Name: Tüm Maymun Beyin Büyük Ölçekli Protein Algılama için Toplu immün (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-27T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Öğrenin, maymun beyninde büyük ölçekli protein algılama için toplu immün boyama yöntemini. Seri koronal kesitler ve özel sepetlerle tüm beyinde protein ifade desenlerini analiz edin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Frank Ervin, Roberta Palmour ve primat çalışmaları devam eden desteği, Batı Hint Adaları, St Kitts bulunan Davranış Bilimleri Vakfı Laboratuar personeline teşekkür ediyoruz. Kanada Sağlık Araştırmaları (AC) ve Ulusal Mühendislik ve Kanada Araştırma Konseyi (MP) Enstitüleri işletme hibeleri - Bu çalışma Frajil X Araştırma SZ Kanada Vakfı (FXRFC) ve bir burs ile desteklenmiştir.

Immunohistochemisty çeşitli deneysel hayvan modellerinde beyin protein ifade tanımlamak için en yaygın olarak kullanılan tekniklerin biridir. Benzer beyin büyüklüğü ile kemirgenler ve diğer ortak deneysel modeller beyinlerinde sistematik immünohistokimyasal işlemleri yürütmek nispeten kolaydır. Ancak, bütün bir maymun beyin çapında İmmuno prosedürleri yürütmek için nasıl kapsamlı bir hesap sağlar bilgimizi yayınlanmış hiçbir çalışma yoktur. Aşağıda, çeşitli hedef proteinlerin büyük ölçekli immünohistokimyasal tespiti için bütün bir maymun beyni nasıl hazırlamak için ayrıntılı bir açıklama. Bu çalışma, ticari ve akademik çalışmaların arasındaki işbirliğinin bir sonucu olarak ortaya çıkmıştır. Gibi, doku gömme ve kesit ilgili detayları NSA, özel bir bilgi kalır. Bölüm 1: Hayvan tedavi ve doku hazırlanması İşbu Protokol, yetişkin bir vervet maymun (cebus aethiops) beynin kullanılır . Tüm işlemler, biyomedikal araştırma 1 hayvanlarının kullanımı ve bakımı için Hayvan Bakım Kanada Konseyi (CCAC) yönergeleri ile uyum içinde yürütülmektedir . <ol><li> Hayvan derinden aşırı dozda sodyum pentobarbital (25 mg / kg, iv) ve tamamen exsanguinated kadar 0.1 M PBS ile transcardially perfüze ötenazi ketamin hidroklorür (10 mg / kg, im) ile sedasyon. </li><li> Bu 5 dakika (~ 1 litre) PBS içinde% 4 paraformaldehid çözümü ile takip edilmektedir. </li><li> Dışsallaşmış beyin, beyin kabın dibine lavabolar ˚ C kadar% 0.02 sodyum azid içeren PBS-tamponlu kademeli sakaroz çözümleri (sırayla 10, 20 ve% 30) yerleştirilir ve 4 tutulur. Beyin donma-kesit uğrar kadar çözüm birkaç günde değiştirilir. </li><li> Tescilli MultiBrain tabi ™ gömme ve donma-kesit teknolojisi, beyin Neuroscience Associates (Knoxville NSA) gönderilir. </li><li> Yedi (7) hizalama işaretlerini bölümleri doğru yönde (örneğin, sağ-sol yönlendirme) ve histolojik işlem tamamlandıktan sonra yeniden hizalanmış böylece gömme matris yerleştirilir. </li><li> Dondurulmuş blok, her blok seri bölümünde toplanan önce dijital blok yüzüne fotoğraflandı. Dijital görüntülerin yanı sıra, bu beyin bölümlerinin daha sonra sırasıyla, anatomik ve histolojik haritaları 3 boyutlu rekonstrüksiyon için kullanılan olabilir. </li><li> Seri serbest koronal bölümleri, bölüm başına 50 mikron kalınlığında, tüm beyin toplanır. </li></ol> Bölüm 2: Histolojik işleme Bölüm belirli bir mekansal aralıklarla seçilir (örneğin, 500 mikron) ve deneysel amaçlar için aşağıdaki antikorlar ile işlendi: kırılgan-X mental retardasyon protein (FMRP; Chemicon; Temecula, CA), SMI32 (Sternberger Monoclonals A.