ERRATUM NOTICE
Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …
Summary
בסרטון זה הכנת 2-dGuo שטופלו reaggregate תרבויות התימוס מודגם.
Abstract
ב, CD4 התימוס בשלה 8 + thymocytes להביע מחדש באופן אקראי T-cell receptor α ו-b-שרשרת אירועים גנים עוברים סלקציה חיובית ושלילית מבוסס על היכולת שלהם לזהות histocompatibility self-peptide/major מורכבות (MHC) מולקולות לידי ביטוי הרתי סטרומה תאים. בניתוח vivo התפקיד של תאים סטרומה הרתי במהלך בחירת intrathymic קשה בגלל המורכבות הסלולר של microenvironment הרתי ב היציב התימוס מבוגר, ועל ידי חוסר מיקוד אסטרטגיות מתאימות כדי לתפעל ביטוי גנים בפרט תאים סטרומה הרתי. הראינו כי microenvironment הרתי ניתן להשפיע בקלות באמצעות reaggregate תרבויות איבר התימוס, המאפשרים הכנת תלת ממדי אונות התימוס מתאי סטרומה ו הלימפה מוגדר במבחנה. למרות אחרות במערכות חוץ גופית תמיכה כמה היבטים של התפתחות תא T, reaggregate תרבות איבר התימוס נשאר רק במערכת במבחנה מסוגל לתמוך בכיתה MHC יעיל I ו-II בתיווך אירועי מבחר thymocyte, ולכן יכול לשמש ככלי יעיל ללמוד הסדרת תאית ומולקולרית של בחירה חיוביות ושליליות של התימוס.
Protocol
לקבלת מידע נוסף על הכנת reggregate תרבויות התימוס בקר הפרוטוקולים שפרינגר .
Tags
אימונולוגיה גיליון 18 שפרינגר הפרוטוקולים קורנית 2-dGuo תרבויות קורנית איברים סובלנות החיסונית בחירה חיוביות ושליליות פיתוח הלימפהErratum
Formal Correction: Erratum: Reaggregate Thymus Cultures
Posted by JoVE Editors on 04/01/2012.
Citeable Link.
A correction was made to: Reaggregate Thymus Cultures. A revised abstract was republished due to a publisher error. The abstract was corrected to:
Stromal cells within lymphoid tissues are organized into three-dimensional structures that provide a scaffold that is thought to control the migration and development of haemopoeitic cells. Importantly, the maintenance of this three-dimensional organization appears to be critical for normal stromal cell function, with two-dimensional monolayer cultures often being shown to be capable of supporting only individual fragments of lymphoid tissue function. In the thymus, complex networks of cortical and medullary epithelial cells act as a framework that controls the recruitment, proliferation, differentiation and survival of lymphoid progenitors as they undergo the multi-stage process of intrathymic T-cell development. Understanding the functional role of individual stromal compartments in the thymus is essential in determining how the thymus imposes self/non-self discrimination. Here we describe a technique in which we exploit the plasticity of fetal tissues to re-associate into intact three-dimensional structures in vitro, following their enzymatic disaggregation. The dissociation of fetal thymus lobes into heterogeneous cellular mixtures, followed by their separation into individual cellular components, is then combined with the in vitro re-association of these desired cell types into three-dimensional reaggregate structures at defined ratios, thereby providing an opportunity to investigate particular aspects of T-cell development under defined cellular conditions. (This article is based on work first reported Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 pages 185-196).
from
In the thymus, immature CD4+8+ thymocytes expressing randomly rearranged T-cell receptor α- and b-chain genes undergo positive and negative selection events based on their ability to recognize self-peptide/major histocompatibility complex (MHC) molecules expressed by thymic stromal cells. In vivo analysis of the role of thymic stromal cells during intrathymic selection is made difficult by the cellular complexity of the thymic microenvironment in the steady-state adult thymus, and by the lack of appropriate targeting strategies to manipulate gene expression in particular thymic stromal compartments. We have shown that the thymic microenvironment can be readily manipulated in vitro through the use of reaggregate thymus organ cultures, which allow the preparation of three-dimensional thymus lobes from defined stromal and lymphoid cells. Although other in vitro systems support some aspects of T-cell development, reaggregate thymus organ culture remains the only in vitro system able to support efficient MHC class I and II-mediated thymocyte selection events, and so can be used as an effective tool to study the cellular and molecular regulation of positive and negative selection in the thymus.
