JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 5:19 dk. • July 8th, 2025
Bağışıklık hücrelerinde, inflamatuar bir kaspaz olan kaspaz-1, inaktif bir formda bulunan bağışıklığa duyarlı önemli bir bileşendir. Bu aktif olmayan formlar, katalitik bir alanla kaynaşmış bir pro-alandan oluşur ve yakınlık kaynaklı dimerizasyon yoluyla aktif hale gelir.
Kaspaz aktivasyonunu in vivo olarak görselleştirmek için, kırmızı floresan proteinleri ve bir çift floresan tamamlama raportör proteinini eksprese eden, transfekte edilmiş insan monositinden türetilmiş makrofajların bir kültürü ile başlayın. Raportör proteinler, Venüs proteininin floresan olmayan fragmanları, Venüs-N veya Venüs-C ile kaynaşmış bir kaspaz-1 pro-alanı içerir.
Hücreleri, bakteri kaynaklı bir inflamatuar uyarıcı olan lipopolisakkaritler ve potasyum iyonoforlar - nigerisin içeren bir görüntüleme ortamı ile tedavi edin.
Lipopolisakkaritler, makrofaj üzerindeki örüntü tanıma reseptörleri ile etkileşime girerek bir inflamatuar kompleksin montajını başlatır.
Nigerisin molekülleri hücreye girer ve potasyum iyonlarına bağlanarak hücre dışı ortama akışlarına neden olur ve hücre içi potasyum iyon konsantrasyonunu azaltır. Bu, enflamatuar sensör proteinlerinin, sensör proteini ile prokaspaz-1 arasında bir köprü
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin