणामों की अनुमति देता है। माउस लिवर का उपयोग करने की क्षमता आणविक मार्गों की जांच की सुविधा प्रदान करती है ताकि नए पर्फ्यूसेट एडिटिव्स की पहचान की जा सके और अंग की मरम्मत पर केंद्रित प्रयोगों के निष्पादन को सक्षम बनाया जा सके।

Abstract

यह प्रोटोकॉल माउस लिवर का उपयोग करके एक अनुकूलित एरिथ्रोसाइट्स-मुक्त एनईवीएलपी प्रणाली प्रस्तुत करता है। माउस लिवर का पूर्व विवो संरक्षण संशोधित कैनुला और पारंपरिक वाणिज्यिक पूर्व विवो छिड़काव उपकरण से अनुकूलित तकनीकों को नियोजित करके हासिल किया गया था। छिड़काव के 12 घंटे के बाद संरक्षण परिणामों का मूल्यांकन करने के लिए सिस्टम का उपयोग किया गया था। सी 57बीएल / 6 जे चूहों ने यकृत दाताओं के रूप में कार्य किया, और यकृत को पोर्टल नस (पीवी) और पित्त नली (बीडी) को प्रवेशनी करके खोजा गया, और बाद में अंग को गर्म (37 डिग्री सेल्सियस) हेपरिनाइज्ड खारा के साथ फ्लश किया गया। फिर, खोज किए गए यकृत को छिड़काव कक्ष में स्थानांतरित कर दिया गया और नॉर्मोथर्मिक ऑक्सीजन युक्त मशीन छिड़काव (एनईवीएलपी) के अधीन किया गया। इनलेट और आउटलेट परफ्यूसेट नमूने 3 घंटे के अंतराल पर एकत्र किए गए थे ताकि पर्फ्यूसेट विश्लेषण किया जा सके। छिड़काव के पूरा होने पर, यकृत के नमूने हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण के लिए प्राप्त किए गए थे, जिसमें हेमटोक्सिलिन-ईओसिन (एचई) धुंधला होने के माध्यम से संशोधित सुजुकी-स्कोर का उपयोग करके रूपात्मक अखंडता का मूल्यांकन किया गया था। अनुकूलन प्रयोगों ने निम्नलिखित निष्कर्ष प्राप्त किए: (1) 30 ग्राम से अधिक वजन वाले चूहों को उनके पित्त नली (बीडी) के बड़े आकार के कारण प्रयोग के लिए अधिक उपयुक्त माना गया। (2) पॉलीप्रोपाइलीन कैनुला की तुलना में 2 एफआर (बाहरी व्यास = 0.66 मिमी) पॉलीयुरेथेन कैनुला पोर्टल नस (पीवी) को प्रवेशनी करने के लिए बेहतर अनुकूल था। यह पॉलीयुरेथेन सामग्री की बढ़ी हुई पकड़ के लिए जिम्मेदार ठहराया गया था, जिसके परिणामस्वरूप शरीर से अंग कक्ष में स्थानांतरण के दौरान कैथेटर फिसलन कम हो गई थी। (3) पित्त नली (बीडी) के प्रवेशनी के लिए, पॉलीप्रोपाइलीन यूटी - 03 (बाहरी व्यास = 0.30 मिमी) कैनुला की तुलना में 1 एफआर (बाहरी व्यास = 0.33 मिमी) पॉलीयुरेथेन कैनुला अधिक प्रभावी पाया गया। इस अनुकूलित प्रोटोकॉल के साथ, माउस लिवर को हिस्टोलॉजिकल संरचना पर महत्वपूर्ण प्रभाव के बिना 12 घंटे की अवधि के लिए सफलतापूर्वक संरक्षित किया गया था। हेमटोक्सीलिन-ईओसिन (एचई) धुंधला होने से यकृत की एक अच्छी तरह से संरक्षित रूपात्मक वास्तुकला का पता चला, जो स्पष्ट रूप से दिखाई देने वाले नाभिक और यकृत साइनसोइड के हल्के फैलाव के साथ मुख्य रूप से व्यवहार्य हेपेटोसाइट्स की विशेषता है।

Introduction

यकृत प्रत्यारोपण अंतिम चरण के यकृत रोग वाले व्यक्तियों के लिए स्वर्ण मानक उपचार का प्रतिनिधित्व करता है। अफसोस की बात है, दाता अंगों की मांग उपलब्ध आपूर्ति से अधिक है, जिससे एक महत्वपूर्ण कमी हो जाती है। 2021 में, लगभग 24,936 रोगी लिवर ग्राफ्ट के लिए प्रतीक्षा सूची में थे, जबकि केवल 9,234 प्रत्यारोपणसफलतापूर्वक किए गए थे। लिवर ग्राफ्ट की आपूर्ति और मांग के बीच महत्वपूर्ण असमानता दाता पूल को व्यापक बनाने और लिवर ग्राफ्ट की पहुंच बढ़ाने के लिए वैकल्पिक रणनीतियों की जांच करने की आवश्यकता पर प्रकाश डालती है। दाता पूल का विस्तार करने का एक तरीका सीमांत दाताओं का उपयोग करनाहै। सीमांत दाताओं में उन्नत आयु, मध्यम या गंभीर स्टीटोसिस वाले लोग शामिल हैं। यद्यपि सीमांत अंगों के प्रत्यारोपण से अनुकूल परिणाम मिल सकते हैं, लेकिन समग्र परिणाम उप-मानक बने हुए हैं। नतीजतन, सीमांत दाताओं के कार्य को बढ़ाने के उद्देश्य से चिकित्सीय रणनीतियों का विकास वर्तमान मेंचल रहा है।

रणनीतियों में से एक इन सीमांत अंगों के कार्य में सुधार करने के लिए मशीन छिड़काव, विशेष रूप से नॉर्मोथर्मिक ऑक्सीजन युक्त मशीन छिड़काव का उपयोग करनाहै। हालांकि, आणविक तंत्र की अभी भी सीमित समझ है जो नॉर्मोथर्मिक ऑक्सीजन युक्त मशीन छिड़काव (एनईवीएलपी) के लाभकारी प्रभावों को रेखांकित करती है। चूहे, आनुवंशिक रूप से संशोधित उपभेदों की प्रचुर मात्रा में उपलब्धता के साथ, आणविक मार्गों की जांच के लिए मूल्यवान मॉडल के रूप में काम करते हैं। उदाहरण के लिए, हेपेटिक इस्किमिया-रीपरफ्यूजन चोट को कम करने में ऑटोफैगी मार्गों के महत्व को तेजी से मान्यता दी गईहै। हेपेटिक इस्किमिया-रीपरफ्यूजन चोट में एक महत्वपूर्ण आणविक मार्ग एमआईआर -20 बी -5 पी / एटीजी 7 मार्ग8 है। वर्तमान में, कई एटीजी नॉकआउट और सशर्त नॉक-आउट माउस उपभेद उपलब्ध हैं लेकिन कोई संबंधित चूहे उपभेद9 नहीं हैं।

इस पृष्ठभूमि के आधार पर, इसका उद्देश्य माउस लिवर ग्राफ्ट के लिए एक छोटा एनईवीएलपी प्लेटफॉर्म तैयार करना था। यह मंच दाता के यकृत की कार्यक्षमता में सुधार के उद्देश्य से संभावित आनुवंशिक रूप से संशोधित रणनीतियों की खोज और मूल्यांकन की सुविधा प्रदान करेगा। इसके अतिरिक्त, सिस्टम के लिए दीर्घकालिक छिड़काव के लिए उपयुक्त होना आवश्यक था, जिससे यकृत के पूर्व विवो उपचार को सक्षम किया जा सके, जिसे आमतौर पर "अंग मरम्मत" कहा जाता है।

माउस लिवर छिड़काव पर प्रासंगिक इन विट्रो डेटा की सीमित उपलब्धता को ध्यान में रखते हुए, साहित्य समीक्षा ने चूहों में किए गए अध्ययनों पर ध्यान केंद्रित किया। 2010 से 2022 तक फैले साहित्य की एक व्यवस्थित खोज "नॉर्मोथर्मिक लिवर छिड़काव," "एक्स विवो या इन विट्रो", और "चूहों" जैसे कीवर्ड का उपयोग करके की गई थी। इस खोज का उद्देश्य कृन्तकों में इष्टतम स्थितियों की पहचान करना था, जिससे हमें सबसे उपयुक्त दृष्टिकोण निर्धारित करने की अनुमति मिलती है।

छिड़काव प्रणाली में एक सील पानी-जैकेट ग्लास बफर जलाशय, एक पेरिस्टालिक रोलर पंप, एक ऑक्सीजनेटर, एक बुलबुला जाल, एक हीट एक्सचेंजर, एक अंग कक्ष और एक बंद साइक्लिंग ट्यूबिंग सिस्टम होता है (चित्रा 1)। सिस्टम एक समर्पित थर्मो-स्टेटिक मशीन का उपयोग करके 37 डिग्री सेल्सियस के निरंतर छिड़काव तापमान का सटीक रखरखाव सुनिश्चित करता है। पेरिस्टालिक रोलर पंप पूरे सर्किट में परफ्यूसेट के प्रवाह को चलाता है। छिड़काव सर्किट इंसुलेटेड वाटर-जैकेट जलाशय में शुरू होता है। इसके बाद, परफ्यूसेट को ऑक्सीजनेटर के माध्यम से निर्देशित किया जाता है, जो एक समर्पित गैस बोतल से 95% ऑक्सीजन और 5% कार्बन डाइऑक्साइड का गैस मिश्रण प्राप्त करता है। ऑक्सीकरण के बाद, परफ्यूसेट बुलबुले जाल से गुजरता है, जिसमें किसी भी फंसे बुलबुले को पेरिस्टालिक पंप द्वारा जलाशय में वापस निर्देशित किया जाता है। शेष पर्फ्यूसेट हीट एक्सचेंजर के माध्यम से बहता है और अंग कक्ष में प्रवेश करता है, जहां से यह जलाशय में लौटता है।

