Name: Polianhidrid Nanopartiküller Yüksek throughput Karbonhidrat sentezi ve işlevsel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 37 s
Description: Öğrenin, otomatik çözelti fazı sentezi ile polianhidrid nanopartikülleri fonksiyonelleştirme yöntemini. Bu yüksek verimli yaklaşım, antijen sunan hücreleri hedeflemek için karbonhidrat bazlı ajanlar geliştirmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, ABD Ordusu Tıbbi Araştırma ve Malzeme Komutanlığı teşekkür (Grant # W81XWH-10-1-0806) ve mali destek için Ulusal Sağlık Enstitüleri (Grant # U19 AI091031-01 ve Grant # 1R01GM090280) olacaktır. BN Kimya ve Biyoloji Mühendisliği Balloun Profesörlük kabul eder ve NLBP Disiplinlerarası Mühendislik Wilkinson Profesörlük kabul eder. Biz nanoparçacık fonksiyonlandırmalar deneyler ona yardım için Julia Vela teşekkür ederim.

1. Yüksek verim Karbonhidrat Sentez <ol><li> Önce dimannoside ve otomatik sentezi, uygun bir şekilde korunan şeker donör, genellikle trichloroacetimidate, ve alıcı, özellikle bir alkenil fluorous alkol için tezgah-üst sentezlenir. </li><li> Bir program dimannoside arasında otomatik sentezi için yazılmıştır. Temel otomatikleştirilmiş prosedürün bir şematik Şekil 2 &#39;de gösterilmiştir. Program, bu promotör eklenmesinden önce, verici ve alıcı bir karışımı, en azından 30 dakika süreyle karıştırıldı sağlanır. </li><li> Sentetik donör, alıcı ve trimethylsilyltrifluoromethanesulfonate çözeltileri diklorometan içinde yapılır. Toluen ve diklorometan glikozilasyon reaksiyonlar için, en sık kullanılmaktadır. </li><li> Ayrıca,% 80 metanol ve% 100 metanol içindeki geçici koruyucu gruplarının korumasının kaldırılması için reaktifler çözeltileri hazırlanır. </li><li> Programın başlamasından önce, emin relatOdadaki ive nem otomasyonu odacık içinde% 30 ya da daha düşüktür. Yüksek nem glikozilasyon reaksiyonlar için zararlıdır. </li><li> Program başladıktan sonra, robot kol sırayla reaksiyon şişeye donör ve alıcı çözümleri aktarır. Daha sonra karışım, 30 dakika boyunca karıştırıldı. </li><li> Robotik kol karışımı içine trimethylsilyltrifluoromethanesulfonate arasında 0,2-0,3 benzerleri aktarır Sonra, tipik olarak oda sıcaklığında, -20 gibi düşük sıcaklıklarda ° C de elde edilebilir. Reaksiyon karışımı 30 dakika boyunca karıştırıldı. </li><li> 30 dk sonra reaksiyon durduruldu ve küçük bir alikotu reaksiyon ilerlemesini izlemek için çıkarılır. Tamamlanmaz, reaksiyon devam edilebilir ve sonuçta gerekli süreyi modifiye edilebilir. </li><li> Reaksiyon tamamlandıktan sonra, reaksiyon karışımı saflaştırılması için C&#39;de 8 F 17-değiştirilmiş silika jel içeren fluorous katı faz ekstraksiyonu (FSPE) kartuşlar transfer edilir. </li><li> Sepetisırtlar birinci non-fluorous fraksiyonu kurtulmak için% 80 metanol-su karışımı (8 mL) ile yıkanır. </li><li> Sonra kartuşlar istenen fluorous-etiketli ürünü elde etmek için% 100 metanol ile yıkanır. Ek saflaştırma isteniyorsa, makinenin durduruldu ve reaksiyon ürünü (ler) ilave yoluyla saflaştırma için çıkarılabilir. </li><li> Arıtma döngüsü sonra, robot kol reaksiyon şişeye sodyum metoksid saçıyor. Reaksiyon 2 saat boyunca karıştırıldı. Tam edilmediğinde, reaksiyon yeniden daha uzun bir süre boyunca devam edilebilir ve sonuçta gerekli programlanmış bir süre modifiye edilebilir. </li><li> Reaksiyonun tamamlanmasından sonra, ürün FSPE ile saflaştırılır ve daha sonra kalan suyu uzaklaştırmak için ardından buharlaştırma ile susuz tolüen içinde çözünmesi tabi