無傷の開発脳内の生体内の単一細胞のエレクトロポレーション
Summary
単一細胞電気穿孔（SCE）は、in vivoでの製剤を含む無傷の組織内の個々の細胞へのDNAや他の高分子の配信を可能にする特殊な技術です。アフリカツメガエルオタマジャクシの無傷の脳内の神経細胞への蛍光色素またはプラスミドDNAのSCEのためここでは、詳細手順を。
Abstract
単一細胞電気穿孔（SCE）は、in vivoでの製剤を含む無傷の組織内の個々の細胞へのDNAや他の高分子の配信を可能にする特殊な技術です。この手法の明確な利点は、グローバルな治療から生じるものから、周囲の組織変更されず、それによって特徴的な細胞自律的な効果を残したまま、実験操作が個々のセルで実行される可能性があるということです。 in vivoイメージング技術の高度と組み合わせると、蛍光マーカーのSCEは、細胞形態、細胞増殖、および秒から数日に及ぶ時間スケール上の細胞内イベントの直接可視化を可能にします。この手法は、生体内と生体外での準備での様々な使用されているが、我々はアフリカツメガエルのオタマジャクシで使用するためにこの手法を最適化してきました。このビデオの記事で、我々は詳細アルビノアフリカツメガエルオタマジャクシの無傷の脳内の神経細胞への蛍光色素またはプラスミドDNAのSCEのための手順を。我々はまた、歩留まりを最適化する方法を議論し、蛍光SCEによって標識されたニューロンのライブ二光子蛍光イメージングの例を示します。
Protocol
Discussion
単一細胞電気穿孔（SCE）は、遺伝子機能を決定し、標的遺伝子操作を実行するための強力なツールです。アルビノおたまじゃくしの透明性と脳のアクセシビリティは、理想的に生きて生体内で神経細胞の成長と細胞内イベントの可視化のための最適なこのモデルシステムを作る。 SCEは、単一のニューロンの成長の可視化を可能にし、そうでなければ変更されずに脳内で細胞自律的な操作を実行する。このビ…
Acknowledgements
著者は、SCE micromicropipetteチップの電子顕微鏡画像の未熟なニューロンとデレクダンフィールドの早送り動画キャプチャ成長のためSharminホセに感謝。
References
- Bestman, J. E., Ewald, R. C., Chiu, S. L., Cline, H. T. In vivo single-cell electroporation for transfer of DNA and macromolecules. Nature Protocols. 1, 1267-1272 (2006).
- Dunfield, D., Haas, K. Single cell electroporation. Encyclopedia of Neuroscience (4th Ed.). , .
- Haas, K., Jensen, K., Sin, W. C., Foa, L., Cline, H. T. Targeted electroporation in Xenopus tadpoles in vivo–from single cells to the entire brain. Differentiation. 70, 148-154 (2002).
- Haas, K., Sin, W. C., Javaherian, A., Cline, H. T. Single-cell electroporation for gene transfer in vivo. Neuron. 29, 583-591 (2001).