यहां, हम माउस लिवर के लिए एनईवीएलपी स्थापित करने के अपने अनुभवों की रिपोर्ट करते हैं और ऑक्सीजन वाहक के बिना ऑक्सीजन युक्त माध्यम का उपयोग करके किए गए पायलट प्रयोग के आशाजनक परिणामों को साझा करते हैं।

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Protocol

पशु प्रयोगों को पशु कल्याण के लिए वर्तमान जर्मन नियमों और दिशानिर्देशों और पशु अनुसंधान की रिपोर्टिंग के लिए आगमन दिशानिर्देशों के अनुसार किया गया था। पशु प्रयोग प्रोटोकॉल को थुरिंगर लैंडसम्ट फर वरब्राउचेर्सचुट्ज़, थुरिंगिया, जर्मनी (अनुमोदन-संख्या: यूकेजे - 17 - 106) द्वारा अनुमोदित किया गया था।

नोट: पुरुष C57BL / 6J चूहों का वजन 34 ± 4 ग्राम (औसत [एसईएम] की मानक त्रुटि ±) यकृत दाताओं के रूप में उपयोग किया गया था। उन्हें नियंत्रित पर्यावरणीय परिस्थितियों (50% आर्द्रता और 18 - 23 डिग्री सेल्सियस) के तहत मानक माउस चाउ और पानी तक मुफ्त पहुंच के साथ बनाए रखा गया था। सर्जिकल प्रक्रिया के दौरान, 60 सांस / मिनट से अधिक श्वसन दर बनाए रखी गई थी, और शरीर का तापमान 34 डिग्री सेल्सियस से ऊपर रखा गया था।

1. तैयारी

  1. कार्रवाई तालिका सेट करना
    1. नसबंदी उद्देश्यों के लिए सभी सर्जिकल उपकरणों और उपभोग्य सामग्रियों को आटोक्लेव।
    2. वार्मिंग बोर्ड और इलेक्ट्रोकॉगुलेशन सहित सभी उपकरणों को चालू करें।
    3. एक गर्म इनक्यूबेटर (37 डिग्री सेल्सियस) में 25 एमएल हेपरिनाइज्ड (2,500 यू / एल) खारा के साथ एक 50 एमएल सिरिंज रखें।
    4. सर्जिकल उपकरणों, 6 - 0 रेशम सीवन, बाँझ छोटे कपास एप्लीकेटर, पशु चिकित्सा खारा (500 एमएल), और गैर-बुना धुंध स्पंज (10 सेमी x 10 सेमी) को ऑपरेशन टेबल पर उचित रूप से रखें।
    5. पित्त संग्रह के लिए पित्त ट्यूब प्राप्त करने के लिए 0.5 एमएल माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब के ढक्कन में एक छोटा छेद बनाने के लिए ऑपरेशन टेबल पर 26 ग्राम सुई रखें।
    6. ऑपरेशन टेबल पर पित्त संग्रह के लिए कैनुला (1 एफआर पॉलीयुरेथेन कैनुला या यूटी - 03 पॉलीथीन कैनुला) और एक निष्फल 0.5 एमएल माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब रखें।
  2. स्व-निर्मित पोर्टल नस कैनुला
    1. 2 एफआर कैनुला को बल के साथ पकड़ें और कैनुला के अंत से 1 सेमी की दूरी पर 30 ग्राम सुई के साथ दीवार को पंचर करें। सुई को प्रवेशनी के माध्यम से तब तक धक्का दें जब तक कि सुई की नोक दिखाई न दे।
    2. कैनुला के सिरे को ट्रिम करें जिसके परिणामस्वरूप एक तेज त्रिकोण होता है।
  3. हेपरिनाइज्ड खारा की तैयारी
    1. 2,500 आईयू / एमएल की अंतिम एकाग्रता के साथ हेपरिनाइज्ड खारा का 25 एमएल तैयार करें।
    2. सभी हवा के बुलबुले निकालें और सिरिंज को 40 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में रखें।
  4. छिड़काव प्रणाली का प्रदर्शन
    1. मशीन छिड़काव प्रणाली के मुख्य घटकों के लिए चित्र 1 देखें।
  5. अंग कक्ष की स्थापना
    1. अंग कक्ष के लेआउट के लिए चित्र 2 देखें।
  6. छिड़काव प्रणाली की स्थापना
    1. दबाव की निगरानी के लिए लैब चार्ट प्रोग्राम चालू करें।
    2. अंग कक्ष स्तर पर दबाव कैलिब्रेटर और दबाव सेंसर कनेक्ट करें।
    3. 0 mmHg पढ़ने के लिए दबाव कैलिब्रेटर समायोजित करें और दबाव नियंत्रण सॉफ्टवेयर पर संबंधित मान की जांच करें।
    4. 20 mmHg पढ़ने के लिए दबाव कैलिब्रेटर समायोजित करें और फिर से दबाव नियंत्रण सॉफ्टवेयर पर संबंधित मूल्य की जांच करें।
    5. पानी के स्नान को चालू करें, और अंग कक्ष को 40 डिग्री सेल्सियस तक गर्म करें।
    6. पूरे नलसाजी प्रणाली को 30 मिनट के लिए आसुत विआयनीकृत पानी के साथ दो बार फ्लश करें, जिससे स्वच्छता समाधान को पूरी तरह से हटा दिया जाए।
    7. पूरी तरह से कीटाणुशोधन सुनिश्चित करने के लिए 20 मिनट की अवधि के लिए पूरे सिस्टम में कीटाणुशोधन समाधान का संचलन शुरू करें।
    8. गैस मिश्रण (95% ऑक्सीजन (O2) और 5% कार्बन डाइऑक्साइड (CO2) चालू करें।
  7. पर्फ्यूसेट भरना
    1. विलियम्स के ई माध्यम के 250 मिलीलीटर को 50 मिलीलीटर भ्रूण गोजातीय सीरम, 3 मिलीलीटर पेनिसिलिन / स्ट्रेप्टोमाइसिन (1 मिलीग्राम / एमएल), 0.17 एमएल इंसुलिन (100 आईई / एमएल), 0.34 एमएल हेपरिन (5000 यू / एमएल), और 0.07 एमएल हाइड्रोकार्टिसोन (100 मिलीग्राम / 2 एमएल) के साथ पूरक करें।
    2. सिस्टम को प्राइम करने के लिए जलाशय और अंग कक्ष में पर्फ्यूसेट की समान मात्रा (150 एमएल) जोड़ें।
      नोट: भरने की प्रक्रिया के दौरान बाँझपन बनाए रखने के लिए विशेष ध्यान दिया जाना चाहिए। बंद रिसर्कुलेटिंग मशीन छिड़काव के इन दो प्रमुख घटकों के माध्यम से पर्फ्यूसेट को लगातार पंप किया जाता है।
    3. ऑक्सीजन युक्त माध्यम के साथ छिड़काव प्रणाली को प्राइम करने के लिए मध्यम गति (15 एमएल / मिनट) पर पेरिस्टालिक पंप चालू करें।