tutuldu. </li><li> İstenen zincir uzunluğu hedef molekül elde edilir kadar daha sonra çevrimi (adım 6-13 arası) tekrar edilir. </li><li> Otomasyonu elde edilen ürün th korumalı olduğuen fazla saflaştırılmış ve tamamen gibi nükleer manyetik rezonans (NMR) spektroskopisi gibi teknikler ile karakterize edilmektedir. Genellikle patlayıcı hidrojen gazı ve paladyum içerir, çünkü son hedef moleküle korumasının giderilmesinden tam (tüm kalan koruyucu grubun çıkartılması) daha sonra, bir kural olarak otomasyon platformu dışında tamamlanır. Nihai korunmasına son verme işlemi otomasyon platformu dışında tezgah üstü üzerinde gerçekleştirildi. Birinci aşama, bir karboksilik asit ile üretilen aldehit oksidasyonu ile takip fluorous etiketi çift bağın ozonlanmasından idi. Ürün kolon kromatografi ile saflaştırıldı. Son adım paladyum katalizli hidrojenasyon ile benzil eter gruplarının korumasının kaldırılması idi. Ürün, saf nihai ürün elde etmek için paladyum kurtulmak için selit yastığı içinden geçirilmiştir. </li></ol> 2. Yüksek verim Nanopartikül Yüzey fonksiyonlandırmalar <ol><li> Yüksek verim polimer sentezi ve nanoparçacık fabrikasyon aynı pr takip yapılırotocol ve robotik kadar Petersen ve ark 19 tarafından tarif ayarlanır. partikül imalatı için kullanılan kopolimer sistemleri sebasik asit (SA) ve 1,6-bis (para-karboksifenoksi) heksan (CPH), ve 1,8-bis (dayanmaktadır para-karboksifenoksi) -3,6-dioxaoctane (CPTEG) ve CPH. Kullanılmıştır robotik yerleştirme tertibatı şematik temsili Şekil 1b sunulmuştur. </li><li> Nanoparçacık fabrikasyon ardından, nanoparçacık kütüphane ile tüpler içeren tutucu lineer aktüatör sahneye tutturulur. </li><li> Polianhidrid parçacıklarının yüzeyine karbonhidrat tutturulması için, iki ardışık reaksiyon oluşan bir amin-karboksilik asit bağlama reaksiyonu 20 gerçekleştirilir. </li><li> Birinci reaksiyon için, ilk programlanabilir şırınga pompası şırınga 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) ve benzerleri 10 (denklem) (parçacığın yüzey üzerinde ortalama mol karboksilik asit konsantrasyonunun eşdeğer) ile doldurulmuştur-carbodiimide hidroklorür (EDC) ve 10 eq. bir sulu çözelti içinde etilendiaminin, ikinci programlanabilir şırınga pompası şırınganın 12 eq ile yüklenir iken. sulu çözelti içinde N-hidroksisüksinimid (NHS). </li><li> LabVIEW programı kullanarak, reaktif süspansiyonlar nanoparçacık kütüphane * yatırılır. </li><li> Sonra, her bir numune sonicated edilir (40 Hz 30 s) ve tüp tutucu robot platformu kopar. </li><li> Nanoparçacık süspansiyonlar 4 ° C&#39;de sabit dönüş ile 9 saat süreyle inkübe edilir ** </li><li> Reaksiyon süresi tamamlandıktan sonra, tüpler santrifüjlendi (5 dakika boyunca 12.000 x g) ve iki yıkama işlemleri uygulamaya robotik istasyonundan geri gönderilir. </li><li> Ikinci bir şırınga pompası şırınga soğuk su ile doldurulur ise yıkama için, bir şırınga boş ve ilk programlanabilir şırınga pompası yerleştirilmiş kalır. Her bir tüp içinde süpernatan boş bir şırınga pompası ve ikinci yataklarının soğuk su içine geri çekilir. </li><li> Nano HomojenizasyonAdım 2,6 tarif edildiği gibi parçacık süspansiyonu yapılır. Tüpler daha sonra santrifüj edilir (5 dakika boyunca 12.000 x g) ve 2,9 adım tarif edildiği gibi ikinci bir yıkama adımı gerçekleştirilir. </li><li> İkinci reaksiyon için, iki biriktirme adımları kullanılır. Birinci yerleştirme adımda, 12 eq. EDC bir pompa ve 12 eq ile yüklenir. NHS ikinci pompa ile yüklenir. </li><li> İkinci yerleştirme basamağı 10 