Ş.; Baltimore, MD) ve Neun (Chemicon; Temecula, CA). FMRP, bol miktarda normal ve permütasyon taşıyıcı beyinleri nöronlar 2 bulunan bir sitoplazmik bir proteindir. Neun (Nöronal Çekirdekler) özellikle en nöronlarda ve nöron çekirdekleri, perikarya ve proksimal bazı nöronal süreçleri 3 dağıtılır nöron spesifik DNA-bağlayıcı protein Neun tanır. SMI-32 nörofilaman proteinler 4 olmayan fosforile epitop tanıyan bir monoklonal antikor. <ol><li> 500 mikron aralığında yaklaşık 140 bölümleri antikor başına kullanılır. </li><li> Tüm inkubasyon, yıkama ve boyama adımları hafif ajitasyon özel boyama yemekleri ve sepetler (Knoxville, TN HistoTools) kullanılarak yapılmaktadır. </li><li> Bölüm ilk antikor moleküllerinin nonspesifik bağlayıcı ve arka plan boyama azaltmak için 0.1 M PBS/0.3% Triton X-100 (TX) / 60 dakika süreyle% 5 normal boğuk serum (NHS) içeren bir çözüm inkübe edilir. </li><li> Üreticisinin talimatlarına göre; immün FMRP işaretli bölümleri Antijen açığa çıkarılması Çözümü (Burlingame, CA Vektör Labs) kullanarak antijen kurtarma ek bir adım uğrarlar. </li><li> Bölüm sonra geceleme ve 0.1 M PBS/0.3% TX /% 3 NHS (Neun antikorlar FMRP ve SMI-32 ve 1 / 2, 000 1 / 5, 000 bir sulandırma faktörü içeren, ilgili antikor çözümler ayrı gün inkübe edilir. </li><li> 1 /; ertesi gün, bölümler üç yıkama solüsyonu oda sıcaklığında 2 saat atı gündeme biotinlenmiş anti-fare sekonder antikoru (Vektör Labs inkübasyon takip 10 dakikalık bir süre (0,1 M PBS/0.3% TX) yıkanır 0,1 M PBS/0.3% TX / 3% NHS 1000 dilüsyon). </li><li> 3 10 dakika yıkar daha da ayarladıktan sonra, oda sıcaklığında 1 saat süreyle avidin-biotin konjuge horseradish peroksidaz kompleksi (Vektör Labs) bir çözüm bölümleri yerleştirilir. </li><li> Son olarak, başka bir ayarladıktan sonra yıkar, bölümler nikel gelişmiş dia 10 dakika tabi tutulurminobenzidine (Ni-DAB) immunoreaktif nöronların içinde koyu mavi bir leke üretir tepki. </li><li> Histolojik prosedür bitiminde, bölümler, jelatin kaplı cam slaytlar monte edilmiştir. </li><li> Tüm bölümler, hava kuru bir gecede ve standart prosedürlere göre dakika muamele. </li></ol> Bölüm 3: Temsilcisi Sonuçlar: Bu yöntem, bütün bir maymun beyin çapında ilgi bir hedef protein tam bir ifade profili üretir. Burada FMRP, Neun ve aynı maymun beyni ifade SMI32 bir anlık sağlamak temsilcisi koronal bölümleri göstermektedir. <img src="/files/ftp_upload/1286/1286fig1.png" alt="" /> Şekil 1: Boyama çanak (A) ve sepet (B) İmmuno için serbest bölümden büyük ölçekli toplu işlem için kullanılır. <img src="/files/ftp_upload/1286/1286fig2.png" alt="" /> Şekil 2: FMRP (A), Neun (B) ve SMI32 (C) antikorları ile boyanan bir vervet maymun beyin Temsilcisi koronal kesitler.

<ol><li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+to+the+Care+and+Use+of+Experimental+Animals%22">Guide to the Care and Use of Experimental Animals</a>. Olfert, E. D., Cross, B. M., McWilliam, A. A. , Canadian Council on Animal Care. Ottawa. (1993).</li>
<li>Devys, D., Lutz, Y., Rouyer, N., Bellocq, J. P., Mandel, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+FMR-1+protein+is+cytoplasmic%2C+most+abundant+in+neurons+and+appears+normal+in+carriers+of+a+fragile+X+premutation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">The FMR-1 protein is cytoplasmic, most abundant in neurons and appears normal in carriers of a fragile X premutation.</a> Nat Genet. 4, 335-340 (1993).</li>
<li>Mullen, R. J., Buck, C. R., Smith, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NeuN%2C+a+neuronal+specific+nuclear+protein+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">NeuN, a neuronal specific nuclear protein in vertebrates.</a> Development. 116, 201-211 (1992).</li>
<li>Sternberger, L. A., Sternberger, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies+distinguish+phosphorylated+and+nonphosphorylated+forms+of+neurofilaments+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies distinguish phosphorylated and nonphosphorylated forms of neurofilaments in situ.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 80, 6126-6130 (1983).</li>
</ol>

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Mümkün bütün bir maymun beyin proteinlerin büyük ölçekli algılama yapan bu yordamı iki kritik adımlar vardır. Bir NSA özel bilgi kalır gömme ve kesit protokolü. Diğer HistoTools tarafından sağlanan boyama yemekleri ve sepetler. Ikincisi, belirli bir zamanda çok sayıda (~ 40) bölümleri kolay ve hızlı kullanım sağlar. Aynı zamanda beyin genelinde tüm bölümleri düzgün tedavi için gerekli olan araçları sağlar ve bilimsel bir ses histolojik tedavi için yapar. Buna ek olarak, gömülü yerlerinden kullanılması, kurutulmuş ve dak...

<table><tbody><tr><td>anti-FMRP monoklonal antikor</td><td>Chemicon International</td><td>MAB2160</td><td>Fikse edilmiş dokuda antijen geri kazanımı gerektirir.</td></tr><tr><td>anti-NeuN monoklonal antikor</td><td>Chemicon International</td><td>MAB377</td><td>Y/A</td></tr><tr><td>anti-Neurofilament H monoklonal antikor</td><td>Sternberger Monoclonals Inc.</td><td>SMI32</td><td>Y/A</td></tr><tr><td>Antijen Maske Açma Solüsyonu</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-3300</td><td>Y/A</td></tr><tr><td>Normal at serumu</td><td>Invitrogen</td><td>16050122</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Biyotinize Anti-Fare IgG (H+L), at kaynaklı</td><td>Vector Laboratories</td><td>BA-2000</td><td></td></tr><tr><td>VECTASTAIN ABC Kiti (Standart)</td><td>Vector Laboratories</td><td>PK-4000</td><td>1.5 mg</td></tr><tr><td>Yüzen kesitler için boyama kabı</td><td>HistoTools</td><td>10009</td><td>12 x 65 mm</td></tr><tr><td>Boyama taşıma sepeti</td><td>HistoTools</td><td>10012</td><td>büyük&lt;br/&gt;(12 x 65 mm kaba uygundur)</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>P8514B</td><td>Y/A</td></tr><tr><td>DAB</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC11209-0050</td><td>Y/A</td></tr></tbody></table>

tüm maymun beyin büyük Ölçekli protein algılama için toplu immün

Batch Immunostaining for Large-Scale Protein Detection in the Whole Monkey Brain

Immünhistokimyasal (İHK) hedef proteinlerin tespiti için en yaygın kullanılan laboratuvar teknikleri biridir<em&gt; In situ</em&gt;. Tüm beyin çapında bir hedef protein ifade deseni ile ilgili sorular, kemirgen gibi küçük beyinleri, İHK kullanırken cevap nispeten kolay. Ancak, primatlar gibi büyük ve karışık beyinleri, aynı soruları yanıtlarken, zorluklarla dolu bir dizi. Burada bir yetişkin maymun beyni hedef proteinlerin İmmuno için sistematik bir yaklaşım sunuyoruz. Bu yaklaşım, doku gömme ve kesit Neuroscience Associates metodolojisi (NSA) yanı sıra serbest bölümleri toplu boyama için özel olarak geliştirilen araçlar dayanmaktadır. Belirli bir aralıkta, tüm beyni temsil eder, bir dizi bölümleri düzgün boyama ile sonuçlanır. Sonucu lekeli bölümleri protein düzeyleri, belirli bir protein ifade nöronların nüfus ölçmek için analitik yöntemler çok çeşitli tabi tutulabilir.

Tüm primat beyin genelinde hedef proteinlere büyük ölçekli İmmuno gömerek yeni doku istihdam ve belirli bir zamanda birden fazla serbest bölümleri toplu boyama için yaratıcı cihazların kullanımı ile kombine yöntemler kesit mümkündür.

Tüm Maymun Beyin Büyük Ölçekli Protein Algılama için Toplu immün

İmmünohistokimya (IHC), hedef proteinlerin in situ tespitinde en yaygın kullanılan laboratuvar tekniklerinden biridir. ... ile ilgili sorular

Bu prosedür, çevreleyen matrise gömülü hizalama işaretçileri kullanılarak gömme işlemi yapılması için Neuroscience associates'e gönderilen; %4 PFA ile perfüze edilmiş, eksternalize edilmiş ve kriyoproteksiyonu sağlanmış bir beynin alınmasıyla başlar. Beyin, özel sepetler ve kaplar kullanılarak, beynin tüm anterior-posterior uzunluğunu temsil edecek şekilde, istenen kalınlıkta seri kesitler elde etmek amacıyla koronal plandan kesilebilir. Bir proteinin tüm beyindeki uzaysal ekspresyon paternini belirlemek için toplu immünoprosesleme işlemi gerçekleştirilebilir.Merhaba, ben Montreal Üniversitesi Optometri Okulu'ndaki Görsel Nörobilimler Laboratuvarı'ndan Dr. Shaheen Zur. Merhaba, ben de Montreal Üniversitesi Optometri Okulu'ndaki Görsel Nörobilimler Laboratuvarı'ndan Dr. Mark Burke. Merhaba, ben Montreal Üniversitesi Optometri Okulu'ndaki Görsel Nörobilim Laboratuvarı'nın direktörü Dr. Mo Petto.Bugün size, bütün bir maymun beyninde geniş ölçekli protein tespiti için kullanılan toplu immün boyama prosedürünü göstereceğiz. Laboratuvarımızda bu prosedürü, hedef proteinlerin tüm beyindeki ekspresyon modellerini incelemek ve aynı beyin içindeki bu proteinlerin ekspresyonlarını karşılaştırıp kıyaslamak için kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım.Histolojik işleme başlamadan önce; sistemik perfüzyon ile korunan, fiksasyon sonrası işlemden geçirilmiş ve dereceli sakkaroz çözeltileri kullanılarak kriyokoruma uygulanmış bir primat beyni temin edin. Bu aşamada beyin, gömme işlemi yapılması ve tescilli teknolojileri kullanılarak serbest kesitlerin alınması için nörobilim uzmanlarına gönderilir. Geri döndüğünde, kesitlerin uygun şekilde yönlendirilebilmesi ve histolojik işlem tamamlandıktan sonra yeniden hizalanabilmesi için gömme matrisine yedi adet hizalama işaretinin yerleştirildiği görülecektir.Kesit alma işlemi gerçekleştirilirken, daha sonra anatomik haritaların 3B rekonstrüksiyonu için kullanılabilecek dijital görüntüler alınır. Sinirbilim uzmanı ortaklarımız, tüm beyin boyunca 50 µm kalınlığında seri, serbest yüzen koronal kesitler elde etmek için dokumuzu işler. Bu işlem tamamlandığında, kesitlerin histolojik işlemine başlayabiliriz.Histolojik işleme başladığımızda, genellikle antikor veya boya başına işlenecek yaklaşık 140 kesitimiz olur. Burada tekniği, fosforile olmamış nörofilament proteinlerine karşı monoklonal bir antikor olan SMI 32 antikoru ile işlem görmüş daha küçük bir kesit örneği üzerinde göstereceğiz. Prosedür boyunca, çok sayıda serbest yüzen kesitin eş zamanlı ve verimli bir şekilde işlenmesine olanak tanıyan özel boyama kapları ve sepetleri kullanılır.Bu, elde edilen boyamanın tüm kesitlerde tutarlı olmasını sağlar. İlk adım, kesitlerin TRITTON X 100 ve normal at serumu içeren PBS bazlı bir çözeltide 60 dakika boyunca inkübe edilmesidir. Bu işlem, arka plan boyanmasına neden olan antikor moleküllerinin spesifik olmayan bağlanmasını azaltacaktır.Ardından, kesitler gece boyunca inkübe edilir. Ertesi gün kesitler, yıkama solüsyonu ile üç kez 10 dakikalık periyotlarla yıkandıktan sonra; Triton X 100 ve normal at serumu ile desteklenmiş, PBS bazlı biotinize Muse sekonder antikor solüsyonu içerisinde oda sıcaklığında iki saat boyunca inkübe edilir. Bu işlem, Triton X 100 ve normal at serumu içeren PBS bazlı SMI 32 antikor solüsyonunda gerçekleştirilir.Üç kez tekrarlanan 10 dakikalık ek yıkama işlemlerinin ardından kesitler, oda sıcaklığında bir saat boyunca avadon biotin konjugatlı yaban turpu peroksidaz kompleksi çözeltisine yerleştirilir. Son olarak, bir başka yıkama setinin ardından kesitler, immunoreaktif nöronlar içinde kahverengi bir boyama oluşturan D amino benzin reaksiyonuna 10 dakika boyunca bırakılır. Boyama sepetinin çıkarılması ve kesitlerin PBS içine daldırılmasıyla reaksiyon durdurulur.PBS ile iki ila üç kez, beşer dakikalık durulama yapıldıktan sonra kesitler, büyük bir Petri kabı ve çok yumuşak resim fırçaları kullanılarak montaj işlemine başlanmak üzere cam lamlar üzerine tek tek yerleştirilmeye hazırdır. Kesitler PBS tampon çözelti kabından alınır ve jelatin kaplı cam lamlar üzerine tek tek monte edilir. Örneklerin ardından bir çeker ocak içerisinde gece boyunca havada kuruması sağlanır.Montaj işleminden kalmış olabilecek tuz kristallerini temizlemek için kesitler, deiyonize suya daldırılarak durulanır. Ardından lamlar, dereceli etanol basamaklarıyla dehidre edilir, ksilen ile temizlenir ve per mount montaj medyumu ile kapatılır. Bu aşamada lamlar, montaj medyumunun sertleşmesine izin vermek için yaklaşık bir hafta ila 10 gün boyunca yatay konumda saklanmalıdır.Bundan sonra lamlar, bir lam kutusunda saklanabilir veya mikroskopi yoluyla görüntülemeye tabi tutulabilir. Bu yöntem, hedef alınan bir proteinin tüm maymun beyni boyunca eksiksiz bir ekspresyon profilini oluşturur. Burada, FMRP, neuN ve SMI 32 ekspresyonunun anlık görüntüsünü sunan temsili koronal kesitleri gösteriyoruz.Aynı maymun beyninde. Az önce, tüm beyin boyunca ilgilenilen bir hedef protein için toplu immün boyamanın nasıl tamamlanacağını gösterdik. Bu prosedür uygulanırken, tüm kesitlerin çeşitli çözeltilerde inkübe edilirken hafifçe çalkalandığından ve her an tamamen daldırılmış durumda kaldığından emin olmak önemlidir.Ek olarak, diseksiyonları lam üzerine yerleştirirken acele etmeyin ve dokunun bütünlüğüne zarar vermeden mümkün olduğunca çok kırışıklığı ve katlanmayı giderin. İşte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

batch-immunostaining-for-large-scale-protein-detection-whole-monkey

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Beyin bankacılık ve biyolojik materyalin sistematik örnekleme tarafsız stereology temelini sağlar ve olası veri her numune elde edilen en üst düzeye çıkarır.

Beyin Bankacılık: Araştırma Örneklerinin En iyi şekilde

Biz, kemirgenler ve insan olmayan primatlardan farklı yaşlarda beyin dilimleri nöron gibi DII floresan boyalar, tanıtmak için, gen tabancasının kullanımını göstermektedir. Bu özel durumda, yetişkin farelerin (3-6 ay) ve yetişkin cynomologus maymunlar (9-15 yaşında) kullanın. Dr Lichtman laboratuvar tarafından açıklanan bu teknik,...

Kemirgen Nöronlar ve Sigara insan Primate Beyin Slices DiOLISTIC Etiketleme

Nöral devreler topografik spesifik moleküler profilleri ile fonksiyonel bölme halinde düzenlenmiştir. Burada, çok yönlü bir wholemount immünohistokimyasal yaklaşımını kullanarak global beyin topoğrafya ortaya çıkarılması için pratik ve teknik adımları sağlar. Bu iyi anlaşılmış cytoarchitecture ve beyincik devre kullanarak yöntemin yardımcı göstermektedir.

Revealing Kompleksi Beyin Topografya Wholemount İmmünohistokimya

Kaynak: Eid, L. &amp; Parent, M. İmmünohistokimya ve Elektron Mikroskobu için İnsan Olmayan Primat Beyin Dokusunun Hazırlanması. J. Vis. Uzm. (2017). Bu video, elektron mikroskobu için önceden gömme immünohistokimya kullanılarak aldehitle sabitlenmiş insan olmayan primat beyin dokusunun hazırlanmasını göstermektedir. Spesifik bir nöronal proteinin immüno-etiketleme adımlarını ana hatlarıyla belirtir, ardından renkli bir çökelti üreten bir peroksidaz reaksiyonu ile hedef proteinin elektron...

İnsan Dışı Primat Beyin Dokusunda İmmünohistokimya Yapılması

Bu giriş seviyesi protokolü, örnek olarak mikroglia ve nöronal elementler için belirteçler kullanarak, kemirgen beyinlerinin immünohistokimyasal boyamasını tamamlamak için gereken reaktifleri, ekipmanı ve teknikleri açıklar.

Mikroglia ve nöronlar için örnek Boyama: Cryosectioned Rat Beyin Dokusu Üzerine İmmünohistokimya için Astar

Burada, kolay ve düşük maliyetli sağlar ve zaman tasarrufu sağlayan bir protokol kimyasal transmisyon elektron mikroskobu için immünohistokimya ön gömme uyumlu uzun süreli koruma sağlayan, akrolein sabitleyici ile primat beyin dokusunun düzeltmek için.

İmmünohistokimya ve elektron mikroskobu Ön gömme için İnsan Olmayan Primat Beyin Dokusu Hazırlanması

Burada, bir sinaptik protein ayirt boyama kullanarak işaret protein, confocal mikroskobu ve bilgisayar tabanlı analiz göre dağılımını belirlemek için nicel bir yaklaşım açıklar.

Türdeş olmayan dağıtım ayirt kullanarak fare beynindeki bir sinaptik protein miktarının

Burada, İmmünohistokimya ve yüksek çözünürlüklü beyin bölgelerinin proteinleri için tarama ile birlikte yakın kızılötesi boyalar kullanan bir protokol sunuyoruz.

Kemirgen beyninde protein Ifadesini ölçmek için yakın kızılötesi floresan ve yüksek çözünürlüklü tarama kullanma

Bu protokol, perfüzyon, beyin kesiti, serbest yüzen immünostaining, doku montajı ve görüntüleme dahil olmak üzere fare beyni histolojik çalışmaları için verimli ve tekrarlanabilir bir yaklaşımı açıklar.

Fare Beyinlerinin Serbest Yüzen İmmünasyon

Seri iki fotonlu tomografi (STPT) görüntüleme, iki fotonlu görüntülemeyi otomatik evre kontrolü ve mikrotom dilimleme ile birleştirerek bir doku kütlesini üç boyutlu şeklinde görüntülemek için kullanılan bir tekniktir. Burada, marmoset beyinlerinin yapısal özelliklerini daha iyi anlamaları için bunu uygulamak için bir protokol açıklıyoruz.

Nöroanatomik Analizler için Tüm Marmoset Beyninin Seri İki Fotonlu Tomografisi

Modern sinirbilimler, laboratuvar kemirgenleri ve insanlar dahil olmak üzere birçok tür arasındaki farkları keşfetmelidir. Ancak büyük beyinli memeliler söz konusu olduğunda teknik zorluklar ortaya çıkar. Bu yaklaşım, çok farklı memelilerde nöronal popülasyonların türler arası varyasyonlarını ele alır ve evrimsel kalıpların ortaya çıkarılması için haritalanacak benzer sonuçlar sunar.

Farklı Memeli Beyinlerinde Nicel Hücre Sayımı Çalışmaları İçin Karşılaştırmalı Yaklaşım

Öğrenin, maymun beyninde büyük ölçekli protein algılama için toplu immün boyama yöntemini. Seri koronal kesitler ve özel sepetlerle tüm beyinde protein ifade desenlerini analiz edin.

Tüm Maymun Beyin Büyük Ölçekli Protein Algılama için Toplu immün

Daha fazla video keşfet