2. लिवर एक्सप्लांटेशन

  1. सर्जरी से पहले की तैयारी
    1. जानवर को तौलो। एनाल्जेसिक ब्यूप्रेनोर्फिन (0.3 मिलीग्राम / एमएल) (0.05 मिलीग्राम / किग्रा शरीर का वजन) तैयार करें।
    2. प्रेरण कक्ष को दीवार सॉकेट से कनेक्ट करें। ऑक्सीजन को 0.5 लीटर/मिनट तक बदलें। आइसोफ्लुरेन को 3% तक मोड़ें।
    3. जानवर को चैंबर में रखें जब तक कि गहरी संज्ञाहरण (राइटिंग रिफ्लेक्स पॉजिटिव) तक न पहुंच जाए।
    4. शरीर के वजन के अनुकूल एनाल्जेसिया की खुराक को चमड़े के नीचे लागू करने के लिए माइक्रो सिरिंज का उपयोग करें।
    5. पेट की त्वचा पर फर को ट्रिम करने के लिए इलेक्ट्रिक शेवर का उपयोग करें।
    6. माउस को ऑपरेशन टेबल पर स्थानांतरित करें और संज्ञाहरण बनाए रखने के लिए आइसोफ्लुरेन वेपोराइज़र को 2.5% तक चालू करें। इंटरडिजिटल पैर की अंगुली रिफ्लेक्स का परीक्षण करके संज्ञाहरण की गहराई की पुष्टि करें।
  2. माउस पेट की तैयारी
    1. माउस को लापरवाह स्थिति में रखें।
    2. संज्ञाहरण की उचित गहराई की पुष्टि करने के लिए इंटरडिजिटल रिफ्लेक्स का परीक्षण करें। टेप के साथ सभी चार अंगों को ठीक करें।
    3. आयोडीन-अल्कोहल के लगातार तीन राउंड का उपयोग करके पेट के दोनों किनारों को मध्य-एक्सिलरी लाइन तक कीटाणुरहित करें। सर्जिकल क्षेत्र के आसपास के क्षेत्र को कवर करने के लिए गैर-बुना निष्फल धुंध का उपयोग करें।
    4. मेटजेनबाम बेबी कैंची और सर्जिकल फोर्सप्स का उपयोग करके माउस के पेट क्षेत्र में ज़िफॉइड के नीचे 1 सेमी 3 सेमी अनुप्रस्थ चीरा बनाएं।
    5. त्वचा चीरा को द्विपक्षीय रूप से दोनों तरफ मिडएक्सिलरी लाइन तक बढ़ाएं।
    6. वसंत कैंची का उपयोग करके लाइनिया अल्बा के साथ 2 सेमी अनुदैर्ध्य चीरा सावधानी पूर्वक बनाएं।
    7. इलेक्ट्रोकॉगुलेशन और वन्नास स्प्रिंग कैंची के साथ पेट की मांसपेशियों की परत के माध्यम से काटें।
    8. जिगर को इलेक्ट्रोकोगुलेशन से बचाने के लिए गीली धुंध का एक टुकड़ा ध्यान से रखें।
    9. कोरोनरी लिगामेंट के बेहतर संपर्क के लिए ज़िफॉइड प्रक्रिया को वापस लेने के लिए गोल सुई के साथ 6 - 0 रेशम सीवन का उपयोग करें।
    10. माउस के पेट की गुहा को पूरी तरह से उजागर करने के लिए दो रिब रिट्रैक्टर का उपयोग करें।
    11. हिलम को पूरी तरह से उजागर करने के लिए गीली कपास के फाहे के साथ पेट की गुहा से छोटी आंत को सावधानीपूर्वक बाहर निकालें।
  3. सामान्य पित्त नली की तैयारी
    1. फाल्सीफॉर्म, फ्रेनिक और गैस्ट्रोहेपेटिक लिगामेंट्स को तेज कैंची से ठीक करें।
    2. दांतों के बिना ठीक घुमावदार बल का उपयोग करके सामान्य पित्त नली को सावधानीपूर्वक मुक्त करें।
      नोट: आम पित्त नली बहुत आसानी से क्षतिग्रस्त हो जाती है और टूट जाती है। एक बार जब यह टूट जाता है, तो इसे कैनुलाइड नहीं किया जा सकता है। शारीरिक स्थिति की दिशा के कारण, घुमावदार बल का उपयोग करना बेहतर होता है।
    3. अगले चरण की तैयारी में आम पित्त नली के ऊपर दो 6 - 0 रेशम सीवन लूप रखें।
  4. सामान्य पित्त नली प्रवेशनी;
    1. 30 ग्राम सुई के साथ पित्त नली को सावधानी से पंचर करें। पित्त नली प्रवेशनी को फिट करने के लिए छोटे छेद को बड़ा करने के लिए नुकीले घुमावदार बल का उपयोग करें।
    2. पित्त नली प्रवेशनी को पकड़ने और इसे पित्त नली में धकेलने के लिए पोत प्रवेशनी बल का उपयोग करें।
    3. प्रीसेट 6 - 0 सीवन लूप के साथ कैनुला को डबल सुरक्षित करें।
      नोट: प्रवेशनी के दौरान, पित्त द्वारा प्रतिरोध महसूस किया जाता है। यदि बल को अच्छी तरह से नियंत्रित नहीं किया जाता है, तो पित्त बहिर्वाह के दबाव से कैनुला को पित्त पथ से बाहर धकेल दिया जाएगा। कैनुला की गहराई को ध्यान से समायोजित करें। यदि यह बहुत गहरा है, तो यह पित्त नली को नुकसान पहुंचा सकता है, और यदि यह पर्याप्त गहरा नहीं है, तो यह बाहर निकल सकता है।
    4. सफल प्रवेशनी के बाद प्रवेशनी में पित्त प्रवाह का निरीक्षण करें।
  5. पोर्टल नस तैयार करना
    1. पोर्टल नस को सपाट बल के साथ दबाएं और घुमावदार बल के साथ संयोजी ऊतक को सावधानीपूर्वक मुक्त करें। पोर्टल नस के फटने से बचने के लिए कड़ी मेहनत न करें। एक बार पोर्टल नस क्षतिग्रस्त हो जाने के बाद, पोर्टल नस को फिर से कैनुलेट करना मुश्किल होता है।
    2. पीवी को विभाजन से बेहतर विच्छेदित करें और बाद में उपयोग के लिए संगम के करीब पीवी पर 6 - 0 रेशम सीवन का उपयोग करके पहला सीवन लूप रखें।
    3. पीवी के बाद के निर्धारण के लिए दूसरे सीवन लूप को यथासंभव हेपेटिक हिलम के करीब रखें।
  6. पोर्टल नस प्रवेशनी;
    1. डिस्टल पोर्टल नस को बंद करने के लिए एक धमनी क्लिप का उपयोग करें।
    2. बहुत सावधानी से, उपरोक्त पोर्टल नस कैनुला में से एक के साथ पोर्टल नस को पंचर करें। एक सफल पंचर के बाद कैनुला के भीतर रक्त प्रवाह स्पष्ट रूप से देखा जा सकता है।
    3. पहले से रखे गए 6 - 0 सीवन लूप के साथ पीवी कैनुला को सुरक्षित करें।
  7. लिवर फ्लशिंग
    1. आइसोफ्लुरेन को 5% तक बढ़ाएं और माउस को आइसोफ्लुरेन इनहेलेशन के ओवरडोज के साथ इच्छामृत्यु करें।
    2. इनक्यूबेटर से पहले से गर्म हेपरिन खारा घोल लें। हेपरिनाइज्ड खारा के अंदर बनने वाले सभी हवा के बुलबुले को हटा दें।
    3. सिरिंज पंप में पहले से गर्म हेपरिनाइज्ड सेलाइन के साथ सिरिंज को ठीक करें।
    4. सिरिंज पंप की विस्तार ट्यूब को पोर्टल नस के प्रवेशनी से कनेक्ट करें, गति को 2 एमएल / मिनट तक समायोजित करें, और यकृत फ्लशिंग शुरू करें।
    5. फ्लशिंग प्रक्रिया के अंत में यकृत के रंग का निरीक्षण करें। एक बार जब रंग एक समरूप पीले रंग में बदल जाता है तो यकृत को हटा दें।
    6. डायाफ्राम, सुप्राहेपेटिक अवर वेना कावा, इन्फ्रा हेपेटिक वेना कावा, यकृत धमनी, डिस्टल पोर्टल नस, और किसी भी शेष संयोजी ऊतक को सही करें।
    7. जिगर को पेट्री डिश में रखें।

3. यकृत और कक्ष कनेक्शन

  1. यकृत स्थानांतरण
    1. पेट्री डिश का उपयोग करके यकृत को अंग कक्ष में सावधानीपूर्वक स्थानांतरित करें।
    2. लिवर को सूखने से बचाने के लिए पेट्री डिश में थोड़ी मात्रा में सेलाइन रखें।
      नोट: इस प्रक्रिया के दौरान पोर्टल नस और पित्त नली को आसानी से मोड़ा जा सकता है, जो यकृत छिड़काव और पित्त संग्रह को प्रभावित कर सकता है।
  2. Portal नस कैनुला कनेक्शन
    1. कैनुला में हवा के बुलबुले को खाली करने के लिए धीरे-धीरे एक सिरिंज के साथ पोर्टल नस प्रवेशनी में सामान्य खारा डालें।
    2. पोर्टल नस प्रवेशनी को अंग कक्ष में पर्फ्यूसेट बहिर्वाह ट्यूब में कनेक्ट करें।
  3. पित्त नली प्रवेशनी कनेक्शन
    1. एक रबर कैप के वाल्व के माध्यम से माउस पित्त नली प्रवेशनी का मार्गदर्शन करें जो अंग कक्ष से जुड़ा हुआ है।
    2. पित्त नली प्रवेशनी को ढक्कन में एक छोटे से छेद के साथ पहले से तैयार 0.5 एमएल माइक्रोट्यूब में डालें।
    3. माइक्रोट्यूब को अंग कक्ष के बाहर मिट्टी पर रखें।

4. पीवी दबाव के अनुसार प्रवाह दर समायोजित करें

  1. पेरिस्टालिक पंप को 1 एमएल / मिनट से चालू करें।
  2. प्रवाह दर को समायोजित करने के लिए पोर्टल नस दबाव रीडिंग की जांच करें।
  3. प्रवाह दर को समायोजित करके 7 - 10 मिमीएचजी के बीच शारीरिक सीमा में पोर्टल नस दबाव बनाए रखें।
    नोट: नाममात्र प्रवाह दर ट्यूबों के उपयोग और स्थिति के आधार पर थोड़ा भिन्न हो सकती है।

5. नमूना संग्रह

  1. 3 घंटे के अंतराल में अंग कक्ष से पोर्टल नस इनफ्लो ट्यूब और आउटलेट पर्फ्यूसेट नमूने से इनलेट परफ्यूसेट नमूने प्राप्त करें।
  2. 12 घंटे की छिड़काव अवधि के अंत में हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण के लिए सभी यकृत लोब से नमूने एकत्र करें।

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Representative Results

शल्य चिकित्सा प्रक्रिया की स्थापना
इस प्रयोग के लिए कुल 17 जानवरों का उपयोग किया गया था: 14 चूहों को अंग खरीद प्रक्रिया को अनुकूलित करने के लिए नियोजित किया गया था, जिसमें पोर्टल नस (पीवी) और पित्त नली (बीडी) का प्रवेशन शामिल था, जबकि 3 चूहों का उपयोग प्रक्रिया को मान्य करने के लिए किया गया था (तालिका 1)। इष्टतम छिड़काव स्थिति की पहचान की सुविधा के लिए हिस्टोलॉजिकल परिणामों (चित्रा 3) की तुलना की गई थी।

