यह वीडियो नई संस्कृति, एक तरीका है जिसके द्वारा लड़की भ्रूण अंडे के बाहर 24 घंटे के लिए संवर्धित कर रहे हैं दर्शाता है. इस विधि जल्दी (14 सोम के लिए आदिम लकीर) विकास, एक माउस में E7-9 इसी अवधि के अध्ययन करने के लिए सक्षम बनाता है. इस तकनीक का आवेदन electroporation स्वस्थानी संकरण और immunohistochemistry में शामिल हैं.
Abstract
लड़की भ्रूण जल्दी भ्रूण के विकास के अध्ययन में एक महत्वपूर्ण उपकरण है. इसकी पारदर्शिता, पहुंच, और हेरफेर की आसानी, यह गठन और मस्तिष्क, तंत्रिका ट्यूब somite, और दिल primordia patterning के अध्ययन के लिए एक आदर्श उपकरण बनाते हैं. लड़की भ्रूण संस्कृति के आवेदन डीएनए या शाही सेना के constructs electroporation शामिल क्रम में स्वस्थानी संकरण और immunohistochemistry में जीन समारोह, विकास FGFs और BMPs जैसे कारक लिपटे मोतियों के grafts के रूप में अच्छी तरह से पूरे माउंट का विश्लेषण है. इस वीडियो लड़की भ्रूण संस्कृति में विभिन्न चरणों को दर्शाता है, पहले, भ्रूण खारा में explanted है. फिर, भ्रूण एक गिलास अंगूठी पर केंद्रित है. भ्रूण झिल्ली अंगूठी की दीवारों के साथ उठा रहे हैं. अंगूठी तो albumine का एक पूल युक्त एक संस्कृति डिश में रखा गया है. संस्कृति डिश मोहरबंद और एक नम कक्ष में रखा, जहां भ्रूण 24 बजे तक के लिए सुसंस्कृत है. अंत में, भ्रूण की अंगूठी से निकाल दिया जाता है, फिक्स्ड और अधिक अनुप्रयोगों के लिए संसाधित. समस्या निवारण मार्गनिर्देशिका भी प्रस्तुत किया है.
Protocol
भाग 1: पीठ स्थापित एक नम चैम्बर / Kimwipe DDH 2 हे प्लास्टिक कक्ष में रखकर तैयार है. एक फाल्कन albumin, संस्कृति, अंगूठियां, watchglass और अपशिष्ट निपटान के लिए व्यंजन इकट्ठा ट्यूब बेंच पर रखा जाता है. Pyrex पकवान 1….
Discussion
नई संस्कृति विधि 2 आवेदनों की एक विस्तृत विविधता, वृद्धि स्वस्थानी संकरण और पूरे माउंट 4 immunohistochemistry में3 पूरे माउंट करने के लिए मोती, युक्त कारक के grafts से लेकर के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. एक 24 घ?…
Acknowledgements
यह काम मार्गरेट एम. Alkek RHF फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Eggs
Animal
Charles River Laboratories
Premium Fertile
Stereomicroscope
Microscope
Leica Microsystems
MZ9.5 or similar
Marsh Automatic Incubator
Tool
Lyon
RX
Hybridization Incubator
Tool
Robbins Scientific
M1000
Pyrex dish (2)
Tool
Watchmaker’s glass 50mm
Tool
VWR
66112-060
Glass rings
Tool
Physical Plant facility
cut 4 mm thick sections of glass tubing (27 mm outer diam, 25 mm inner diam). Do not fine polish.
Curved Forceps (1)
Surgery
Electron Microscopy Sciences
72991-4C
Forceps (2)
Surgery
Fine Science Tools
11002-13
blunt ended using sharpening Stone and 100ul mineral oil
Sharpening Stone Dan’s Black Arkansas
Surgery
Electron Microscopy Sciences
62082-00
Fine scissors
Surgery
Fine Science Tools
14161-10
Plastic dishes
Tool
Falcon
353001
Rubber Bulb
Tool
Electron Microscopy Sciences
70980
Pasteur Capillary Pipette
Tool
Electron Microscopy Sciences
70950-12
round edge under flame
Microcapillary tube
Surgery
Sigma
P1049-1PAK
Pull using vertical micropipette puller; blunt end with fine forceps
Microdissecting knife
Surgery
Fine Science Tools
10056-12
Use to puncture cavities prior to in situ hybridization
Minuten pins 0.2mm diam
Surgery
Fine Science Tools
26002-20
Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base
Reagent
Dow Corning
0001986475
Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C