Summary
Mykobakteriella patogena strategier fortfarande dåligt kända. Den långsamma tillväxten av de flesta arter, ogenomträngliga typ av cell-väggen och riskerna med att arbeta med patogener göra mykobakterier svårt att studera och är till stor del ansvarar för vår bristande förståelse av dessa organismer. I den här videon kommer vi att demonstrera tekniken för elektroporation, som innebär att utsätta celler för att en kort hög elektrisk impuls att tillåta införsel av DNA. Det är den mest använda metoden för att introducera DNA i mykobakteriers celler.
Abstract
Hög effektivitet förvandling är en viktig begränsning i studien av mykobakterier. Släktet Mycobacterium kan vara svårt att omvandla, detta främst orsakas av tjock och vaxartad cellvägg, men förvärras av att de flesta molekylärbiologiska metoder har utvecklats för avlägset relaterade arter som Escherichia coli och Bacillus subtilis. Trots dessa hinder har mykobakteriella plasmider identifierats och DNA omvandling av många mykobakteriella arter har nu beskrivits. De mest framgångsrika metoden för att introducera DNA i mykobakterier är elektroporation. Många parametrar bidrar till lyckade omvandlingen, dessa inkluderar art / stam, vilken typ av omvandla DNA, genetisk markör som används, odlingsmedium, och villkoren för elektroporation pulsen. Optimerade metoder för omvandling av både långsamt och snabbt odlare är detaljerade här. Transformation effektivitet för olika mykobakteriella arter och med olika valbara markörer redovisas.