पर्फ्यूसेट का चयन
इस अध्ययन के लिए पहले से उपयोग किए गए हेपेटोसाइट कल्चर माध्यमका चयन किया गया था। विलियम के ई माध्यम को शुरू में विलियम्स और गुन द्वारा परिपक्व चूहे के यकृत उपकलाकोशिकाओं की लंबे समय तक इन विट्रो खेती के लिए सीरम-कम माध्यम के रूप में डिजाइन किया गया था। बहरहाल, इसने कृंतक हेपेटोसाइट्स13 के विकास और रखरखाव का समर्थन करने में भी उपयोगिता पाई है। भ्रूण गोजातीय सीरम (एफबीएस) आवश्यक पोषक तत्वों और विकास कारकों की समृद्ध संरचना के कारण एक व्यापक रूप से नियोजित सेल कल्चर पूरक है जो सेल विकास, प्रसार और व्यवहार्यताकी सुविधा प्रदान करता है। पूर्ण विलियम के ई माध्यम का उपयोग परफ्यूसेट (तालिका 2) के रूप में किया गया था, जिसे 20% भ्रूण गोजातीय सीरम, 1% पेनिसिलिन / स्ट्रेप्टोमाइसिन, 5,000 यू / एल हेपरिन, 50 यू / एल इंसुलिन और 0.010 ग्राम / एल हाइड्रोकार्टिसोन के साथ पूरक किया जाता है।

कैनुला का चयन
कैनुलाप्रक्रिया में पहले पित्त द्रव संग्रह के लिए पित्त नली (बीडी) को प्रवेशनी करना शामिल था, इसके बाद पोर्टल नस (पीवी) का प्रवेशनी शामिल था। बीडी कैनुलाशन के लिए, 0.3 मिमी के बाहरी व्यास और 0.18 मिमी के आंतरिक व्यास के साथ एक यूटी -03 पॉलीप्रोपाइलीन ट्यूब का उपयोग शुरू में किया गया था। हालांकि, संभावित बीडी क्षति के बारे में चिंताओं और छंटनी और कठोर यूटी -03 टिप से जुड़े अनपेक्षित कैथेटर विस्थापन के उच्च जोखिम के कारण, 1 एफआर पॉलीयुरेथेन ट्यूबों को प्राथमिकता दी गई थी। पॉलीयुरेथेन ट्यूब, उनकी नरम सामग्री और कम फिसलन के साथ, बीडी कैनुलाशन के लिए अधिक उपयुक्त माना जाता था।

प्रारंभ में, पोर्टल नस (पीवी) को प्रवेशकरने के लिए 26 ग्राम पॉलीप्रोपाइलीन अंतःशिरा सुई प्रवेशनी का उपयोग किया गया था। हालांकि, सुई को हटाने और छिड़काव ट्यूब के लिए कैनुला के बाद के जुड़ाव के परिणामस्वरूप बुलबुले का निर्माण हुआ, जिसमें इंट्राहेपेटिक साइनसोइड्स को बाधित करने की क्षमता थी। इस मुद्दे को दूर करने के लिए, 2 एफआर पॉलीयुरेथेन कैनुला के डिस्टल 1 सेमी में डाली गई 30 ग्राम सुई का उपयोग करके एक निवास प्रवेशनी का निर्माण किया गया था। इस स्व-निर्मित "सुई-निर्देशित प्रवेशनी" को तब संगम के ऊपर डिस्टल पीवी में डाला गया था। चूंकि कैथेटर पीवी के भीतर स्थित था, ट्यूब को आगे बढ़ाते हुए सुई को धीरे-धीरे वापस ले लिया गया था। स्व-निर्मित प्रवेशनी का अंत कक्ष के अंदर छिड़काव ट्यूब से जुड़ा हुआ था। इस प्रवेशनी तकनीक में एक नरम सामग्री का उपयोग करने से पोत की पिछली दीवार पर चोट के जोखिम को कम करके एक लाभ प्रदान किया गया।

सत्यापन अध्ययन
इनलेट और आउटलेट परफ्यूसेट नमूने पीएच और पोटेशियम के स्तर के निर्धारण के अधीन थे। प्राप्त परिणामों (चित्रा 4) की तुलना हाल के प्रकाशनों15,16,17 में रिपोर्ट किए गए निष्कर्षों से की गई थी। तीन माउस लिवर को ऑक्सीजन युक्त और 12 घंटे के लिए विलियम के ई माध्यम के साथ पूरक किया गया था। इस अवधि के दौरान, 7 - 10 मिमीएचजी का एक स्थिर छिड़काव दबाव लगातार दर्ज किया गया था। औसत पीएच 12 घंटे के छिड़काव के दौरान अपेक्षाकृत स्थिर था और 7.3 और 7.7 के बीच था। छिड़काव अवधि के दौरान औसत पोटेशियम का स्तर भी स्थिर था और 5.9 और 6.8 mmol / L (चित्रा 4) के बीच था। प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं के दौरान पंप ट्यूबों के उपयोग और स्थिति के आधार पर पीवी प्रवाह दर 0.8 - 1.2 एमएल / मिनट / जी की सीमा के भीतर बनाए रखा गया था। माउस यकृत छिड़काव में देखे गए सभी परिणामों ने चूहे के यकृत छिड़काव में पहले रिपोर्ट किए गए अवलोकनों के साथ समानताएं प्रदर्शित कीं (तालिका 3)।

ऊतक के नमूने तीन यकृत (एन = 3) से एकत्र किए गए थे और एचई-स्टेनिंग के लिए अनुकूलित प्रोटोकॉल का उपयोग करके 12 घंटे छिड़काव के अधीन थे, इसके बाद पूरी स्लाइड स्कैनिंग की गई थी। प्रत्येक लिवर लोब को एक संशोधित सुजुकी स्कोर (तालिका 4) का उपयोग करके स्कोर किया गया था। क्लासिक सुजुकी स्कोर18 को तीन अतिरिक्त मापदंडों को शामिल करके बढ़ाया गया था: नाभिक का पाइकनोसिस, वाहिकाओं की टुकड़ी, और साइनसोइड और बड़े वाहिकाओं में एरिथ्रोसाइट्स की उपस्थिति। प्रत्येक पैरामीटर को अनुपस्थित (0), हल्के (1), मध्यम (2), और गंभीर (3) के रूप में वर्गीकृत किया गया था। 0 - 7 के अंतिम स्कोर को अच्छे संरक्षण को प्रतिबिंबित करने के लिए माना जाता था, 8 - 14 को मध्यम संरक्षण के रूप में लिया गया था, और 14 - 21 ने खराब संरक्षण का संकेत दिया था।

संशोधित सुजुकी स्कोर के आधार पर माउस लिवर के संरक्षण का आकलन किया गया था। दो चिकित्सा विशेषज्ञों ने तीन यकृत के सात लोबों की आकृति विज्ञान का एक स्वतंत्र मूल्यांकन किया (चित्रा 5, चित्रा 6, चित्रा 7)। प्रत्येक यकृत लोब के लिए सात लोब स्कोर के औसत की गणना की गई थी; कम स्कोर एक बेहतर संरक्षित यकृत का संकेत देते हैं। विशेषज्ञों द्वारा प्रदान किए गए मूल्यांकन ने उच्च स्तर की सहमति का प्रदर्शन किया। विशेष रूप से, जबकि नाभिक के पाइकोनोसिस के आकलन में दो विशेषज्ञों द्वारा सौंपे गए स्कोर में मामूली विसंगतियां देखी गईं, इन भिन्नताओं ने समग्र स्कोरिंग परिणामों को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित नहीं किया।

सबसे अच्छा, यकृत पैरेन्काइमा एक अच्छी तरह से संरक्षित विशिष्ट लोब्यूलर संरचना के साथ अपेक्षाकृत बरकरार था, जो शायद ही एक सामान्य यकृत से अलग था। हेपेटोसाइट्स स्पष्ट रूप से दिखाई देने वाली कोशिका झिल्ली और गोल नाभिक के साथ व्यवहार्य दिखाई दिए। हालांकि, कुछ नाभिक पाइकोनोसिस से गुजरे, और कुछ यकृत साइनसोइड ्स को थोड़ा पतला किया गया, जिसके परिणामस्वरूप 4 का स्कोर हुआ। (चित्र 3, चित्र 6)

सबसे खराब, लोब्यूलर संरचना विकृत हो गई थी, जिसमें वाहिकाओं को पैरेन्काइमा और कॉन्फ्लुएंट पैरेन्काइमल नेक्रोसिस से अलग किया गया था। सेलुलर स्तर पर, सेलुलर वैक्यूलाइजेशन, और नाभिक पाइकोनोसिस स्पष्ट हो गए, खासकर पेरिसेंट्रल क्षेत्र में। इसके अलावा, हल्के से मध्यम रिक्तीकरण देखा गया था। 30% तक हेपेटोसाइट्स नेक्रोसिस से गुजर रहे थे जिसके परिणामस्वरूप 14 का अधिकतम स्कोर था। (चित्र 3, चित्र 7)

तालिका 1: माउस यकृत छिड़काव मॉडल की चरण-दर-चरण स्थापना। प्रवेशनी के आकार, सामग्री और स्थिति में अंतर के कारण स्थापना प्रक्रिया के दौरान विभिन्न जटिलताओं को देखा गया। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।

तालिका 2: इन विट्रो अंग संरक्षण विधियों की तुलना 15,17,19,20,21,22। विभिन्न भंडारण स्थितियों के तहत पर्फ्यूसेट चयन, ऑक्सीजन वाहक चयन और पोषण घटक तुलना का अनुकूलन महत्वपूर्ण है। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।

