이 비디오는 새로운 문화, 병아리의 배아는 최대 24 시간까지 계란 이외의 양식하는가하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 초기 개발 (14 솜으로 원시적인 승리.) 마우스 E7 – 9에 해당하는 기간 동안 공부를 하나 있습니다. 이 기술의 응용은 현장 하이브리드화과 immunohistochemistry에 electroporation을 포함합니다.
Abstract
여자의 난자는 초기 배아 발달의 연구에 귀중한 도구입니다. 투명성, 접근성 및 조작 용이성, 그건 뇌, 신경 튜브, 체절과 심장 primordia의 형성과 patterning을 공부를위한 이상적인 도구가합니다. 여자는 배아 문화의 응용 프로그램은 현장 하이브리드화과 immunohistochemistry의 유전자 기능 등 FGFs 및 BMPs와 같은 성장 인자 코팅 구슬 이식뿐만 아니라 전체 마운트를 분석하기 위해 DNA 또는 RNA 구조의 electroporation을 포함합니다. 이 비디오는 여자의 배아 문화의 여러 단계를 보여주는, 첫째, 배아는 호수에 explanted 있습니다. 그런 다음, 배 (胚)는 유리 반지를 중심으로합니다. 배아를 둘러싼 세포막은 반지의 벽면을 따라 해제됩니다. 반지는 다음 albumine의 수영장이 포함된 문화 접시에 배치됩니다. 배아는 최대 24 시간까지 교양있는 곳을 문화 요리는 밀봉하여 습기가 실내에 배치됩니다. 마지막으로, 배아는 반지에서 제거 고정 더욱 응용 프로그램에 처리됩니다. 문제 해결 가이드도 제공됩니다.
Protocol
1 부 : 벤치 설정 습기 챔버는 플라스틱 챔버에 Kimwipe / ddH 2 O을 삽입하여 준비가되어 있습니다. 문화, 반지, watchglass 및 폐기물 처리에 대한 알부민, 요리를 수집하는 팰컨 튜브는 벤치에 게재됩니다. Pyrex 요리는 1.4 리터의 호수 가득 (노트를 참조하십시오 [A]).입니다 2 부 : 배아 호수에 explanted입니다 계란 16 시간 (4 단계) 후 인큐베이…
Discussion
새로운 문화 방법 2원위치 하이브리드화 및 전체 마운트 immunohistochemistry 4 전체 마운트 구슬 3, 포함하는 성장 인자의 이식에 이르기까지 애플 리케이션의 광범위한 사용하실 수 있습니다. 24 시간 기간 동안 문화는 시간 저속 세포의 움직임 분석 5 GFP 6 electroporated 구조를 포함하는 모니터링과 같은 어플 리케이션에서 배아 개발의 지속적인 모니터링이 가능?…
Acknowledgements
이 작품은 RHF에 마가렛 M. 알켁 재단에 의해 지원되었다.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Eggs
Animal
Charles River Laboratories
Premium Fertile
Stereomicroscope
Microscope
Leica Microsystems
MZ9.5 or similar
Marsh Automatic Incubator
Tool
Lyon
RX
Hybridization Incubator
Tool
Robbins Scientific
M1000
Pyrex dish (2)
Tool
Watchmaker’s glass 50mm
Tool
VWR
66112-060
Glass rings
Tool
Physical Plant facility
cut 4 mm thick sections of glass tubing (27 mm outer diam, 25 mm inner diam). Do not fine polish.
Curved Forceps (1)
Surgery
Electron Microscopy Sciences
72991-4C
Forceps (2)
Surgery
Fine Science Tools
11002-13
blunt ended using sharpening Stone and 100ul mineral oil
Sharpening Stone Dan’s Black Arkansas
Surgery
Electron Microscopy Sciences
62082-00
Fine scissors
Surgery
Fine Science Tools
14161-10
Plastic dishes
Tool
Falcon
353001
Rubber Bulb
Tool
Electron Microscopy Sciences
70980
Pasteur Capillary Pipette
Tool
Electron Microscopy Sciences
70950-12
round edge under flame
Microcapillary tube
Surgery
Sigma
P1049-1PAK
Pull using vertical micropipette puller; blunt end with fine forceps
Microdissecting knife
Surgery
Fine Science Tools
10056-12
Use to puncture cavities prior to in situ hybridization
Minuten pins 0.2mm diam
Surgery
Fine Science Tools
26002-20
Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base
Reagent
Dow Corning
0001986475
Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C