תא בודד electroporation (SCE) היא טכניקה מיוחדת המאפשרת משלוח של ה-DNA או מקרומולקולות אחרים לתוך תאים בודדים בתוך הרקמה בשלמותה, כולל ההכנות vivo. כאן אנו בפירוט את הליך SCE של פלורסנט לצבוע או פלסמיד דנ"א לתוך הנוירונים במוח שלם של laevis Xenopus הראשן.
Abstract
תא בודד electroporation (SCE) היא טכניקה מיוחדת המאפשרת העברה של דנ"א או מקרומולקולות אחרים לתוך תאים בודדים בתוך הרקמה בשלמותה, כולל ההכנות vivo. היתרון הברור של שיטה זו הוא כי מניפולציות הניסוי עשוי להתבצע על תאים בודדים תוך השארת הרקמה שמסביב ללא שינוי, ובכך להבדיל תאים אוטונומיים תופעות הנובעות מאותם טיפולים העולמי. בשילוב עם טכניקות מתקדמות vivo הדמיה, SCE של סמנים ניאון היתרי להדמיה ישירה של מורפולוגיה הסלולר, גדילת התאים, והאירועים תאיים על לוחות הזמנים החל שניות ימים. בעוד טכניקה זו משמשת במגוון in vivo וההכנות vivo לשעבר, יש לנו אופטימיזציה טכניקה זו לשימוש הראשנים Xenopus laevis. במאמר זה וידאו, אנחנו בפירוט את הליך SCE של פלורסנט לצבוע או פלסמיד דנ"א לתוך הנוירונים במוח שלם של לבקנים Xenopus הראשן. כמו כן, אנו לדון בשיטות כדי לייעל תשואה, ולהראות דוגמאות הדמיה שני הפוטונים לחיות הקרינה של נוירונים שכותרתו fluorescently ידי SCE.
Protocol
ציוד הגדרת: הציוד החשמלי הנדרש בטכניקה זו הם ממריץ, אוסצילוסקופ, ומחזיק micropipette מצויד חוט כסף כדי להיות מוכנס לתוך micropipette. אנו משתמשים בדרך כלל מכשירים אקסון Axoporator 800A ממריץ, אולם לגירוי נפוצים אחרים, כגון מכשירים גראס SD9…
Discussion
תא בודד electroporation (SCE) הוא כלי רב עוצמה לקביעת תפקוד הגן וביצוע מניפולציה גנטית ממוקדות. השקיפות של הראשן לבקן ואת הנגישות של המוח להפוך את מערכת מודל אידיאלי עבור הדמיה צמיחה עצבי ואירועים תאיים בתוך אורגניזם חי. SCE מאפשרת ויזואליזציה של צמיחה של נוירון בודד, ולבצע מניפולציות תאי?…
Acknowledgements
המחברים מודים Sharmin חוסיין לצמיחה זמן לשגות את הסרט לכידת של נוירון בשלה דרק Dunfield לתמונות במיקרוסקופ אלקטרונים של טיפים SCE micromicropipette.
Hewapathirane, D. S., Haas, K. Single Cell Electroporation in vivo within the Intact Developing Brain. J. Vis. Exp. (17), e705, doi:10.3791/705 (2008).