तालिका 3: सामान्य चूहों और चूहे एनईवीएलपी में हेमोडायनामिक्स और रक्त गैस विश्लेषण 11,15,16,17,18,20,21,23,24,25,26,27,28,29,30,31। प्रदान की गई जानकारी चुनिंदा रूप से चूहे के यकृत की हेमोडायनामिक विशेषताओं और विट्रो में नॉर्मोथर्मिक छिड़काव के प्रमुख मापदंडों का वर्णन करती है। विशेष रूप से, चूहे के यकृत छिड़काव को इष्टतम माना जा सकता है जब पीवी दबाव आमतौर पर 4 से 10 मिमीएचजी तक होता है, और पीवी में प्रवेश करने वाले परफ्यूसेट में ऑक्सीजन का आंशिक दबाव 80 से 550 मिमीएचजी तक होता है, जो सफल इन विट्रो रैट लिवर छिड़काव के लिए आवश्यक मानदंडों को पूरा करता है। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।

तालिका 4: संशोधित सुजुकी स्कोर। इस अध्ययन में उपयोग किए जाने वाले संशोधित सुजुकी स्कोर तीन अतिरिक्त मापदंडों को शामिल करके क्लासिक सुजुकी स्कोर पर विस्तार करता है: नाभिक का पाइकनोसिस, वाहिकाओं की टुकड़ी, और साइनसोइड्स और बड़े वाहिकाओं में एरिथ्रोसाइट्स की उपस्थिति। प्रत्येक पैरामीटर को 0 (अनुपस्थित), 1 (हल्के), 2 (मध्यम), या 3 (गंभीर) के पैमाने पर एक ग्रेड सौंपा गया था। कुल स्कोर, 0 से 8 तक, अच्छे संरक्षण को इंगित करता है; 9 से 16 मध्यम संरक्षण का सुझाव देते हैं, और 17 से 24 खराब संरक्षण को इंगित करते हैं। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।

तालिका 5: चूहों (2010-2022) में एनईवीएलपी के साहित्य वर्कअप के आधार पर परफ्यूसेट माध्यम, परफ्यूसेट वॉल्यूम और छिड़काव दबाव का चयन (2010-2022)3,8,10,14,17,19,27,30,31,32,33,34,35,36 ,37,38,
39,40,41,42,43,44,45। चूहे के जिगर में नॉर्मोथर्मिक मशीन छिड़काव विशिष्ट प्रकार और उपयोग किए गए परफ्यूसेट की मात्रा के साथ-साथ छिड़काव की अवधि के संदर्भ में अध्ययनों में परिवर्तनशीलता प्रदर्शित कर सकता है। विभिन्न अध्ययन विस्तारित अवधि के लिए डायलिसिस या उच्च-मात्रा छिड़काव जैसे अलग-अलग दृष्टिकोणों को नियोजित कर सकते हैं। हालांकि, इन अंतरों के बावजूद, पोर्टल दबाव, पोर्टल नस प्रवाह दर, और परफ्यूसेट में ऑक्सीजन के आंशिक दबाव जैसे पैरामीटर आम तौर पर नियोजित विभिन्न तरीकों में न्यूनतम भिन्नता प्रदर्शित करते हैं। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें।

Figure 1
चित्र 1: छिड़काव प्रणाली का योजनाबद्ध आरेख। प्रमुख घटक अंग कक्ष, थर्मोस्टैटिक मशीन, रोलर पंप, ऑक्सीजनेटर और जलाशय हैं। पर्फ्यूसेट को जलाशय से एक पेरिस्टालिक पंप द्वारा ऑक्सीजनेटर में पंप किया जाता है। ऑक्सीजनेटर में 95% O2 और 5% CO2 का निर्बाध गैस प्रवाह होता है। परफ्यूसेट बुलबुले के जाल से गुजरता है, जहां परफ्यूसेट में मौजूद किसी भी हवा के बुलबुले को पकड़ लिया जाता है और जलाशय में वापस पंप किया जाता है। शेष पर्फ्यूसेट अंग कक्ष में बहता है, जहां ट्यूब पोर्टल नस से जुड़ा होता है। अंग कक्ष से परफ्यूसेट बहिर्वाह को पेरिस्टालिक पंप द्वारा जलाशय में वापस निर्देशित किया जाता है। पित्त को इकट्ठा करने के लिए एक पित्त जल निकासी ट्यूब को अंग कक्ष से जोड़ा जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: छिड़काव कक्ष का क्लोज-अप। अंग छिड़काव कक्ष में एक परफ्यूसेट इनलेट और आउटलेट, एक बुलबुला जाल, एक हीट एक्सचेंजर और एक पित्त संग्रह बंदरगाह शामिल हैं। दबाव सेंसर का उपयोग करके परफ्यूसेट पंप दबाव की वास्तविक समय की निगरानी पूरी की जाती है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: सामान्य और संक्रमित माउस लिवर के हिस्टोलॉजिकल परिणाम। (ए) सामान्य माउस यकृत आकृति विज्ञान (नियंत्रण)। (बी) छिड़काव के 12 घंटे के बाद एचई-स्टेनिंग द्वारा कल्पना की गई सर्वश्रेष्ठ-संरक्षित आकृति विज्ञान का उदाहरण। (सी) छिड़काव के 12 घंटे के बाद एचई-धुंधला द्वारा कल्पना की गई सबसे खराब संरक्षित आकृति विज्ञान का उदाहरण। काला तीर रिक्तीकरण को इंगित करता है, लाल तीर साइनसॉइडल फैलाव को इंगित करता है, पीला तीर नाभिक के पाइकोनोसिस को दर्शाता है और हरा तीर संवहनी अलगाव को निर्दिष्ट करता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्रा 4: पर्फ्यूसेट विश्लेषण। पीएच (ए) और पोटेशियम का स्तर (बी)। दोनों पैरामीटर 12 घंटे के अवलोकन समय में स्थिर हैं, जो निरंतर छिड़काव स्थितियों का संकेत देते हैं कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 5
चित्रा 5: मामूली जिगर की क्षति जिसके परिणामस्वरूप एक संशोधित सुजुकी स्कोर 4-7 है। एनईवीएलपी के 12 घंटे के बाद, यकृत आकृति विज्ञान का एक अर्ध-मात्रात्मक मूल्यांकन आयोजित किया गया था। प्रत्येक यकृत लोब के नमूनों का मूल्यांकन किया गया और उन्हें अलग से वर्गीकृत किया गया, जिसके परिणामस्वरूप प्रत्येक यकृत के लिए एक सीमा और एक औसत स्कोर था, जिसमें उच्चतम संभव स्कोर 4 था। लिवर लोब (माध्य = 5) के आधार पर 4-7 तक के स्कोर के साथ अच्छी तरह से संरक्षित यकृत आकृति विज्ञान (स्कोर 0-7: अच्छी तरह से संरक्षित यकृत आकृति विज्ञान, स्कोर 8-14 मध्यम संरक्षित आकृति विज्ञान, स्कोर 15-21: खराब-संरक्षित यकृत आकृति विज्ञान) कृपया इस आंकड़े के बड़े संस्करण को देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 6
चित्रा 6: मध्यम जिगर की क्षति जिसके परिणामस्वरूप संशोधित सुजुकी स्कोर 7-14 है। संशोधित सुजुकी स्कोर के अनुसार नॉर्मोथर्मिक ऑक्सीजन युक्त मशीन छिड़काव के 12 घंटे के बाद यकृत आकृति विज्ञान का अर्ध-मात्रात्मक मूल्यांकन। 7 से 14 (माध्य = 11) के स्कोर के साथ मध्यम संरक्षित आकृति विज्ञान। (स्कोर 0-7: अच्छी तरह से संरक्षित यकृत आकृति विज्ञान, स्कोर 8-14 मध्यम संरक्षित आकृति विज्ञान, स्कोर 15-21: खराब संरक्षित यकृत आकृति विज्ञान) कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 7
चित्रा 7: मामूली - मध्यम जिगर की क्षति जिसके परिणामस्वरूप संशोधित सुजुकी स्कोर 5-11 होता है। असंगत छिड़काव के परिणामस्वरूप विभिन्न यकृत लोबों में मामूली से मध्यम संरक्षित आकृति विज्ञान हुआ, जिसमें 5 से 11 (माध्य = 8) तक के स्कोर थे। (स्कोर 0-7: अच्छी तरह से संरक्षित यकृत आकृति विज्ञान, स्कोर 8-14 मध्यम संरक्षित आकृति विज्ञान, स्कोर 15-21: खराब संरक्षित यकृत आकृति विज्ञान) कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

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Discussion

प्रोटोकॉल में महत्वपूर्ण कदम
लिवर एक्सप्लांटेशन में दो महत्वपूर्ण कदम पोर्टल नस (पीवी) का कैनुलाशन और पित्त नली (बीडी) के बाद के प्रवेशनी हैं। सफल अंग पुनर्प्राप्ति और बाद में छिड़काव या प्रत्यारोपण प्रक्रियाओं को सुनिश्चित करने में इन चरणों का अत्यधिक महत्व है।

