在体内的单细胞电穿孔内完整的大脑发育
Summary
单细胞电（SCE）是一个专门的技术，允许交付到单个细胞内完整的组织，在体内的准备工作，包括的DNA或其他大分子。在这里，我们标准煤荧光染料或成爪蟾蝌蚪的完整的大脑内的神经细胞的质粒DNA的详细过程。
Abstract
单细胞电（SCE），是一家专业的技术，使DNA或其他大分子成单个细胞内完整的组织，在体内的准备工作，包括交付。这项技术的独特优势是，实验操作，可对单个细胞，同时使周围组织保持不变，从而区别于那些导致全球治疗的细胞自主的效果。拥有先进的体内成像技术相结合时，荧光标记标准煤许可证的细胞形态，细胞生长，细胞内事件从几秒钟到几天不等的时间尺度，直接可视化。虽然这种技术是使用各种在体内和体外的准备，我们在爪蟾蝌蚪的使用这种技术进行了优化。在这个视频文章中，我们详细标准煤荧光染料或白化非洲爪蟾蝌蚪的完整的大脑内的神经细胞的质粒DNA的过程。我们还讨论了方法，以优化产量，并显示由SCE荧光标记的神经元的活的双光子荧光成像的例子。
Protocol
设备设置： 这种技术所需的电气设备是一个刺激器，示波器和微量架配有一个银色的线插入到微。我们通常使用一个轴突文书Axoporator 800A刺激，但如草文书等共同刺激SD9刺激，也适用于单细胞电穿孔。刺激器的探头，放在里面的玻璃内部进行解决方案含有微量的银线电极接口连接。从刺激导致连接到示波器的输入端，还接收来自外部的蝌蚪地面的输入。蝌蚪外部接地电紧张的蝌蚪在电接触…
Discussion
单细胞电（SCE）是一个强大的工具用于确定基因功能，并进行有针对性的基因操纵。白化蝌蚪的透明度和大脑的辅助功能，使这个模型系统，非常适合用于可视化的神经细胞生长和细胞内事件，在活的有机体。 SCE允许可视化的单个神经元的生长，并执行一个不变的大脑内的细胞自主操作。虽然这种视频文章演示了单细胞电在爪蟾蝌蚪的过程，这种技术已被用于在其他生物中，也一直在海马脑片和游离细胞培养使…
Acknowledgements
作者感谢Sharmin侯赛因时间推移电影捕获一个不成熟的神经元和德里克Dunfield增长标准煤micromicropipette提示的电子显微镜图像。
References
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Tags
Single-cell ElectroporationIn VivoIntact Developing BrainDNA DeliveryMacromoleculesIndividual CellsExperimental ManipulationsCell-autonomous EffectsGlobal TreatmentsIn Vivo Imaging TechniquesFluorescent MarkersCellular MorphologyCell GrowthIntracellular EventsXenopus Laevis TadpolesVideo ArticleProcedure For SCEFluorescent DyePlasmid DNANeuronsAlbino Xenopus TadpoleYield OptimizationTwo-photon Fluorescence Imaging
Cite This Article
Hewapathirane, D. S., Haas, K. Single Cell Electroporation in vivo within the Intact Developing Brain. J. Vis. Exp. (17), e705, doi:10.3791/705 (2008).