eq içerir. Birinci ve ikinci pompaları (yani, galaktoz, laktoz ya da di-mannoz) ve *** 10 eq ile üçüncü bir pompa, bir spesifik bir sakarit. ve glikolik asit (kontrol olarak kullanılmıştır ****). </li><li> 4 ° C&#39;de adım 2.6 &#39;da açıklanan ve sürekli rotasyon ile 9 saat inkübe olarak Nanopartikül süspansiyonlar homojenize edilir </li><li> Reaksiyon süresi tamamlandıktan sonra adım 2.8, 2.9 ve 2.10 &#39;da anlatıldığı gibi, bir yıkama adımı gerçekleştirilir. </li><li> Fonksiyonlandırılmış nanoparçacık kütüphanesi sonra, en azından 2 saat boyunca kurumaya bir vakum hücresinin yerleştirilir. </li><li> Fonksiyonlandırılmış nanopartiküller sonra karakter olanX-elektron Spektroskopisi ve sırasıyla yüzey bileşimi ve sakarit konsantrasyonunu belirlemek için yüksek bir verim fenol-sülfürik asit deneyine göre ized. Elektron mikroskobu ve dinamik ışık saçılımı Tarama tane boyutu, boyut dağılımı ve yüzey yükü belirlemek için kullanılır. </li></ol> Notlar: * Biriktirme hacmi her tüpte bulunan nanoparçacıkların kütlesi ile değişir. Birinci ve ikinci reaksiyonlar için ** Reaksiyon süresi, nihai konsantrasyonu sakarit ayarlamak için değiştirilebilir. *** Her sakkarit istenen gruba bağlı olarak test tüpleri içine yatırılır. Koruması giderilmiş sakaritlerin zaten nanoparçacık yüzeyine daha takılabilir kovalent olarak bağlanmış bu molekülün, beri **** karbonhidrat tutturulması için bu çalışmada kullanılan belli bir tepkime için, glikolik asit, bir bağlayıcının kontrol olarak kullanılmıştır. 3. Temsilcisi Sonuçlar FulŞekil 2 de gösterildiği ly korunan dimannoside otomasyon platformu kullanılarak sentezlenmiştir. Sentezli bir bileşim çözücü olarak kullanarak, bir CDCl3 VXR 400 MHz spektrometre 1 H NMR ile karakterize edilmiştir. NMR spektrum Şekil 3 &#39;de gösterilmiştir. Polianhidrid yüksek verimlilik nanoparçacık imalat ve işlevsel kullanmak burada açıklanan nanoparçacıklar, dimannose, laktoz ve galaktoz eki başarıyla 10, 11 yapılmıştır. Bu set up kullanarak, optimum reaksiyon koşulları (yani, reaksiyon sıcaklığı ve zaman) istenen nanoparçacık fonksiyonlandırmalar ve morfolojisi ulaşmak için belirlenmiştir. Reaksiyon 4 azından gerçekleştirildiği zaman ° C yerine, oda sıcaklığı arasında, nanoparçacık yığılmasında bir azalma ile SEM ile gözlenmiştir (veri gösterilmemiştir). Di-mannoz veya biriyle CPH nanopartiküller: Tablo 1 fonksiyonlandırılmış 50:50 CPTEG karakterizasyonu temsilcisi sonuçlarını gösterir4 de sentezlenen laktoz, ° C. Veri fonksiyonlandırmalar nedeniyle ortalama nanoparçacık çapı küçük bir artış gösterir. Olmayan fonksiyonlandırılmış nanopartiküller yaklaşık bir negatif zeta potansiyeline sahipti. -20 MV, fonksiyonlandırılmış parçacıklar nanoparçacık yüzeyinin başarılı fonksiyonlandırmalar gösteren, pozitif zeta potansiyel değeri gösterdi. Laktoz ve di-mannoz hem de nötr şeker olmakla birlikte, etilen gelen serbest amin gruplarının sakaritlerin bağlamak için kullanılan bağlayıcı pozitif zeta potansiyelinin sorumlu olabilir diamin. Reaksiyon zamanı nanopartiküllerin son morfolojisi ve elde şeker bağlanma derecesi hem de etkileyebilecek bir diğer değişkendir. Reaksiyon süresi ayarlayarak, nanopartiküller yüzeyine iliştirilmiş nihai şekeri konsantrasyonları Şekil 4A&#39;da gösterildiği gibi, kontrol edilebilir. Beklenildiği gibi, 50:50 CPTEG yüzeyinde dimannose konsantrasyonu: CPH nanoparçacıklar artmıştırReaksiyon süresi ve toplam 18 saat sonra maksimum ulaşmıştır. 24 saat toplam reaksiyon zamanı ile fonksiyonelleştirilmiş Nanopartiküller fare kemik iliği kökenli dendritik hücreler (DC) üzerine CLRs hedef yeteneklerini değerlendirmek için kullanıldı. Flow sitometri iki CL reseptörleri (yani, Cire (CD209, DC-SIGN) ve mannoz reseptörü (CD206)) non-fonksiyonlandırılmış ile uyarılması sonrasında ve laktoz ve di-mannoz fonksiyonlandırılmış nanopartiküller (Şekil 4B) ifadesi değerlendirmek için kullanıldı. Hücreler laktoz ve di-mannoz fonksiyonlandırılmış nanopartiküller her ikisi ile uyarılan edildiğinde etkili hedefleme bir göstergesidir Her iki reseptör daha yüksek bir ifadesi, elde edildi. Bununla birlikte, di-mannoz-fonksiyonlu parçacıklar incelenmiştir reseptörleri için, bu bir ligant spesifite gösteren ifade daha yüksek bir seviyeye gösterdi. <table border="1"><tbody><tr><td> Nanopartikül tipi </td><td> Ortalama Partikül Çapı (nm) </td><td> Aveöfke Parçacık ζ-Potansiyeli (mV) </td></tr><tr><td> Sigara fonksiyonlandırılmış </td><td> 162 ± 43 </td><td> -20 ± 0.6 </td></tr><tr><td> Laktoz </td><td> 235 ± 34 </td><td> 26 ± 2.4 </td></tr><tr><td> Di-mannoz </td><td> 243 ± 32 </td><td> 30 ± 4.2 </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Nanopartikül karakterizasyonu. Sigara fonksiyonlandırılmış ve fonksiyonlandırılmış yarı elastik ışık saçılması ve zeta potansiyel ölçümleri ile karakterize edildi. Parçacık boyutu verileri ortalama değer ± üç bağımsız deneyde toplanan dinamik ışık saçılımı verilerinin standart sapma (SD) temsil eder. Zeta potansiyel veriler ortalama değer ± SD üç bağımsız okuma temsil eder. CPH nanoparçacık yüzey: zeta potansiyelin işareti olarak değiştirin ki şeker 50:50 CPTEG verimli konjuge göstermektedir. <img alt="Şekil 1" src<html> = &quot;/ Files/ftp_upload/3967/3967fig1.jpg&quot; /&gt; Şekil 1. Karbonhidrat polianhidrid nanopartiküllerin fonksiyonlandırmalar ve açıklanan yüksek verimlilik yaklaşımı ile tasarlanmış olabilir fonksiyonlandırılmış nanoparçacık kütüphanelerin bir örnek ile izlenen yaklaşımın (A) grafiksel gösterimi. (B) otomatik yerleştirme tertibatı şematik gösterimi (i) Üç KD 1000 pompaları oluşan parçacık fonksiyonlandırmalar için kullanılan, (ii) bir robot aşamada iki aktüatörler (Zaber) tarafından entegre: x yönünde hareket için bir ve diğer iki komşu raf (tüpler ve küvetler için uygun) üç aktüatörler, her yön için bir (x, y ve z) oluşan ile (iii) bir ikinci aşama robotik; y yönde hareket için. Pompalar ve beş aktüatörler toplam seri olarak bağlanmış. Aktüatörler ve pompalar LabVIEW yazılımı kullanarak bir bilgisayar tarafından işletilmektedir. Bu şema ölçek değildir.arge.jpg &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; büyük rakamı görmek için buraya tıklayın. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3967/3967fig2.jpg" /> Şekil 2. Otomatik grafiksel gösterimi örnek olarak mannoz kullanarak karbonhidrat sentezi iteratif. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3967/3967fig3.jpg" /> Şekil 3. Korunan dimannoside 1 H-NMR. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3967/3967fig4.jpg" /> Şekil 4. (A) Sakkarit ve nanoparçacık yüzey konsantrasyonu reaksiyon süresi etkisi. Gösterilen veriler, 50:50 CPTEG: CPH nanopartiküller farklı reaksiyon bazen dimannose ile fonksiyonelleştirilmiş edildi ve reaksiyon 4 gerçekleştirildi ° C. İki bağımsız fonksiyonlandırmalar deneylerin ortalama ve standart hata gösterilir. (B) Laktoz ve di-mannoz fonksiyonlandırılmış nanopartiküllerelde ifadesi ile karşılaştırıldığında CPH nanopartiküller: Kemik fonksiyonlandırılmış 50:50 CPTEG ile uyarıldıktan sonra bu iki belirteçlerin gelişmiş ifadesi gösterdiği gibi iliği kökenli dendritik hücreler üzerinde etkili hedef DC-SIGN (Cire, CD209) ve mannoz reseptörü (CD206) non-fonksiyonlu partikülleri ile.