चुनौतियां और समाधान
पीवी कैनुलाशन तीन चुनौतियां प्रस्तुत करता है: पोत की दीवार की चोट, कैथेटर का विस्थापन, और सम्मिलन प्रक्रिया की व्यावहारिकता। पीवी पोत की दीवार की नाजुक प्रकृति इसे पंचर और बाद में रक्तस्राव के लिए अतिसंवेदनशील बनाती है यदि कैनुलेशन के दौरान सावधानी से संभाला नहीं जाता है। इसके अलावा, पीवी से किसी भी रक्त की हानि पोर्टल दबाव को कम करती है, जिससे पीवी कैनुला डालना अधिक चुनौतीपूर्ण हो जाता है। इसके अलावा, पोर्टल शिरापरक दीवार पर चोट इंट्राहेपेटिक संवहनी प्रणाली में वायु एम्बोली पेश कर सकती है। इसलिए, जटिलताओं के जोखिम को कम करने के लिए पीवी कैनुलाशन प्रक्रिया के दौरान परिशुद्धता और सावधानी बरतना महत्वपूर्ण है।

पीवी कैनुलाशन के दौरान, कैथेटर विस्थापन का खतरा एक आम चिंता का विषय है, खासकर जब फिसलन सामग्री के साथ कैनुला का उपयोग किया जाता है। पॉलीप्रोपाइलीन की तुलना में, पॉलीयुरेथेन कैनुला का उपयोग पीवी कैनुलाशन के लिए अधिक अनुकूल है। पॉलीयुरेथेन की नरम और व्यवहार्य प्रकृति कैथेटर विस्थापन या हानि के जोखिम को काफी कम कर देती है, संभावित रूप से इसके भौतिक गुणों के लिए जिम्मेदार ठहराया जाता है। इसके अतिरिक्त, एक नरम प्रवेशनी का उपयोग रक्त वाहिकाओं की एंडोथेलियल परत को नुकसान पहुंचाने की संभावना को कम करता है। अध्ययन में, पीवी कैनुलाशन के लिए तीन प्रकार के संवहनी पहुंच प्रवेशनी, अर्थात् 24 ग्राम पॉलीप्रोपाइलीन, 26 ग्राम पॉलीप्रोपाइलीन और 2 एफआर पॉलीयुरेथेन की तुलना की गई थी। इन विकल्पों में, 26 जी और 2 एफआर पॉलीयुरेथेन कैनुला दोनों ने माउस पीवी के आकार के साथ बेहतर संगतता का प्रदर्शन किया। जबकि 26 जी कैनुला ने बेहतर शारीरिक संगतता का प्रदर्शन किया, 0.66 मिमी के बाहरी व्यास के साथ 2 एफआर पॉलीयुरेथेन कैनुला को इसके अद्वितीय भौतिक गुणों के कारण इच्छित अनुप्रयोग के लिए उपयुक्त माना गया, जिससे पीवी से अनजाने कैथेटर के विघटन का खतरा प्रभावी ढंग से कम हो गया।

सम्मिलन की व्यावहारिकता के बारे में, विभिन्न तकनीकों का परीक्षण किया गया था। एक तरीका पीवी के समीपस्थ और डिस्टल सिरों को दबाना है, ठीक कैंची के साथ एक छोटा छेद काटना है, और पीवी कैनुला डालना है। इस तकनीक को जटिलता और एक साथ कार्यों की आवश्यकता के कारण एक अतिरिक्त व्यक्ति की भागीदारी की आवश्यकता होती है। नतीजतन, एकल माइक्रोसर्जन के लिए स्वतंत्र रूप से प्रक्रिया करना संभव नहीं है। इसलिए, एक आंतरिक सुई और एक बाहरी प्रवेशनी के साथ एक कैथेटर की आवश्यकता होती है। जैसा कि पहले वर्णित है, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध कठोर और चिकनी 26 ग्राम पॉलीप्रोपाइलीन कैनुला का उपयोग करने से बाहर फिसलने और प्रवेशनी को फ्लशिंग सिस्टम से जोड़ने पर हवा के बुलबुले के गठन का खतरा होता है। इन चिंताओं को दूर करने के लिए, एक स्व-निर्मित "सुई-निर्देशित ट्यूब सिस्टम" तैयार किया गया था, जिसमें सुई कैथेटर से 26 ग्राम सुई को एक लंबी और व्यवहार्य पॉलीयुरेथेन 2 एफआर कैनुला में डाला गया था। यह दृष्टिकोण तीन प्रमुख लाभ प्रदान करता है: (1) एक कैथेटर-सम्मिलन प्रणाली, (2) एक लंबी और लचीली ट्यूब, और (3) अनुकूल सामग्री गुण। हालांकि, इस चरण के दौरान, सुई की नोक को आगे बढ़ने के दौरान पीवी दीवार से संपर्क करने से रोकने के लिए सावधानी बरतना महत्वपूर्ण है, क्योंकि इससे पोत की दीवार को अपरिवर्तनीय नुकसान हो सकता है।

बीडी कैनुलाशन ने एक ही तीन चुनौतियां प्रस्तुत कीं: पोत की दीवार की चोट, कैथेटर का विस्थापन, और सम्मिलन प्रक्रिया की व्यावहारिकता। अंततः, 1 एफआर पॉलीयुरेथेन कैनुला को अपने अनुकूल भौतिक गुणों के कारण यूटी - 03 पॉलीप्रोपाइलीन कैनुला की तुलना में अधिक उपयुक्त माना गया था। 1 एफआर थर्मो-संवेदनशील पॉलीयुरेथेन ट्यूब (0.33 मिमी) की तुलना में यूटी - 03 कैनुला (0.30 मिमी) के थोड़े छोटे बाहरी व्यास के बावजूद, पॉलीयुरेथेन सामग्री कठोर है और झुकने के लिए कम प्रवण है। दूसरी ओर, 1 एफआर कैनुला, नरम और लचीला होने के नाते, आसान सम्मिलन प्रदान करता है और इस प्रकार हमारा पसंदीदा विकल्प बन गया। हालांकि, ऐसे मामलों में जहां बीडी आकार असाधारण रूप से छोटा है और बड़े 2 एफआर कैनुला को समायोजित करने में असमर्थ है, यूटी - 03 कैनुला एक व्यवहार्य विकल्प बना हुआ है। ऐसे उदाहरणों में, बीडी से कैनुला के विस्थापन को रोकने के लिए विशेष ध्यान दिया जाना चाहिए।

जैसा कि साहित्य समीक्षा (तालिका 5) में संक्षेप ति किया गया है, अधिकांश प्रयोगकर्ताओं 19,41,42,46 ने 1 - 3 एमएल / मिनट / जी यकृत की पोर्टल प्रवाह दर का उपयोग किया। हालांकि, 4 - 10 मिमीएचजी28 की सीमा में शारीरिक पोर्टल दबाव को बनाए रखने के लिए प्रवाह दर को समायोजित किया जाना चाहिए। उच्च पीवी दबाव साइनसोइडल फैलाव और संवहनी अलगाव का कारण बन सकता है। कम पीवी दबाव और कम पीवी प्रवाह दर के परिणामस्वरूप बाद में मध्य-जोनल से पेरिसेंट्रल नेक्रोसिस के साथ कम प्रवाह हाइपो-ऑक्सीकरण हो सकता है। पीवी प्रवाह दर का हेरफेर पीवी दबाव को विनियमित करने का कार्य करता है, जो उपयोग किए गए कैनुला और यकृत के आकार के अनुसार भिन्न हो सकता है, इस प्रकार पीवी प्रवाह दर में मामूली समायोजन की आवश्यकता होती है। इसलिए, इस अध्ययन में, छिड़काव 1 एमएल / मिनट / जी यकृत की प्रवाह दर पर शुरू किया गया था, और साथ ही, प्रवाह दर को समायोजित करके शारीरिक पीवी दबाव को बनाए रखने के लिए रक्तचाप ट्रांसड्यूसर का उपयोग करके पीवी दबाव की निगरानी की गई थी।

विकास एनईवीएलपी मॉडल के दौरान, परफ्यूसेट में धुले हुए लाल रक्त कोशिकाओं को जोड़कर संक्रमित यकृत को ऑक्सीजन की आपूर्ति में और सुधार करने का प्रयास किया गया था। फिर भी, बड़े कक्ष और जलाशय में एरिथ्रोसाइट्स का महत्वपूर्ण अवसादन देखा गया, जिससे छिड़काव के दौरान अंग को ऑक्सीजन वाहक की डिलीवरी कम हो गई। इसके अलावा, एरिथ्रोसाइट्स को नुकसान पेरिस्टाल्टिक छिड़काव पंप की यांत्रिक कार्रवाई के कारण हुआ था, जो सिलिकॉन ट्यूब को संपीड़ित करके परफ्यूसेट को चलाता है। दोनों कारणों ने इस प्रयोग में लाल रक्त कोशिकाओं का उपयोग नहीं करने के हमारे निर्णय को सुविधाजनक बनाया। परफ्लोरोकार्बन आधारित ऑक्सीजन वाहकइन समस्याओं को हल करने में सक्षम हो सकते हैं।

छिड़काव के दौरान यकृत ग्राफ्ट की व्यवहार्यता का आकलन करने के लिए, माउस पित्त द्रव 3 घंटे के अंतराल पर एकत्र किया गया था। फिर भी, माउस पित्त द्रव की उच्च चिपचिपाहट के कारण कैथेटर के माध्यम से पित्त एकत्र करना मुश्किल है। यह शुरू में बीडी में रखे गए ठीक 1 एफआर पॉलीयुरेथेन कैथेटर द्वारा प्रेरित केशिका बलों द्वारा क्षतिपूर्ति की जाती है। हालांकि, प्रयोग के पहले घंटे के भीतर पित्त द्रव के केवल 20 μL एकत्र किए जा सकते हैं। कैनुला के माध्यम से सूखा करने के बजाय, पित्ताशय की थैली का प्रतिगामी भराव देखा गया।

