Sedimentlerden Biyobelirteçlerin Ekstraksiyonu - Hızlandırılmış Solvent Ekstraksiyonu

Hızlandırılmış solvent ekstraksiyonu, organik biyobelirteçleri çok sayıda jeolojik tortu örneğinden ayırmak için kullanılan hızlı, verimli ve yüksek verimli bir tekniktir.

Geleneksel olarak, sonikasyon veya Soxhlet gibi ekstraksiyon yöntemleri kullanılır, ancak bu protokollerin dezavantajı, ayrıntılı paleoiklim rekonstrüksiyonu için yeterli materyali işlemek için çok yavaş olmalarıdır. Daha yeni bir teknik olan Hızlandırılmış Solvent Ekstraksiyonu veya ASE yöntemi, verimlilik ve yüksek verim göz önünde bulundurularak geliştirilmiştir.

ASE yöntemi, numuneleri çıkarmak için yüksek sıcaklıklar ve yüksek basıncın bir kombinasyonunu kullanır ve tek, nispeten hızlı bir hazırlama çalışmasında birden fazla numune gerçekleştirebilir.

Bu video, tortudan biyobelirteçlerin nasıl çıkarılacağını detaylandıran bir serinin üçüncüsüdür. Prosedürü kapsayacak ve sonikasyon veya Soxhlet ekstraksiyonu üzerinde ASE'nin yararları hakkında fikir verecektir.

Hızlandırılmış solvent ekstraksiyonunda, numuneler çelik hücrelere yüklenir ve daha sonra bir atlıkarınca üzerine yüklenir. Her numune hücresi için toplama şişeleri de ayrı bir karusele yüklenir. Cihaz, bir numune hücresini dahili bir fırına yükler. Solvent, yeterli bir basınca ulaşılana kadar bir solvent şişesinden bir dizi valf aracılığıyla pompalanır.

Bu basınç, numune ve analit tarafından belirlenen bir süre boyunca tutulur. Daha sonra, çözücü numune hücresinden çelik bir hat aracılığıyla ilgili toplama şişesine yıkanır. İşlem birkaç kez tekrarlanabilir. Sıcaklık, basınç ve sürenin tümü numune için özelleştirilebilir.

Kullanılan yüksek sıcaklık, ekstraksiyonun kinetiğini arttırırken, yüksek basınç çözücünün buharlaşmasını önler. Toplama şişesi artık bir toplam lipit özütü içerir ve örnek hücrede kalanlara kalıntı denir. Organik olmayan materyalin yanı sıra kerojen adı verilen, solventle ekstrakte edilemeyen organik materyali de içerir.

Artık hızlandırılmış solvent ekstraksiyonunun arkasındaki ilkelere aşina olduğumuza göre, bunun laboratuvarda nasıl yapıldığına bir göz atalım.

İlgilenilen örnekleri topladıktan sonra; Bu serideki başka bir videoda gösterildiği gibi dondurarak kurutun, homojenize edin ve dekontamine edin.

Tüm numuneler hazırlandıktan sonra, her birinin çıkarılması için bir hücre ve bir boşluk için fazladan bir hücre birleştirin. Bunu yapmak için, hücre gövdesine bir uç kapağı vidalayın. Solventle durulanmış cımbız kullanarak, her birinin üzerine yanmış bir cam elyaf filtre yerleştirin. Filtreyi piston ile yavaşça ve nazikçe aşağı doğru bastırın.

Her numune için hücre gövdelerini numaraya göre etiketleyin ve boşluğu ayrı ayrı etiketleyin. Yanmış bir tartım tenekesini laboratuvar terazisine koyun ve darasını alın. Bir spatulayı çözücü ile durulayın, ardından 5 ila 10 g numuneyi tartım kabına aktarmak için kullanın ve kütleyi kaydedin.

Tartım kabındaki tüm malzemeyi ilgili hücresine aktarın. Üstüne başka bir cam elyaf filtre yerleştirin ve numunenin üst kısmına ulaşana kadar hafifçe bastırın.

Hücre gövdesi ipliklerine herhangi bir kalıntı girmemesine dikkat ederek, neredeyse dolana kadar diyatomlu toprak veya kum gibi bir dağıtıcı ekleyin. Hücrenin üst kısmını başka bir uç kapakla kapatın. Her örnek ve boşluk için bu adımları tekrarlayın.

Her bir toplama şişesini karşılık gelen bir numune hücresinin veya boşluğun numarasıyla etiketleyin ve bir şişe kapağı ile kapatın. Her hücreyi üst ASE tepsisindeki numaralandırılmış bir yuvaya yerleştirin. 100'de çıkarmak için ASE üzerindeki tuş takımını kullanarak ekstraksiyon yöntemi için parametreleri ayarlayın. C?ve 1.200 psi. Her bir numuneyi 10 dakikalık statik tutma ile 3 kez çıkarın ve statik tutma süreleri arasında hücre gövdesini toplam hacminin %50'si ile yıkayın.

Ardından, solvent şişesinin tüm numuneleri çıkarmaya yetecek kadar içerdiğinden emin olun. Çalışmaya başlamadan önce alet hatlarını 3 kez durulayın. Son olarak, başlat'a basın.

Şişeyi ASE'den çıkarın. Artık biyobelirteçler ekstrakte edildiğine göre, analizden önce saflaştırılmaları gerekir.

Hızlandırılmış Solvent Ekstraksiyonu, bazıları burada keşfedilen çeşitli uygulamalar için kullanılabilen çok yönlü bir tekniktir.

Hızlandırılmış solvent ekstraksiyonu, gıda da dahil olmak üzere diğer numune türlerinde de kullanılabilir. Pestisit kontaminasyonunu test etmek için kalıntı analizi, meyve veya sebze gibi gıda ürünlerinin güvenliğini ve kalitesini belirlemek için düzenleyici ve endüstriyel tesislerde sıklıkla yapılır. ASE, gıda örneklerinden organoklor pestisitleri çıkarmak ve üründe bulunan kalıntı türlerini veya seviyelerini belirlemek için kullanılabilir. Bu bilgi daha sonra ürünün insan veya hayvan tüketimine uygun olup olmadığını belirlemek için kullanılabilir. Örneğin, dieldrin, ürüne bağlı olarak gıdada milyonda 0 ila 0.1 parça arasında bulunmalıdır.

Gıda besin bileşenleri de ASE kullanılarak ekstrakte edilebilir. Örneğin, yüksek gravimetrik yağ içeriğine sahip olabilen çikolata gibi ürünler ekstrakte edilebilir. Çözücü olarak petrol eteri ile ASE kullanılarak, çikolata numunelerinden yağ ayrılabilir ve bilinen çikolata miktarı başına doğru bir yağ yüzdesi belirlemek için kantitatif analize tabi tutulabilir. Düzenleyici kurumlar bu bilgileri kullanarak çikolata üreticileri tarafından yapılan iddiaları doğrulayabilir veya üreticiler doğru gıda etiketleri oluşturmak için bilgi edinebilir.

JoVE'nin hızlandırılmış solvent ekstraksiyonu veya ASE kullanarak lipid biyobelirteçlerinin ekstraksiyonuna girişini izlediniz. Daha fazla işleme ve analiz için yöntemler sonraki videolarda bulunabilir.

İzlediğiniz için teşekkürler!