Name: Dalak intravital Mikroskopi: Parazit Mobilite ve Kan Akımının Kantitatif Analiz (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 36 s
Description: Öğrenin dalakta parazit hareketliliğini ve kan akışını GFP transgenik sıtma parazitleriyle kantitatif intravital mikroskopi kullanarak değerlendirme yöntemini. Bu teknik, canlı dokularda parazit dinamiklerini gerçek zamanlı analiz etmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

A. Bosch (Konfokal Birimi, CCIT-UB, IDIBAPS), GFP transgenik parazitler bağış J. Burns, S. Graewe ve V. Heussler sıtma parazitleri intravital mikroskopi başlangıç ​​eğitimi ve sürekli giriş için özellikle teşekkür ediyoruz görüntü analizi ve teknik yardım için ölçümlerini ve P. Astola yardım. Biz R. Tous I. Caralt ve video üretimi için teşekkür ederiz. MF Katalonya Genellik bir yüksek lisans bursu bir alıcı. HAP bir ICREA araştırma profesörü. HAP laboratuvar, hibe anlaşması N çerçevesinde Avrupa Topluluğu Yedinci Çerçeve Programı (FP7/2007-2013) ° 242.095, Özel Vakfı Cellex (Katalonya, İspanya) ve İspanyol Bilim ve Yenilik Bakanlığı (tarafından finanse edilmektedir SAF2009-07760).

