Katı Örneklerden Primer Over Kanseri Hücrelerinin Elde Edilmesi: Over Tümörü Örneklerinden Epitelyal Over Kanseri Hücrelerinin Kültürlenmesinde Bir Yöntem

Yumurtalığın dış yüzeyinde bulunan epitel hücreleri, yumurtalık tümörlerine dönüşebilen kanserli hücrelere kötü huylu dönüşüm geçirebilir.

Bu epitelyal yumurtalık kanseri hücrelerini veya EOC'leri izole etmek için, bir yumurtalık tümörü örneği alarak başlayın ve küçük parçalar halinde doğrayın. Kıyılmış parçaları, istenen proteaz enzimi ile desteklenmiş bir sindirim tamponu içeren bir tüpe aktarın.

Bu proteazlar, doku içindeki hücre dışı matriks proteinlerini bozarak EOC hücrelerini, eritrositleri ve birkaç ayrışmış fibroblastı süspansiyona bırakır.

Asılı tek hücreleri ayrışmamış doku parçalarından ayırmak için hücre bulamacını bir süzgeçten süzün. EOC hücrelerini, eritrositleri ve fibroblastları peletlemek için süspansiyonu santrifüjleyin. Enzim içeren süpernatanı atın.

Hücre peletini bir epitelyal büyüme ortamına yeniden süspanse edin ve bir kültür kabına aktarın. Eritrositler ortamda yüzerken, EOC hücrelerinin ve fibroblastların tabağın tabanına yapışmasına izin vermek için kültürü inkübe edin.

Ortamı tazeleyerek asılı eritrositleri çıkarın. Zamanla, ortam, birincil yumurtalık kanseri hücrelerinin tek tabakasını oluşturmak için EOC hücrelerinin fibroblastlar üzerinde seçici büyümesini kolaylaştırır.

Numuneyi ameliyathaneden alın ve buz üzerinde laboratuvara taşıyın. Yine de taşınan kabın içinde, numuneyi biyolojik bir güvenlik başlığına yerleştirin. Numuneyi 50 mililitrelik konik bir tüpten 10 mililitre taze buz gibi soğuk PBS içeren 60 milimetreye 60 milimetrelik bir Petri kabına aktarın.

Daha sonra, steril bir tıraş bıçağı kullanarak, numuneyi 2 milimetre veya daha küçük parçalar halinde kesin. Daha sonra, DMEM'i 15 mililitrelik konik bir tüpte dispas II ile tedavi edin. Kıyılmış dokuları DMEM dispase II karışım tüpüne aktarın. Ardından, numuneyi 30 dakika boyunca %5 karbondioksit ve 37 santigrat derecede inkübe edin. Optimum sindirimi sağlamak için hücre bulamacını her beş dakikada bir manuel olarak çalkalayın.

İnkübasyondan sonra, hücre bulamacını 50 mililitrelik bir konik tüpün üzerine yerleştirilmiş 70 mikrometrelik bir ağ hücre süzgecinden geçirin. Bir şırınga pistonu kullanarak ağa hafifçe baskı uygulayın. Ağın üstünde kalan ayrışmamış dokuyu atın ve elde edilen hücre süspansiyonunu 50 mililitrelik steril konik tüpte toplayın.

Daha sonra, konik tüpü 320 x g'da 4 santigrat derecede yedi dakika santrifüjleyin. Süpernatanı atın ve hücre peletini %10 FBS ve %1 PS içeren 10 mililitre DMEM'de yeniden süspanse edin. Daha sonra, hücre süspansiyonunu bir Petri kabına aktarın ve süspansiyonu% 5 karbondioksit ve 37 santigrat derecede inkübe edin. Hücresel kalıntıları ve kültürde bulunan eritrositlerin çoğunu çıkarmak için ilk kaplamadan 24 saat sonra ortamı değiştirin.

Son olarak, takip eden iki hafta boyunca ortamı her üç günde bir değiştirin, ardından birincil EOC hücrelerinin kültürleri aşağı akış uygulamaları için hazır hale gelir.

• Ovarian Tumor Sample - The tissue of origin from an ovarian tumor, used for lab analysis.
• Epithelial Ovarian Tumor Sample - A subtype of ovarian tumor sourced from epithelial cells.
• Ovarian Cancer Sample - Biopsy or excision sample of an ovarian malignant growth.
• DMEM - Standard cell culture medium used for growing mammalian cells.
• FBS - Fetal Bovine Serum, a supplement used in cell cultures to promote growth and survival.

• Introduce Ovarian Tumor Sample – The sample retrieved from patients, used for cellular analyses (e.g., epithelial ovarian tumor sample).
• Key Concepts – Overview of sample processing techniques (e.g., mincing, digestion).
• Underlying Mechanisms – Dissecting the biochemical processes during sample handling, e.g., enzymatic digestion and cell plating.
• Connect to Experiment – The cultivation of epithelial ovarian cancer cells paves the way for further cancer research.

• What is an ovarian tumor sample and how to process it?
• How does the sample processing facilitate downstream applications?
• Why does cell slurry need to be strained and centrifuged?

• Practical Applications – Ovarian cancer research and possible therapeutic development (e.g., drug screening).
• Industry Impact – Used in biomedical research and pharmaceutical industry (e.g., cancer drug development).
• Societal Importance – Advances in ovarian cancer treatment can increase survival rates (e.g., patient prognosis).
• Link to scientific Advancements – Adoption of this methodology contributes to cancer research advancements.