Это видео демонстрирует новую культуру, метод, которым куриные эмбрионы культивируются вне яйца на срок до 24 час. Этот метод позволяет исследовать раннего развития (первичной полоски до 14 сом.), Период, соответствующий E7-9 в мышь. Применение этого метода относятся электропорация, на месте гибридизации и иммуногистохимии.
Abstract
Куриного эмбриона является ценным инструментом для изучения раннего эмбрионального развития. Его прозрачность, доступность и легкость манипуляций, делают его идеальным инструментом для изучения формирования и структурирования головного мозга, нервной трубки, сомитов и сердце зачатков. Применение куриных эмбрионов культуры включают электропорации ДНК или РНК конструкций для анализа функции гена, трансплантаты фактора роста покрыты бисером, таких как FGFs и БМП, а также целые горы на месте гибридизации и иммуногистохимии. Это видео демонстрирует различные этапы на куриных эмбрионов культуры; Во-первых, эмбрион эксплантированных в солевом растворе. Затем эмбрион сосредоточена на стеклянное кольцо. Мембраны, окружающие эмбрион поднимаются вдоль стенок кольца. Кольцо затем помещены в культуре блюдо с пулом альбуминовой. Культуры блюдо закрывают и помещают во влажную камеру, где эмбрион культивировали в течение до 24 часов. Наконец, эмбрион удаляется из кольца, фиксированная и обработаны для дальнейшего применения. Руководство по устранению неисправностей также представлен.
Protocol
Часть 1: Скамья создана Влажной камере готовится путем размещения Kimwipe / DDH 2 O в пластиковой камере. Трубки Сокол собирать альбумина, посуда для культуры, кольца, препаратного стекла и удаление отходов размещаются на скамейке. Pyrex блюдо заполняется 1,4 л физиологическ…
Discussion
Новый метод культуры 2 может быть использован для широкого спектра применений, начиная от прививок фактора роста содержащие бисером 3, для установки в целом гибридизация и целые горы иммуногистохимии 4. Культуры в течение 24 ч позволяет периода непрерывного контроля эмб?…
Acknowledgements
Эта работа была поддержана Маргарет М. Alkek Фонда РГНФ.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Eggs
Animal
Charles River Laboratories
Premium Fertile
Stereomicroscope
Microscope
Leica Microsystems
MZ9.5 or similar
Marsh Automatic Incubator
Tool
Lyon
RX
Hybridization Incubator
Tool
Robbins Scientific
M1000
Pyrex dish (2)
Tool
Watchmaker’s glass 50mm
Tool
VWR
66112-060
Glass rings
Tool
Physical Plant facility
cut 4 mm thick sections of glass tubing (27 mm outer diam, 25 mm inner diam). Do not fine polish.
Curved Forceps (1)
Surgery
Electron Microscopy Sciences
72991-4C
Forceps (2)
Surgery
Fine Science Tools
11002-13
blunt ended using sharpening Stone and 100ul mineral oil
Sharpening Stone Dan’s Black Arkansas
Surgery
Electron Microscopy Sciences
62082-00
Fine scissors
Surgery
Fine Science Tools
14161-10
Plastic dishes
Tool
Falcon
353001
Rubber Bulb
Tool
Electron Microscopy Sciences
70980
Pasteur Capillary Pipette
Tool
Electron Microscopy Sciences
70950-12
round edge under flame
Microcapillary tube
Surgery
Sigma
P1049-1PAK
Pull using vertical micropipette puller; blunt end with fine forceps
Microdissecting knife
Surgery
Fine Science Tools
10056-12
Use to puncture cavities prior to in situ hybridization
Minuten pins 0.2mm diam
Surgery
Fine Science Tools
26002-20
Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base
Reagent
Dow Corning
0001986475
Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C