JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:49 dk. • July 8th, 2025
Tabanda filtreleri olan çok kuyulu bir plaka alın.
Farklı sitokinler içeren bir test örneği ekleyin.
Boyut ve iç floresan yoğunluğuna göre farklılaşan farklı mikro küre setleri ekleyin.
Her set, belirli bir sitokini hedefleyen bir antikora konjuge edilir.
Plakayı karanlıkta çalkalama altında inkübe edin.
Antikorlar hedef sitokinlerine bağlanarak onları mikroküreler üzerinde hareketsiz hale getirir.
Bağlanmamış sitokinleri çıkarmak için bir vakum uygulayın. Mikroküreye bağlı sitokinler, zarın daha küçük gözenek boyutu nedeniyle korunur.
Mikroküre bağlı sitokinlere bağlanan biyotin konjuge tespit antikorlarından oluşan bir kokteyl ekleyin.
Bir floresan muhabir konjuge streptavidin ekleyin ve çalkalama altında karanlıkta inkübe edin. Streptavidin biotin'e bağlanır ve muhabiri mikroküre kompleksi üzerinde hareketsiz hale getirir.
Bağlanmamış molekülleri çıkarın ve mikro küreleri yeniden süspanse edin.
Akış sitometrisini kullanarak, mikrokürelerin boyutunu ve iç floresansını belirleyerek bağlı sitokinleri tanımlayın.
Belirli bir sitokin miktarını belirlemek için, raportörün floresan yoğunluğunu ölçün.
Testi gerçekleştirmek için, kullanmadan önce tüm reaktiflerin oda sıcaklığına ısınması
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin