एक निर्देशयोग्य खींचने के साथ पैच pipettes और तीव्र इलेक्ट्रोड बनाना

Summary

इस वीडियो से पता चलता है कि कैसे एक प्रोग्राम खींचने का उपयोग इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी के लिए पैच pipettes और तेज इलेक्ट्रोड बनाने. उसी प्रक्रिया के लिए इंजेक्शन सुई सहित काँच उपकरण की एक किस्म बनाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है है.

Abstract

ग्लास microelectrodes (pipettes भी कहा जाता है) इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी के दशकों के लिए एक workhorse किया गया है. आज, ऐसे pipettes गिलास capillaries से बना रहे हैं एक प्रोग्राम खींचने का उपयोग कर. इस तरह के उपकरणों या तो एक धातु फिलामेंट या एक लेजर और बाहर गुरुत्वाकर्षण, एक मोटर या दोनों का उपयोग करते हुए कांच आकर्षित का उपयोग केशिका गर्मी. पैच दबाना रिकॉर्डिंग के लिए pipettes केवल गर्मी और गुरुत्व का उपयोग का गठन कर रहे हैं, जबकि intracellular रिकॉर्डिंग के लिए इलेक्ट्रोड तेज गर्मी, गुरुत्वाकर्षण, और एक मोटर का एक संयोजन का उपयोग करें. intracellular रिकॉर्डिंग pipettes बनाने के लिए इस्तेमाल की प्रक्रिया के लिए आवेदनों की एक किस्म के लिए इंजेक्शन सुई Xenopus oocytes में क्रेना इंजेक्शन सहित, बनाने के लिए इस्तेमाल करने के लिए इसी तरह की है. सामान्य, केशिका गिलास में <व्यास में 1.2 मिमी पैच दबाना रिकॉर्डिंग के लिए pipettes करने के लिए प्रयोग किया जाता है, जबकि संकरा कांच intracellular रिकॉर्डिंग (बाहरी व्यास = 1.0 मिमी) के लिए प्रयोग किया जाता है. प्रत्येक उपकरण के लिए, खींचने थोड़ा अलग क्रमादेशित है. इस वीडियो से पता चलता है कि रिकॉर्डिंग pipettes पूर्व स्थापित खींचने प्रोग्राम का उपयोग कर के दोनों प्रकार बनाने के लिए.

Protocol

पुलिंग pipettes

P-97 ज्वलंत / ब्राउन Sutter के रूप में खींचने जैसे microelectrode का उपयोग, लगभग 10-20 pipettes का एक सेट खींचो.

1. अपने केशिका गिलास का चयन करें. हम borosilicate capillaries (BF150-110-10 Sutter, 1.5mm बाहरी व्यास, 1.1mm भीतरी व्यास, लंबे 10cm) का उपयोग करें. कांच स्टोर सावधानी से तो यह साफ है और धूल मुक्त रहता है.
2. एक खींच प्रोग्राम डिजाइन. हम उतरते गर्मी और हर कदम पर वेग, और अंतिम चरण पर एक छोटे पुल के साथ एक 5 कदम प्रोग्राम का उपयोग करें. Sutter विंदुक रसोई की किताब उपयुक्त कार्यक्रम के विकास के लिए एक उत्कृष्ट संदर्भ है.
3. जांच करने के लिए एक खुर्दबीन के नीचे खोलने के व्यास और चिकनाई निर्धारित विंदुक युक्तियाँ. किसी न किसी तरह, असमान या अनियमित सुझावों त्यागें. एक अच्छा प्रोटोकॉल खींच यह सुनिश्चित करना चाहिए कि इन दुर्लभ हैं. मानक पैच दबाना रिकॉर्डिंग के लिए, टिप उद्घाटन व्यास में 1-3 microns होना चाहिए. एक खड़ी शंकु (कुंद टिप) ही खोलने व्यास के लिए प्रतिरोध कम होता है. आकृति और आकार दबाव चमकाने के द्वारा संशोधित किया जा सकता है.

फायर चमकाने pipettes

1. एक प्लैटिनम हीटिंग एक पैर पेडल द्वारा नियंत्रित फिलामेंट के साथ चमकाने रिग (microforge) सेट. ALA (सीपीएम -2) वैज्ञानिक या एक समान तंत्र टुकड़ों में इकट्ठा किया जा सकता से एक उपयोगी किट उपलब्ध है.
2. वैकल्पिक: एक समाई कम होती है और शोर विशेषताओं में सुधार विसंवाहक कोट के साथ विंदुक . हम दंत मोम का उपयोग करें. 184 ™ Sylgard (पाली - डाइमिथाइल siloxane भी PDMS के रूप में जाना जाता इलास्टोमेर) भी एक विकल्प है.
3. मोम का उपयोग कर अगर, एक छोटे से पिघला हुआ आपूर्ति पास रहते हैं. विंदुक विंदुक में प्रवेश करने से मोम रखने के पीठ पर हवा के दबाव के साथ, तरल मोम में टिप संक्षिप्त डुबकी और निकालना. Sylgard के साथ, दुकान जमी aliquots में तैयार elastomer और एक खुर्दबीन के नीचे विंदुक टिप रंग. Elastomer इलाज हीट.
4. चमकाने तंत्र में पिपेट लेपित (या नहीं) प्लेस और टिप लाने ~ फिलामेंट से 50 microns. ध्यान रखें कि फिलामेंट जब गरम का विस्तार होगा.
5. अनुशंसित: इष्टतम प्रतिरोध और टिप व्यास के लिए विंदुक के आकार को बदलने के लिए "दबाव चमकाने" के लिए अलग अलग प्रोटोकॉल का पालन करें.
6. एक संक्षिप्त गर्मी नाड़ी (1-2 सेकंड) पिपेट की नोक से मोम हटाने और गिलास चिकनी के लिए पर्याप्त है.
7. एक बंद को धूल से बचाने के लिए, 10 सफल pipettes के लिए दोहराएँ बॉक्स में समाप्त विंदुक रखें.

Discussion

प्रोटोकॉल सचित्र यहाँ इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी प्रयोगशालाओं में दैनिक उपयोग में है और यह भी कोशिकाओं और जानवरों के लिए इंजेक्शन सुई बनाने के लिए इस्तेमाल किया. एक प्रोग्राम खींचने के साथ, यह आसान है का उपयोग करता है की एक किस्म के लिए pipettes बनाने है. ध्यान और देखभाल के साथ, अपने खींचने पर फिलामेंट एक साल या उससे अधिक के लिए पिछले जाएगा. अपने प्रयोगों के साथ गुड लक.

Materials

Name	Type	Company	Catalog Number	Comments
Micropipette Puller	Instrument	Sutter Instrument Co.	P-97	Or similar instrument (e.g. Sutter P-87 or P-2000)
Glass Capillaries	Reagent	Sutter Instrument Co.	BF150-86-10	Or, similar capillary glass. To make filling the pipette easier, use a capillary with a glass filament.