Mikrotübül Dinamiğinin Etiketsiz Görselleştirilmesi için Girişim Yansıma Mikroskobu

Girişim yansıma mikroskobu, dinamik olarak büyüyen ve küçülen mikrotübüllerin görüntülenmesini sağlar.

Parafin şeritlerini bir lamel üzerine sabitleyin ve üstüne biraz daha küçük bir lamel yerleştirin. Parafini eritmek için ısıtın, kapalı bir kanal oluşturun. Kanaldan antikor içeren bir çözelti pipetleyin. Antikorlar lamel yüzeyine yapışır. Antikora bağlanmamış bölgeleri bloke eden ve spesifik olmayan protein bağlanmasını önleyen bir bloke edici çözelti ekleyin.

Lameli mikroskop tablasına yerleştirin. Numune ısıtıcısını mikrotübül büyümesini kolaylaştıran bir sıcaklığa ayarlayın.

Hidrolize edilemeyen bir guanozin trifosfat, GTP, analog ile stabilize edilmiş pipet mikrotübül tohumları. Tohumlar antikor kaplı lamel ile bağlanır. Etiketlenmemiş tübülin, GTP ve indirgeyici maddeler içeren bir tampon ekleyin.

Optimum sıcaklık ve tampon koşullarında, tohumlar çekirdeklenme bölgeleri olarak işlev görür ve etiketlenmemiş tübül bağlanmasına ve mikrotübül büyümesine izin verir.

Görüntülemeye başlayın. Gelen ışık, bir diyafram açıklığı diyaframından, ışığı kısmen objektife yansıtan ve numuneyi aydınlatan bir ışın ayırıcıya odaklanır. Lamelin cam-tampon arayüzü, gelen ışığı kısmen yansıtır. Ka