<ol><li>Amino, R., Menard, R., Frischknecht, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+malaria+parasites--recent+advances+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of malaria parasites--recent advances and future directions.</a> Curr. Opin. Microbiol. 8, 407-414 (2005).</li>
<li>Heussler, V., Doerig, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+enters+parasitology%5BTitle%5D)+AND+%22Trends.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging enters parasitology.</a> Trends. Parasitol. 22, 192-195 (2006).</li>
<li>Amino, R., Thiberge, S., Blazquez, S., Baldacci, P., Renaud, O., Shorte, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+malaria+sporozoites%5BTitle%5D)+AND+%22in+the+dermis+of+the+mammalian%22%5BJournal%5D)">Imaging malaria sporozoites.</a> in the dermis of the mammalian. 2, 1705-1712 (2007).</li>
<li>Gueirard, P., Tavares, J., Thiberge, S., Bernex, F., Ishino, T., Milon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+malaria+parasite+in+the+skin+of+the+mammalian+host%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Development of the malaria parasite in the skin of the mammalian host.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 107, 18640-18645 (2010).</li>
<li>Sturm, A., Amino, R., van de Sand, C., Regen, T., Retzlaff, S., Rennenberg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manipulation+of+host+hepatocytes+by+the+malaria+parasite+for+delivery+into+liver+sinusoids%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Manipulation of host hepatocytes by the malaria parasite for delivery into liver sinusoids.</a> Science. 313, 1287-1290 (2006).</li>
<li>Gruring, C., Heiber, A., Kruse, F., Ungefehr, J., Gilberger, T. W., Spielmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+host+cell+modifications+of+Plasmodium+falciparum+blood+stages+in+four+dimensions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Development and host cell modifications of Plasmodium falciparum blood stages in four dimensions.</a> Nat. Commun. 2, 165-165 (2011).</li>
<li>Martin-Jaular, L., Ferrer, M., Calvo, M., Rosanas-Urgell, A., Kalko, S., Graewe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-specific+spleen+remodelling+in+Plasmodium+yoelii+infections+in+Balb%2Fc+mice+facilitates+adherence+and+spleen+macrophage-clearance+escape%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Strain-specific spleen remodelling in Plasmodium yoelii infections in Balb/c mice facilitates adherence and spleen macrophage-clearance escape.</a> Cell. Microbiol. 13, 109-122 (2011).</li>
<li>Linden, M. vander, R, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Plasmodium+berghei+reference+line+that+constitutively+expresses+GFP+at+a+high+level+throughout+the+complete+life+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biochem.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">A Plasmodium berghei reference line that constitutively expresses GFP at a high level throughout the complete life cycle.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 137, 23-33 (2004).</li>
<li>Cormack, B. P., Valdivia, R. H., Falkow, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS-optimized+mutants+of+the+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">FACS-optimized mutants of the green fluorescent protein.</a> 173, 33-38 (1996).</li>
<li>Dunn, K. W., Sandoval, R. M., Kelly, K. J., Dagher, P. C., Tanner, G. A., Atkinson, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+studies+of+the+kidney+of+living+animals+using+multicolor+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Cell.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Functional studies of the kidney of living animals using multicolor two-photon microscopy.</a> Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 283, C905-C916 (2002).</li>
<li>Zhong, Z., Petrig, B. L., Qi, X., Burns, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+measurement+of+erythrocyte+velocity+and+retinal+blood+flow+using+adaptive+optics+scanning+laser+ophthalmoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Express%22%5BJournal%5D)">In vivo measurement of erythrocyte velocity and retinal blood flow using adaptive optics scanning laser ophthalmoscopy.</a> Opt. Express. 16, 12746-12756 (2008).</li>