12 घंटे की छिड़काव अवधि के अंत में, पित्ताशय की थैली स्पष्ट पित्त द्रव से भरी हुई थी जो मशीन छिड़काव के दौरान सक्रिय पित्त उत्पादन का सुझाव देती है। पित्ताशय में एक बड़ी ट्यूब रखकर इसका संभावित रूप से मुकाबला किया जा सकता है।

इस बीच, संरक्षण के परिणाम को निर्धारित करने के लिए यकृत सेलुलर और लोब्यूलर संरचना की हिस्टोलॉजिकल क्षति का आकलन किया गया था। यह देखा गया कि एक ही यकृत के भीतर भी, संरक्षण असमान था। संरचनात्मक परिवर्तनों की असमानता से पता चलता है कि छिड़काव पूरे यकृत में विषम था (चित्रा 5, चित्रा 6, चित्रा 7)। इसके अलावा, हिस्टोलॉजिकल निष्कर्ष सबूत प्रदान करते हैं कि मशीन छिड़काव के दौरान 12 घंटे की न्यूनतम अवधि के लिए माउस लिवर ग्राफ्ट की संरचनात्मक अखंडता को संरक्षित करना व्यवहार्य है। हालांकि, बरकरार यकृत हिस्टोलॉजी की उपस्थिति केवल मूल्यांकन में सहायता कर सकती है लेकिन यकृत के कार्य और व्यवहार्यता को निश्चित रूप से निर्धारित नहीं कर सकती है। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि नेक्रोसिस, सेलुलर क्षति की अंतिम अभिव्यक्ति के रूप में, बाद के चरण तक आसानी से देखने योग्य नहीं हो सकता है। इस प्रकार, पूरी तरह से हिस्टोलॉजिकल मूल्यांकन पर निर्भर रहना यकृत की कार्यात्मक स्थिति और व्यवहार्यता की व्यापक समझ प्रदान नहीं कर सकता है। यकृत की समग्र स्थिति का पता लगाने के लिए अन्य पूरक परख और मूल्यांकन की आवश्यकता होती है, जिसमें कार्यात्मक परख, जैव रासायनिक मार्कर और चयापचय गतिविधि का मूल्यांकन शामिल है।

छिड़काव के 12 घंटे बाद अच्छा संरक्षण हासिल किया गया था। हालांकि, अंग की मरम्मत के लिए संभवतः आवश्यक छिड़काव समय को आगे बढ़ाने के लिए कुछ मुद्दों को संबोधित करने की आवश्यकता है। सबसे पहले, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि 12 घंटे से अधिक लंबी अवधि की छिड़काव अवधि प्राप्त करने के लिए केवल स्वच्छ परिस्थितियों के बजाय बाँझ स्थितियों को बनाए रखने की आवश्यकता होगी। हालांकि, इन प्रारंभिक प्रयोगों में, बाँझ स्थितियों के बजाय स्वच्छ परिस्थितियों को बनाए रखने पर ध्यान केंद्रित किया गया था, क्योंकि बाँझपन सुनिश्चित करने से प्रक्रिया में अतिरिक्त जटिलताएं आएंगी। दूसरे, लंबे समय तक छिड़काव के लिए संभवतः डायलिसिस यूनिट को जोड़ने की आवश्यकता होगी, जैसा कि हरमन टोलबूम22 द्वारा वर्णित है, विषाक्त चयापचय अपशिष्ट उत्पादों को जमा करने से हटाने के लिए। उन्होंने 4 घंटे के लिए 10 ग्राम के चूहे के जिगर को प्रतिरक्षित करने के लिए 55 - 60 एमएल की कुल मात्रा के साथ एक प्रणाली का उपयोग किया। इस अध्ययन में, माउस यकृत के छोटे आकार के बावजूद 300 एमएल की कुल मात्रा के साथ एक अपेक्षाकृत बड़े जलाशय का उपयोग किया गया था, जिसका वजन लगभग 1 ग्राम है। इस विन्यास के परिणामस्वरूप 50 गुना का एक अतिरिक्त कमजोर कारक हुआ। उल्लेखनीय रूप से, इस सेटअप के साथ 12 घंटे की छिड़काव अवधि के दौरान कोई हानिकारक प्रभाव नहीं देखा गया था। तीसरा, लंबे समय तक छिड़काव के लिए पर्याप्त ऑक्सीजन आपूर्ति सुनिश्चित करने के लिए कृत्रिम हीमोग्लोबिन के रूप में ऑक्सीजन वाहक को जोड़ने की भी आवश्यकता होगी, जैसा कि डोनडोसोला एट अल.47 और जेगर्स एट अल.48 द्वारा वर्णित है।

एनईवीएलपी पर आधारित "गैर-इस्केमिक" यकृत प्रत्यारोपण के विकास ने निस्संदेह इस्किमिया-रीपरफ्यूजन चोट की समस्या को हल करने या यहां तक कि रोकने की दिशा में नए विचारों और तरीकों को लाया है। तथापि, एनईवीएलपी अंग परिरक्षण में सुधार लाने और अंग मरम्मत के लिए अंग संरक्षण का विस्तार करने के लिए इसके संभावित अनुप्रयोग के लिए एक बहुत ही आशाजनक अवधारणाहै।

वर्तमान में, मशीन छिड़काव की तीन अलग-अलग तकनीकों का उपयोग प्रयोगात्मक और चिकित्सकीय रूप से किया जाता है। मुख्य अंतर काम करने का तापमान है: हाइपोथर्मिक मशीन छिड़काव, सबनोमोथर्मिक मशीन छिड़काव, और नॉर्मोथर्मिक मशीन छिड़काव (तालिका 2)। अन्य अंतरों में संरक्षण समाधान की पसंद, परफ्यूसेट समाधान और ऑक्सीजन वाहक के अतिरिक्त शामिल हैं (तालिका 5)।

एनईवीएलपी मुख्य रूप से लाभ का है क्योंकि (1) अंग को अपने सामान्य तापमान पर बनाए रखा जाता है, (2) यह ऑक्सीजन युक्त होता है और (3) यह चयापचय रूप से पूरी तरह से आपूर्ति की जाती है। प्रणाली नैदानिक मूल्यांकन, हस्तक्षेप चिकित्सा और अंततः अंग की मरम्मतके लिए एक उत्कृष्ट मंच प्रदान करती है। हालांकि, एनईवीएलपी पूर्व विवो अंग समर्थन प्रौद्योगिकी के लिए एक बड़ी चुनौती है। एनईवीएलपी के लिए चुनौती निकट-शारीरिक स्थिति को प्रतिबिंबित करना है। हाल तक, छोटे आकार और मानक मूल्यांकन मानदंडों की कमी के कारण, केवल सीमित संख्या में कृंतक एनईवीएलपी अध्ययन 25,26,27,28,29,30,31 किए गए थे।

यहां यह प्रदर्शित किया गया है कि माउस मॉडल एक वैध मॉडल है जो 12 घंटे के संरक्षण समय की अनुमति देता है। इसकी तुलना में, अधिकांश चूहे के अध्ययनों ने 6 घंटे या उससे कम28,33 के छिड़काव समय की सूचना दी है। इसके अलावा, प्रचुर मात्रा में अभिकर्मकों की उपलब्धता और कम प्रयोगात्मक लागत के कारण बड़े जानवरों की तुलना में आणविक अध्ययन के लिए छोटे जानवरों का उपयोग लाभ का है। उदाहरण के लिए, चूहे वर्तमान में एटीजी जीन परिवार के नॉकआउट मॉडल के परीक्षण के लिए एक बेहतर विकल्प हैं, विशेष रूप से यकृत 8,50 में इस्किमिया-रीपरफ्यूजन चोट के सिग्नलिंग मार्गों का अध्ययन करने के लिए।

एनईवीएलपी के संबंध में चूहे के यकृत पर प्रयोगों से पता चला है कि नॉर्मोथर्मिक मशीन छिड़काव संरक्षण कम हेपेटोसेलुलर क्षति के साथ जुड़ा हुआ है और ठंड संरक्षण 31,40,51,52,53,54 की तुलना में प्रत्यारोपण के बाद के शुरुआती अस्तित्व में सुधार हुआ है। चूहे के यकृत का उपयोग करने वाला एनईवीएलपी भी परफ्यूसेट में दवाओं या कोशिकाओं के परिवर्धन का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त है। एक प्रभावशाली उदाहरण जुआन तियान26 का अध्ययन है, जिन्होंने डब्ल्यूएनटी सिग्नलिंग मार्ग के माध्यम से यकृत ग्राफ्ट की गुणवत्ता में सुधार करने के लिए नॉर्मोथर्मिक मशीन छिड़काव के साथ संयुक्त हेम ऑक्सीजनेज -1 संशोधित मेसेनकाइमल स्टेम कोशिकाओं का उपयोग किया। 39 वर्षीय हाओजी वांग ने अपने हालिया अध्ययन में पुष्टि की है कि परफ्यूसेट में अस्थि मज्जा मेसेनकाइमल स्टेम कोशिकाओं को जोड़ने से कम समय के छिड़काव के लिए चूहों में एनईवीएलपी की गुणवत्ता में काफी सुधार हो सकता है। डीसीडी लिवर का उपयोग करके अपने अध्ययन में, एनईवीएलपी के साथ संयुक्त अस्थि मज्जा मेसेनकाइमल स्टेम कोशिकाओं ने यकृत साइनसॉइडल भीड़ और एंडोथेलियल चोट को रोक दिया। मेसेनकाइमल स्टेम कोशिकाओं के अलावा इंट्राहेपेटिक मैक्रोफेज सक्रियण और अंतरकोशिकीय आसंजन को रोका। इसके अलावा, मेसेनकाइमल स्टेम कोशिकाओं के अलावा यकृत छिड़काव और माइक्रोसर्कुलेशन में सुधार के लिए एंडोथेलिन -1 / एंडोथेलियल नाइट्रिक ऑक्साइड संतुलन को विनियमित किया गया।

