Summary
כאן אנו מדווחים על דור של Tre recombinase דרך האבולוציה, בבימויו מולקולרית. Tre recombinase מזהה רצף מוגדר מראש היעד בתוך רצפי LTR provirus של HIV-1, וכתוצאה מכך כריתה לבין מיגור provirus מ תאים אנושיים נגועים. אמנם עדיין בחיתוליו, אבולוציה מולקולרית מכוונת תאפשר יצירה של אנזימים אישית שישמש כלי הניתוח המולקולרי ורפואה מולקולרית.
Abstract
כאן אנו מדווחים על דור של Tre recombinase דרך האבולוציה, בבימויו מולקולרית. Tre recombinase מזהה רצף מוגדר מראש היעד בתוך רצפי LTR provirus של HIV-1, וכתוצאה מכך כריתה לבין מיגור provirus מ תאים אנושיים נגועים.
התחלנו עם Cre, recombinase 38-kDa, אשר מזהה 34-bp פעמיים תקועים רצף הדנ"א המכונה loxP. מכיוון Cre יכול למעשה לחסל רצפי הגנום, יצאנו חייט recombinase שיכול להסיר את רצף בין 5'-LTR ו-LTR 3'provirus של HIV-1 משולב. כצעד ראשון זיהינו רצפים בתוך האתרים LTR כי היו דומים loxP ונבדק לפעילות רקומבינציה. בתחילה Cre ו mutagenized ספריות Cre לא recombine האתרים loxLTR נבחר provirus של HIV-1. כמו התחלה של תהליך מכוון כל אבולוציה מולקולרית דורש לפחות פעילות שיורית, רצפים המקורי loxLTR אסימטרית חולקו תת ונבדקו שוב לפעילות רקומבינציה. מתנהג כמו ביניים, פעילות רקומבינציה הוצגה עם תת. בשלב הבא, ספריות recombinase היו מועשר באמצעות מחזורי האבולוציה reiterative. כתוצאה מכך, ספריות מועשר היו טרף recombined. השילוב של מוטציות שונות הוכיח סינרגיסטי recombinases נוצרו כי היו מסוגלים recombine loxLTR1 ו loxLTR2. זו היתה הוכחה לכך אסטרטגיה אבולוציונית דרך ביניים יכול להיות מוצלח. לאחר סך של 126 מחזורים האבולוציה recombinases הפרט נותחו תפקודית מבנית. Recombinase הפעילים ביותר - טרה - לה 19 שינויים חומצת אמינו לעומת Cre. Tre recombinase הצליח בלו provirus HIV-1 מתוך הגנום HIV-1 תאים נגועים הלה (ראה "HIV-1-DNA כריתה Proviral שימוש recombinase התפתח", Hauber ג', היינריך Pette-המכון ניסיוני וירולוגיה ואימונולוגיה, המבורג, גרמניה). אמנם עדיין בחיתוליו, אבולוציה מולקולרית מכוונת תאפשר יצירה של אנזימים מותאם אישית ישמש כלי של "ניתוח מולקולרי" ורפואה מולקולרית.