<li>Miller, M. J., Wei, S. H., Parker, I., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+imaging+of+lymphocyte+motility+and+antigen+response+in+intact+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Two-photon imaging of lymphocyte motility and antigen response in intact lymph node.</a> Science. 296, 1869-1873 (2002).</li>
<li>Bowdler, A. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBowdler%2C+AJ+%22The+complete+spleen%22">The complete spleen</a>. , Totowa. Humana Press. (2002).</li>
<li>Grayson, M. H., Hotchkiss, R. S., Karl, I. E., Holtzman, M. J., Chaplin, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy+comparing+T+lymphocyte+trafficking+to+the+spleen+and+the+mesenteric+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart.+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy comparing T lymphocyte trafficking to the spleen and the mesenteric lymph node.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 284, H2213-H2226 (2003).</li>
<li>Khandoga, A. G., Khandoga, A., Reichel, C. A., Bihari, P., Rehberg, M., Krombach, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+and+quantitative+analysis+of+leukocyte+directional+migration+and+polarization+in+inflamed+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS.+One%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging and quantitative analysis of leukocyte directional migration and polarization in inflamed tissue.</a> PLoS. One. 4, 4693-4693 (2009).</li>
<li>Weiss, L., Geduldig, U., Weidanz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+splenic+control+of+murine+malaria%3A+reticular+cell+activation+and+the+development+of+a+blood-spleen+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Anat%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of splenic control of murine malaria: reticular cell activation and the development of a blood-spleen barrier.</a> Am. J. Anat. 176, 251-285 (1986).</li>
<li>Swirski, F. K., Nahrendorf, M., Etzrodt, M., Wildgruber, M., Cortez-Retamozo, V., Panizzi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+splenic+reservoir+monocytes+and+their+deployment+to+inflammatory+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of splenic reservoir monocytes and their deployment to inflammatory sites.</a> Science. 325, 612-616 (2009).</li>
<li>Grayson, M. H., Chaplin, D. D., Karl, I. E., Hotchkiss, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confocal+fluorescent+intravital+microscopy+of+the+murine+spleen%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Confocal fluorescent intravital microscopy of the murine spleen.</a> J. Immunol. Methods. 256, 55-63 (2001).</li>
<li>Bajenoff, M., Glaichenhaus, N., Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblastic+reticular+cells+guide+T+lymphocyte+entry+into+and+migration+within+the+splenic+T+cell+zone%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Fibroblastic reticular cells guide T lymphocyte entry into and migration within the splenic T cell zone.</a> J. Immunol. 181, 3947-3954 (2008).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu kemirgen sıtma modeli dalak intravital mikroskopi uygulanması olasılığı şu ana kadar teknik değerlendirmeler için bir &quot;kara kutu&quot; nedeniyle kabul edilmiştir bu organ sayesinde dinamik geçiş parazitleri araştıran açtı. Burada, büyük bir çaba, tek ve nüfus düzeyleri farklı parazit hatları karşılaştırmalı analizi sağlayan kantitatif bir yöntem uyarlamak için konulmuştur. Hızlı ve yavaş önce sıtma 3,5 görüntülenmiştir diğer doku ve hücrelerinin aksine, görüntüleme yoluyla pRBCs dalak geçit organın üç...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktifi Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Leica TCS-SP5 konfokal mikroskop </td><td> Leica Microsystems, Heidelberg, Almanya </td><td> TCS-SP5 Seri no. 5100000419 </td><td></td></tr><tr><td> Ketamin (Ketolar 50 mg / ml) </td><td> Pfizer </td><td> 631028 </td><td></td></tr><tr><td> Midazolam 15 mg / 3 ml </td><td> Normon </td><td> 838193 </td><td></td></tr><tr><td> Texas Red konjuge 70.000 MW Dextran&#39;ın </td><td> Moleküler Probları </td><td> D1830 </td><td></td></tr><tr><td> Floresein izotiyosiyanat, izomeri (FITC) </td><td> Sigma </td><td> F7250 </td><td></td></tr><tr><td> Hoechst 33.342 </td><td> Sigma </td><td> H1399 </td><td></td></tr><tr><td> Giemsa leke </td><td> Sigma </td><td> GS1 </td><td> Çalışma çözüm distile su% 10 </td></tr><tr><td> Super Glue-3 Loctite </td><td> Loctite </td><td> 9975-0880 </td><td></td></tr></tbody></table>

