Aktin ve Mikrotübül Eşleşme Dinamiğini Görselleştirmek için TIRF Mikroskobu

Aktin monomerleri, mikrofilamentler adı verilen ince lifler oluşturmak için baştan kuyruğa polimerize olur. Benzer şekilde, tübülin dimerleri daha uzun içi boş silindirik mikrotübüller halinde polimerize olur. Bu hücre iskeleti bileşenleri hücre şeklini korur ve hücresel hareketliliği kolaylaştırır.

Toplam iç yansıma mikroskobu, TIRF ile aktin-mikrotübül eşleşme dinamiklerini görselleştirmek için özelleştirilmiş bir görüntüleme düzeneği alın.

Görüntüleme düzeneği iki lamelden oluşur: bir üst m-PEG silan kaplı lamel ve bir alt biotin-PEG silan kaplı lamel . İki lamel çift taraflı yapışkan bantla uzunlamasına aralıklandırılır ve bir akış kanalı oluşturmak için her iki uçta sızdırmaz hale getirilir.

Hazneyi doldurmak için BSA'yı akış kanalına pipetleyin. Streptavidin çözeltisi ekleyin ve inkübe edin. Streptavidin molekülleri, alt lamellerin PEG-silanına bağlı biyotin moleküllerine bağlanır.

TIRF tamponunu kanala akıtın. Etiketlenmemiş, biyotin etiketli ve mor florofor etiketli aktin monomerleri ile birlikte etiketlenmemiş ve yeşil florofor etiketli tübülin dimerleri içeren bir hücre iskeleti karışımı çözeltisi ekleyin.

Daha sonra, ATP - aktin polimerizasyonunu teşvik edici ajan ve GTP