Bu video Yeni kültür, civciv embriyolarının 24 saat kadar yumurta dışında kültür olan bir yöntem gösteriyor. Bu yöntem, erken gelişme (14 som ilkel bir çizgi.) Fare E7-9 karşılık gelen bir süre çalışma sağlar. In situ hibridizasyon ve immünohistokimya, bu tekniğin Uygulamaları elektroporasyon içerir.
Abstract
Civciv embriyo erken embriyonik gelişim çalışmaya değerli bir araçtır. Şeffaflığı, erişilebilirliği ve kolay manipülasyon, bu oluşumu ve beyin, nöral tüp, hücre gruplarının ve kalp primordia desenlendirme eğitimi için ideal bir araçtır. Uygulamaları civciv embriyo kültürü, in situ hibridizasyon ve immünohistokimya, gen fonksiyonu, FGFs ve BMP gibi büyüme faktörü kaplı boncuklar greft yanı sıra tüm montaj analiz etmek için DNA veya RNA yapıları elektroporasyon içerir. Bu video civciv embriyo kültürü farklı adımları gösteriyor; İlk olarak, embriyo tuzlu su eksplante. Sonra, embriyo bir cam yüzük ortalanır. Embriyo çevreleyen zarların halka duvarları boyunca kaldırılır. Bu halka daha sonra, albümin bir havuzun bulunduğu bir kültür tabak içinde yer alır. 24 saat kadar embriyo kültür olduğu kültür çanak, kapalı ve nemli odasında yerleştirilir. Son olarak, embriyo, ring kaldırılır, sabit ve başka uygulamalar için işlenmiş. Bir sorun giderme kılavuzu da sunulmaktadır.
Protocol
Bölüm 1: Tezgah kurmak Nemli odasına plastik odasında Kimwipe / GKD 2 O koyarak hazırlanır. Falcon tüp albümin, kültür, yüzük, Dürbün ve atık bertarafı için yemekleri toplamak için bir tezgah üzerine yerleştirilir. Kabına 1.4 lt tuzlu su ile dolu (notlara bakınız [a]). Bölüm 2: Embriyo tuzlu eksplante Yumurta, 16 saat sonra (evre 4) inkübatör kaldırılır. Yumurta kabuk forseps ile dokunarak opene. Shell ade…
Discussion
Yeni kültür yöntemi 2 büyüme faktörü tüm montaj boncuk 3,in situ hibridizasyon ve tüm montaj immünohistokimya 4 içeren greftleri arasında değişen çok çeşitli uygulamalar için de kullanılabilir. 24 saatlik süre içinde Kültür embriyonik gelişim zaman atlamalı hücre hareket analizi 5 veya GFP 6 electroporated yapıları içeren izleme gibi uygulamalar sürekli olarak izlenmesini sağlar.
Acknowledgements
Bu çalışma, Margaret M. RHF Alkek Vakfı tarafından desteklenmiştir.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Eggs
Animal
Charles River Laboratories
Premium Fertile
Stereomicroscope
Microscope
Leica Microsystems
MZ9.5 or similar
Marsh Automatic Incubator
Tool
Lyon
RX
Hybridization Incubator
Tool
Robbins Scientific
M1000
Pyrex dish (2)
Tool
Watchmaker’s glass 50mm
Tool
VWR
66112-060
Glass rings
Tool
Physical Plant facility
cut 4 mm thick sections of glass tubing (27 mm outer diam, 25 mm inner diam). Do not fine polish.
Curved Forceps (1)
Surgery
Electron Microscopy Sciences
72991-4C
Forceps (2)
Surgery
Fine Science Tools
11002-13
blunt ended using sharpening Stone and 100ul mineral oil
Sharpening Stone Dan’s Black Arkansas
Surgery
Electron Microscopy Sciences
62082-00
Fine scissors
Surgery
Fine Science Tools
14161-10
Plastic dishes
Tool
Falcon
353001
Rubber Bulb
Tool
Electron Microscopy Sciences
70980
Pasteur Capillary Pipette
Tool
Electron Microscopy Sciences
70950-12
round edge under flame
Microcapillary tube
Surgery
Sigma
P1049-1PAK
Pull using vertical micropipette puller; blunt end with fine forceps
Microdissecting knife
Surgery
Fine Science Tools
10056-12
Use to puncture cavities prior to in situ hybridization
Minuten pins 0.2mm diam
Surgery
Fine Science Tools
26002-20
Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base
Reagent
Dow Corning
0001986475
Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C