dalak intravital mikroskopi: parazit mobilite ve kan akımının kantitatif analiz

Intravital Microscopy of the Spleen: Quantitative Analysis of Parasite Mobility and Blood Flow

Parazit-konak etkileşimleri 1,2 bilgisine deneysel kemirgen sıtma modelleri intravital mikroskopi gelişiyle büyük ilerlemelere yol açmıştır. Böylece, deri lenf düğümleri 3, 4 cilt parazit tam gelişimi ve hepatosit-türevli merosome göçü sağlamak için bir oluşum içine öncesi eritrosit aşamaları sırasında, sıtma parazitleri in vivo görüntüleme aktif giriş parazitlerin ortaya . 5 kan akışı içine merozoites bırakın. Ayrıca, bireysel eritrositler parazitlerin gelişme son zamanlarda 4D görüntüleme ile belgelenir ve sıtma 6 protein ihracat meydan olmuştur . Böylece, intravital görüntüleme Plasmodium gelişiminde önemli olaylar bizim kökten değişmiştir. Ne yazık ki, dalak, önemli bir lenfoid organ aracılığıyla sıtma parazitleri dinamik geçiş çalışmaları zarif bulaşmış kırmızı b temizlemek için adaptelood hücreleri teknik kısıtlamaları nedeniyle eksiktir. Balb / c farelerde sıtma Plasmodium yoelii fare modeli kullanılarak, dalak intravital görüntüleme uygulanması ve sırasında kırmızı hamuru fibroblastik kökenli bariyer hücreleri rapor diferansiyel şekillenmesi ve bağlılığı, parazitlenene kırmızı kan hücreleri (pRBCs ) P.yoelii 17XL ölümcül bir parazit hat 7 ile enfeksiyonlara karşı öldürücü olmayan parazit hat P.yoelii 17X ile enfeksiyon gibi. Bu sonuçlara ulaşmak için, ImageJ özgür yazılım kullanarak belirli bir metodoloji karakterizasyonu tek pRBCs hızlı üç boyutlu hareketi sağlamak için geliştirilmiştir. Bu protokol ile elde edilen sonuçlar, dalak parazitlerin hızı, yönlülük ve ikamet süresi belirlenmesinde izin, tüm parametreler in vivo olarak bağlılık adresleme . Buna ek olarak, kan akışını intravital mikroskopi kullanılarak kantifikasyon ve farklı kullanımı için metodoloji raporferent, karmaşık dalak mikrosirkulasyonu yapısını anlamak için renklendirme ajanları. Etik bir bildirimde Tüm hayvan çalışmaları Barcelona CEEA-UB (: 5429 Protokolü DMAH) Üniversitesi Hayvan Deneyleri Etik Komitesi tarafından onaylanmış kurallar ve protokoller uyarınca, Barselona Üniversitesi hayvan tesislerinde yapıldı. Charles River Laboratuvarları yaş 6-8 hafta Erkek Balb / c farelerde elde edilmiştir.