जब एनईवीएलपी की बात आती है तो चूहे चूहों पर एक अलग लाभ प्रदान करते हैं, विशेष रूप से ट्रांसजेनिक या आनुवंशिक रूप से संशोधित यकृत पर केंद्रित आणविक अध्ययन के संदर्भ में। हालांकि, जानवर के छोटे आकार के कारण, प्रक्रिया माइक्रोसर्जन37 के लिए एक बड़ी लेकिन प्रबंधनीय चुनौती है।

हिस्टोलॉजिकल मूल्यांकन के लिए ग्रेडिंग प्रणाली
ग्राफ्ट की रूपात्मक अखंडता पर छिड़काव स्थितियों के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए हिस्टोलॉजिकल मूल्यांकन निर्णायक है।

जबकि सुजुकी स्कोर आमतौर पर यकृत विकृति का आकलन करने वाले अध्ययनों में उपयोग किया जाता है, यह ध्यान दिया गया है कि यह स्कोरिंग सिस्टम पूर्व-विवो यकृत संरक्षण में देखे गए विशिष्ट निष्कर्षों को पर्याप्त रूप से कैप्चर नहीं कर सकता है। इस सीमा को संबोधित करने के लिए, संरक्षित यकृत ऊतक के व्यापक मूल्यांकन को बढ़ाने के लिए चार अतिरिक्त मानदंड पेश किए गए थे (तालिका 4)। सबसे पहले, परमाणु पाइकोनोसिस मूल्यांकन को शामिल करना लागू किया गया था, क्योंकि यह सेलुलर क्षति के एक मूल्यवान पैरामीटर संकेतक के रूप में कार्य करता है। दूसरे, पोत और हेपेटोसाइट डिटेचमेंट का मूल्यांकन, जो यकृत लोब्यूल को नुकसान का संकेत देता है, को एक अतिरिक्त मानदंड के रूप में शामिल किया गया था। अंत में, साइनसोइड्स में एरिथ्रोसाइट्स की उपस्थिति की ग्रेडिंग का उपयोग विषम फ्लशिंग और छिड़काव के संकेतक के रूप में किया गया था। इन पूरक मानदंडों को शामिल करके, संरक्षित यकृत ऊतक की स्थिति का अधिक सूक्ष्म और सटीक मूल्यांकन प्राप्त किया गया था, जो पूर्व-विवो यकृत संरक्षण के प्रभावों की गहरी समझ प्रदान करता है।

हेपेटोसाइट वैक्यूलाइजेशन55 सब्सट्रेट उपयोग, ऊर्जा व्यय, सूक्ष्मनलिका विघटन और प्रोटीन संश्लेषण के निषेध में परिवर्तन के बाद होता है। हेपेटोसाइट के नाभिक को बड़े रिक्तिकाओं द्वारा कोशिका की परिधि की ओर स्थानांतरित करने के लिए मजबूर किया जाता है। यह प्रक्रिया अक्सर परमाणु पाइकोनोसिस के साथ होती है। इस अध्ययन में, 12 घंटे के नॉर्मोथर्मिक मशीन छिड़काव ने असंगत छिड़काव का सुझाव देने वाले नियंत्रण की तुलना में हेपेटोसाइट्स के रिक्तीकरण की विभिन्न डिग्री का नेतृत्व किया।

इस अध्ययन में हेपेटोसाइट डोरियों के बीच पतला साइनसोइड ्स की उपस्थिति उल्लेखनीय थी। यह घटना मुख्य रूप से यकृत शिरापरक बहिर्वाह रुकावट से उत्पन्न होती है, जिससे यकृत पैरेन्काइमा के भीतर संवहनी ठहराव और भीड़ होती है। इस माउस लिवर मॉडल में, अंग के छोटे आकार के कारण एक सुसंगत पोर्टल छिड़काव दबाव बनाए रखने से जुड़ी चुनौतियां यकृत साइनसोइड के देखे गए फैलाव में योगदान कर सकती हैं।

नेक्रोटिक परिवर्तन आमतौर पर सेल क्लस्टर, क्षेत्रीय क्षेत्रों या विशिष्ट क्षेत्रों में प्रकट होते हैं। अच्छी तरह से संक्रमित पेरिपोर्टल क्षेत्र ने पेरिसेंट्रल क्षेत्र की तुलना में हेपेटोसाइट्स के अपेक्षाकृत बेहतर संरक्षण का प्रदर्शन किया। दोहरे पोत यकृत छिड़काव, जैसा कि चूहे के यकृत20 में दिखाया गया है, यकृत धमनी के छोटे आकार के कारण माउस यकृत में एक बड़ी चुनौती प्रस्तुत करता है। नतीजतन, माउस यकृत के देखे गए असंगत छिड़काव को कम से कम आंशिक रूप से, इस सीमा के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है।

ये अवलोकन एनईवीएलपी से गुजरने वाले माउस लिवर के लिए अनन्य नहीं हैं, लेकिन अन्य एनईवीएलपी अध्ययनों से हिस्टोलॉजिकल छवियों में भी कल्पना की जा सकती है, हालांकि उन्हें स्पष्ट रूप से वर्णित नहीं किया जा सकता है।

माउस NEVLP का महत्व और संभावित अनुप्रयोग
माउस लिवर का एनईवीएलपी एक चुनौतीपूर्ण लेकिन व्यवहार्य प्रक्रिया है। एनईवीएलपी के लाभकारी प्रभाव के अंतर्निहित तंत्र को स्पष्ट करने के लिए इस तकनीक का सर्वोत्तम उपयोग करने के लिए और प्रयासों की आवश्यकता है। हमारे ज्ञान को बढ़ाने से इस तकनीक के प्रगतिशील विकास की सुविधा होगी, इसे अंग संरक्षण से परे "अंग मरम्मत" के दायरे में स्थानांतरित किया जाएगा।

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Disclosures

खुलासा करने के लिए हितों का कोई वित्तीय टकराव नहीं है।

Acknowledgments

इस पत्र के लेखन के दौरान, मुझे बहुत समर्थन और सहायता मिली है। मैं विशेष रूप से अपने टीम के साथी शिनपेई चेन को मेरे ऑपरेशन के दौरान उनके अद्भुत सहयोग और रोगी समर्थन के लिए स्वीकार करना चाहता हूं।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
0.5 ml Micro Tube PP Sarstedt 72699
1 Fr Rubber Cannula Vygon Sample Cannula
10 µL Micro Syringe Hamilton 701N
2 Fr Rubber Cannula Vygon Sample Cannula
24 G Butterfly Cannula Terumo SR+OF2419
26 G Butterfly Cannula Terumo SR+DU2619WX
30 G Hypodermic Needle Sterican 100246
50 ml Syringe Pump Braun 110356
6-0 Perma-Hand Seide Ethicon 639H
Arterial Clip Braun BH014R
Autoclavable Moist Chamber Hugo Sachs Elektronik 73-4733
Big Cotton Applicator  NOBA Verbandmittel Danz GmbH 974018
Bubble Trap Hugo-Sachs-Elektronik V83163
Buprenovet (0.3 mg / ml) Elanco /
CIDEX OPA solution (2 L) Cilag GmbH 20391
Electrosurgical Unit for Monopolar Cutting VIO® 50 C ERBE /
Fetal Bovine Serum(500 ml)  Sigma-Aldrich F7524-500ML
Gas Mixture (95 % oxygen & 5 % carbon dioxide) House Supply /
Heating Circulating Baths Harvard-Apparatus 75-0310
Heparin 5000 (I.E. /5 ml) Braun 1708.00.00
Hydrocortisone (100 mg / 2 ml) Pfizer 15427276
Insulin(100 IE / ml) Sigma I0516-5ML
Iris Scissors  Fine Science Instruments 15000-03
Isofluran (250 ml) Cp-Pharma 1214
Membrane Oxygenator Hugo Sachs Elektronik T18728
Microsurgery Microscope  Leica M60
Mouse Retractor Set  Carfil Quality 180000056
NanoZoomer 2.0 HT Hamamatsu /
Non-Woven Sponges  Kompressen 866110
Penicillin Streptomycin (1 mg / ml)  C.C.Pro Z-13-M
Perfusion Extension Tube (30 cm) Braun 4256000
Peristaltic Pump Harvard-Apparatus P-70
Petri Dishc 100x15 mm VWR® 391-0578
Povidon-Jod (Vet-Sep Spray) Livisto 799-416
Pressure Transducer Simulator UTAH Medical Products 650-950
Reusable Blood Pressure Transducers AD Instruments MLT-0380/D
S & T Vessel Cannulation Forceps Fine Science Instruments 00608-11
Small Cotton Applicator NOBA Verbandmittel Danz GmbH 974116
Straight Forceps 10 cm  Fine Science Instruments 00632-11
Suture Tying Forceps Fine Science Instruments 11063-07
Syringe 50ml Original Perfusor Braun 8728810F-06
UT - 03 Cannula Unique Medical, Japan /
Vannas Spring Scissors Fine Science Instruments 15018-10
Veterinary Saline (500 ml) WDT 18X1807
Water Jacketed Reservoir  2 L Harvard-Apparatus 73-3441
William's E Medium (500 ML) Thermofischer Scientific A1217601

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Chen, H., Dirsch, O., Albadry, M., Ana, P. H., Dahmen, U. Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse. J. Vis. Exp. (199), e65363, doi:10.3791/65363 (2023).

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