GFP transgenik sıtma parazitleri ve bu organ içinde parazit hareketlilik ve kan akımının ölçülmesi ile dalak intravital mikroskobi gerçekleştirmek için yöntem gösteriyor.

Dalak intravital Mikroskopi: Parazit Mobilite ve Kan Akımının Kantitatif Analiz

Deneysel kemirgen sıtma modellerinde intravital mikroskobinin gelişi, parazit-konak etkileşimlerine dair bilgilerin önemli ölçüde ilerlemesini sağlamıştır 1,2. ...

Bu prosedürde, parazitlerin dalaktan geçiş dinamiklerini değerlendirmek için kullanılan Kantitatif intravital mikroskopi yaklaşımını gösteriyoruz. Bir kemirgen sıtma modelinde, GFP transgenik parazitler ile enfekte edilmiş fareler, dalak intravital mikroskopisi için hazırlanır; dalak ven kanülasyonu, intravital boyaların enjekte edilmesine olanak tanır. Deney sırasında, floresan işaretli hücrelerin dalağın farklı bölgelerindeki hareketleri görüntülenir.Kırmızı pulpanın üç boyutlu yavaş kompartmanındaki parazit hareketliliğini tanımlamak için gerekli metodolojiyi sunuyor ve damar kan akışını hesaplıyoruz. Bu parametreler, iki PULE suşunun dalak dinamiklerini karşılaştırmak için kullanılmıştır. Herkese merhaba.Benim adım Nando El Portillo ve laboratuvarımdaki temel araştırma sorularından biri, sırtın sıtmadaki rolünü anlamaya çalışmaktır. Splenomegali bu hastalığın belirgin özelliklerinden biridir, ancak teknik ve etik sorunlar nedeniyle bu organ üzerine çalışmalar yürütmek oldukça zordur. Bunu başarmak için, bu parazitin dinamik geçişini görmemize ve bu olayı nicelleştirmemize olanak tanıyan teknolojiler geliştirdik.Lorena ve MI bu protokollerde bunları açıklayacaklar. Bu araştırma, kısmen Almanya'daki Hamburg Üniversitesi'nden Dr. Ler'in grubu ve buradaki hastane kliniğinden Dr. Maria Kbo'nun grubu ile iş birliği içinde yürütülmekte olup Cellex vakfı ve İspanya'daki CIA bakanlığının genel finansman desteğini almıştır. Enfeksiyon, %10 parazit oranında, letal veya non-letal GFP parazitleri ile enfekte edilmiş Donör M'den başlatılır. Parazit kontrolü için farenin kuyruk veninden küçük bir damla kan alınarak mikroskoba yayılır.GIM çözeltisi ile kolometrik boyama lamı hazırlayın. Bir çözelti, kurutulduktan sonra enfekte kırmızı kan hücrelerinin görselleştirilmesine olanak sağlayacaktır; kan yaymasını iki dakika boyunca Metanol ile sabitleyin, GIM çözeltisini uygulayın ve 20 dakika inkübe edin. Lamı akan musluk suyu ile yıkayın ve kurutun; 100x yağlı objektife sahip bir ışık mikroskobu kullanarak toplam RBC'ler üzerinden pbcs yüzdesini sayın.Donör farelerin kuyruk kanından alınan ve PBS ile seyreltilen letal veya non-letal parazitlerle fareleri enfekte edin. Enfeksiyon sonrası üçüncü günde %1'lik bir periferik parazit düzeyine ulaşmak amacıyla, fare başına yarım milyon parazit enjekte edilecek şekilde dozu ayarlayın ve intraperitonal olarak enjekte edin. Alternatif olarak, kontrolde FITC işaretli RBC'ler kullanılabilir.Hayvanlardan bir mililitre arteriyel kan toplanır ve pellet, EDTA içeren PBS ile santrifüjleme yoluyla yıkanır, FITC çözeltisi içinde yeniden süspanse edilir ve hafif ajitasyonla karanlıkta iki saat boyunca inkübe edilir. Bu sürenin sonunda, süpernatant santrifüjle uzaklaştırılır ve kapsamlı bir şekilde yıkanır. Periferik dolaşımda ortalama %1 konsantrasyon sağlayacak şekilde bir kontrol fareye enjekte edilir ve in vivo deneylere geçilir.Merhaba, ben mija. Dalak görüntülemesini in vivo olarak gerçekleştirmek için, dalağı açığa çıkarmak amacıyla hayvana küçük bir cerrahi işlem uygulamamız gerekiyor; elbette bu tekniği, teşekkür etmek istediğim worker Heisler laboratuvarından Stephanie GR'dan öğrendim ve şimdi size nasıl ilerleyeceğinizi göstereceğim.Enfekte miyozun görüntülemesi, her iki suşta da parat %1 olduğunda, enfeksiyon sonrası üçüncü günde gerçekleştirilmiştir. Fareyi prosedür boyunca anestezi altında ve düzenlenmiş sıcaklıkta tutun. Gözleri nemlenmeden koruyun ve maddelerin intravenöz uygulamasını kolaylaştırmak için işleme başlamadan önce ayak tabanına dokunarak farenin tamamen anestezi altında olduğunu doğrulayın.Deney süresince, kanülü oluşturmak için fare kuyruk venine kanülasyon yapın. Bir tüpün bir ucuna küçük bir iğne, diğer ucuna ise aplikatörünü yerleştirin. Kanülü, hava kabarcıklarını gidererek fizyolojik salin ile doldurun ve solüsyonun kanül boyunca doğru şekilde aktığını kontrol edin.Kuyruğun lateral venine temiz bir şekilde kanülasyon yapılacaktır. Kuyruk tabanında hafif bir sıkıştırma yaparak venin görünürlüğünü artırın. Kanülün ucunu venin içerisine yerleştirin.Kan gelmesi, iğnenin doğru konumlandığını gösterecektir. Eğer konumlandırma doğru değilse, kanülasyon işlemini venin daha proksimal bir noktasında tekrarlayın, ardından kanülü kuyruğa yapıştırıcı ve bant kullanarak sabitleyin. Hayvanın sol dorsal tarafındaki deri ve kas dokusunda yapılacak küçük bir insizyon ile dalağın alt kısmını açığa çıkarın.Daha az solunum hareketinin gözlemlendiği bir yere dalak yerleştirin ve fare tüylerinden temiz tutmak ve nemli kalmasını sağlamak için açığa çıkan yüzeye PBS uygulayın. Görselleştirme sağlamak için dalağı bir örtü camı ile kapatın. Merhaba, benim adım Lorena.Gösterilen protokol, PULI parazitlerinin dalak üzerindeki hareketini görselleştirmemizi sağlayacaktır. Bu, GFP transgenik parazitler sayesinde mümkün olmuştur. Drexel Üniversitesi'nden James Burnes tarafından bağışlanmıştır.Floresan işaretli parazitlerin hareketlerinin görüntülenmesi, letal ve non-letal suşlar arasındaki davranış farklılıklarını belirlememizi sağlayacaktır. Canlı mikroskopi deneyleri, sıcaklık kontrollü bir inkübasyon sistemi ve 63 x gliserol objektifi ile donatılmış bir Leica çok fotonlu mikroskpta gerçekleştirilmiştir. Hayvanı, dalak kısmı objektife bakacak şekilde bir lam örtüsüyle birlikte mikroskop tablasına yerleştirin. Başlangıçta.Dalağın düşük büyütmelerde görüntülenmesi, organın mikrodolaşım yapısına genel bir bakış sağlayacaktır. Otofloresan dokuyu kullanarak dalağa odaklanıldığında, GFP parazitlerinin dalağın farklı bölgelerinden geçtiği gözlemlenir. Merhaba, ben Barselona Üniversitesi Bilim ve Teknoloji Merkezleri'nden Maria Albo; bu çalışmada dalağın intravital görüntülemesini gerçekleştireceğiz.Enfekte kırmızı kan hücrelerinin kan akışını ve hareketliliğini incelemek için, organ hareketini önlemek adına oldukça yararlı olan yüksek hızlı görüntülemeye imkan tanıyan rezonans tarayıcıyla donatılmış bir konfokal mikroskop kullanacağız. Bu, görüntüleme aralığının seçilmesine olanak tanıyan spektral bir mikroskoptur. Çok hızlı görüntüleme yapabilmek için, iki floresein işaretlemesi ve yansımayı eş zamanlı olarak elde edeceğiz.Dalak mikrovaskülatürünü belgelemek için RBC, refleksiyona, kontrasta ve Vidal boyalarına yardımcıyla görüntülemek üzere farklı bölgeler seçin. Şimdi, kırmızı pulpanın üç boyutlu ağ yapısındaki parazit hareketini takip etmek için Vidal mikroskopisi ve Image J yazılımı kullanarak, damar kan akışındaki parazit hareketliliğinin nasıl ölçüleceğini açıklayacağız. Yüksek hızlı tarama modunu kullanarak beş Z derinliğinde görüntüler elde edin.Tek bir floresan hücrenin takibini kolaylaştırmak için görüntü yığınlarını Z kodlu renkli videolara dönüştürün. Ayrıntılı bilgiler metinde verilmiştir; her videoda X, Y, Z ve T koordinatlarını kullanarak derinlikte zaman içinde farklı partiküller takip edilebilir. Yönelim, ortalama hız ve kalış süresi gibi mobilite parametreleri hesaplanabilir ve suş popülasyonları arasında karşılaştırmalı analiz yapılmasına olanak sağlamak için dağılım haritaları şeklinde temsil edilebilir. Dalaktaki vasküler akış, destekleyici tabloda belirtilen dekstrin gibi çeşitli floresan moleküllerin sistemik enjeksiyonu ile görüntülenebilir.Endojen eritrosit yansıma kontrastı kullanarak, damarları lazer tarama yönüyle yatay olarak konumlandırıp geliştirilmiş Hat ortalaması (Line average) ayarını kullanarak merkez hat kan akışını tarayın. Bu görüntülerde, hareketli hücrelerden kaynaklanan çizgiler kan akışını hesaplamak için kullanılacaktır; dalgalanmaları telafi etmek amacıyla farklı çaplardaki damarların ve kardiyak döngü boyunca görüntülerini alın. Dalak, sıtma araştırmalarında uzun süredir bir kara kutu olarak kabul edilmektedir ve burada, bu organdaki parazit enfeksiyonu ve kan akışı dinamikleri hakkında içgörü kazanmak için nicel bir intravital mikroskopi yaklaşımı geliştirdik; bu yaklaşım, enfekte kırmızı kan hücrelerinin dalağa in vivo yapışması gibi önemli biyolojik soruları ele almamıza olanak tanımaktadır.Teşekkür ederiz ve.

intravital-microscopy-spleen-quantitative-analysis-parasite-mobility

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Canlı bir Host Transgenik Leishmania Parazitlerinin in vivo Imaging

Intravital mikroskopi pial mikrosirkülasyon zamansal ve mekansal hemodinamik ve inflamatuar olayları takip etmek.

Kapalı Kranial Pencere kullanarak Fare Beyin Mikrosirkülasyon intravital Mikroskopi

Bu video, kemik iliği kaynaklı makrofajlardaki (BMM'ler) parazitlerin hücre içi büyümesini ölçmek için bir testi göstermektedir. Makrofaj hücreleri, sırasıyla Leishmania'nın motil ve non-motil invaziv evreleri, metasiklik promastigotlar ve amastigotlar ile enfekte olur. Parazitler makrofajları istila eder, parazitoforöz bir vakuol içinde içselleşir ve içinde çoğalır. Hücre içi parazit büyümesi, makrofaj ve parazit çekirdeklerinin floresan olarak boyanması üzerine bir mikroskop kullanılarak...

Makrofajlarda Parazitin Hücre İçi Büyümesini Ölçmek için Bir İn Vitro Test

Beyin kan damarlarının gelen yapışık inflamatuar lökositlerin izolasyonu için bir...

Den Beyin sekestre Lökositler İzolasyonu ve Analizi<em&gt; Plasmodium berghei</em&gt; ANKA-enfekte Fare

Bu makale, görüntü elde etme ve analiz için özel bir metodoloji ile birlikte intravital mikroskopi görüntüleme kullanılarak fare karaciğer damar sisteminin tek tek kan damarları içindeki kan akış hızının dinamik ölçümü ve miktarının belirlenmesi için ayrıntılı bir yöntem hakkında ayrıntılı bir yöntem hakkında rapor vermektedir.

Aşağıdaki Karaciğer intravital Mikroskopi Görüntüleme<em&gt; Leishmania</em&gt; Enfeksiyon: Karaciğer Hemodinami Üzerine Bir Değerlendirme

kırmızı kan hücrelerinin içinde sıtma paraziti girdiği, ve çoğaltır. Merozoit işgali ve parazitemya doğru değerlendirme sıtma enfeksiyonu seyrini değerlendirmede nedenle çok önemlidir. Burada sıtma bir fare modelinde bu parametrelerin ölçülmesi için tabanlı protokol sitometri akışı tarif eder.

Akış Cytometry tarafından Kemirgen Plasmodium parazitemi Vivo Değerlendirilmesi ve Merozoit Invasion

Farelerde mezenter damarlarının intravital mikroskopisinin bu basitleştirilmiş uygulaması, lökosit-endotel ve trombosit-lökosit etkileşimlerini gözlemlemek için farklı inflamasyon modellerinde kullanılabilir.

Farelerde mesenteriumda Damarlardaki intravital Mikroskopi Lökosit-endotelyal ve Trombosit-lökosit Etkileşimleri

Deneysel serebral sıtmanın bir fare modelini tarif ediyoruz ve manyetik rezonans görüntüleme kullanılarak inflamatuar ve mikrovasküler patolojinin in vivo olarak nasıl izlenebileceğini gösteriyoruz.

Manyetik Rezonans Görüntüleme Kullanarak Deneysel Serebral Sıtma Bir Modelinde Ödem Gelişimi ve Mikrovasküler Patolojinin İn Vivo Takibi

İnsan sıtma parazitlerine kemirgen sıtma parazitlerinin yaşam döngüsü ve biyolojisinin çarpıcı benzerlikleri nedeniyle, kemirgen sıtma modelleri sıtma araştırmaları için vazgeçilmez hale gelmiştir. Burada, vahşi tip ve transgenik kemirgen sıtma türlerinin fenotipeksi analizinde kullanılan en önemli tekniklerden bazılarını standardize ettik.

Kemirgen Sıtma paraziti Asexual ve cinsel kan aşamaları ve sivrisinek aşamaları phenotypic Analizi

Bütün patojenik LEISHMANIA türler bulunur ve omurgalı onların ana makrofajlar içinde çoğaltmak. Burada, fare kemik iliği türevi makrofajlar kültür ile hücre içi büyüme Kinetik kesin miktar tarafından takip LEISHMANIA, bulaştırmak için bir protokol mevcut. Ana bilgisayar-patojen etkileşim ve LEISHMANIA virülans etkileyen bireysel faktörler eğitim için yararlı bir yöntemdir.

Hızlı ve güvenilir yöntem LEISHMANIA parazit virülans değerlendirmek için hücre içi büyüme makrofajlar içinde miktar olduğunu

Öğrenin dalakta parazit hareketliliğini ve kan akışını GFP transgenik sıtma parazitleriyle kantitatif intravital mikroskopi kullanarak değerlendirme yöntemini. Bu teknik, canlı dokularda parazit dinamiklerini gerçek zamanlı analiz etmeyi sağlar.

Dalak intravital Mikroskopi: Parazit Mobilite ve Kan Akımının Kantitatif Analiz

Daha fazla video keşfet