<ol><li>Zepp, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+vacine+design-lessons+from+nature%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Principles of vacine design-lessons from nature.</a> Vaccine. 28, C14-C24 (2010).</li>
<li>Ulery, B. D., Phanse, Y., Sinha, A., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B., Bellaire, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer+chemistry+influences+monocytic+uptake+of+polyanhydride+nanospheres%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">Polymer chemistry influences monocytic uptake of polyanhydride nanospheres.</a> Pharm. Res. 26, 683-690 (2009).</li>
<li>Torres, M. P., Wilson-Welder, J. H., Lopac, S. K., Phanse, Y., Carrillo-Conde, B., Ramer-Tait, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyanhydride+microparticles+enhance+dendritic+cell+antigen+presentation+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Polyanhydride microparticles enhance dendritic cell antigen presentation and activation.</a> Acta Biomater. 7, 2857-2864 (2011).</li>
<li>Torres, M. P., Determan, A. S., Anderson, G. L., Mallapragada, S. K., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphiphilic+polyanhydrides+for+protein+stabilization+and+release%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Amphiphilic polyanhydrides for protein stabilization and release.</a> Biomaterials. 28, 108-116 (2007).</li>
<li>Petersen, L. K., Ramer-Tait, A. E., Broderick, S. R., Kong, C. S., Ulery, B. D., Rajan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+innate+immune+responses+in+a+pathogen-mimicking+manner+by+amphiphilic+polyanhydride+nanoparticle+adjuvants%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Activation of innate immune responses in a pathogen-mimicking manner by amphiphilic polyanhydride nanoparticle adjuvants.</a> Biomaterials. 32, 6815-6822 (2011).</li>
<li>Petersen, L. K., Xue, L., Wannemuehler, M. J., Rajan, K., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+simultaneous+effect+of+polymer+chemistry+and+device+geometry+on+the+in+vitro+activation+of+murine+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The simultaneous effect of polymer chemistry and device geometry on the in vitro activation of murine dendritic cells.</a> Biomaterials. 30, 5131-5142 (2009).</li>
<li>Lopac, S. K., Torres, M. P., Wilson-Welder, J. H., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+polymer+chemistry+and+fabrication+method+on+protein+release+and+stability+from+polyanhydride+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mater.+Res.+B%22%5BJournal%5D)">Effect of polymer chemistry and fabrication method on protein release and stability from polyanhydride microspheres.</a> J. Biomed. Mater. Res. B. 91, 938-947 (2009).</li>
<li>Determan, A. S., Wilson, J. H., Kipper, M. J., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+stability+in+the+presence+of+polymer+degradation+products%3A+Consequences+for+controlled+release+formulations%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Protein stability in the presence of polymer degradation products: Consequences for controlled release formulations.</a> Biomaterials. 27, 3312-3320 (2006).</li>
<li>Determan, A. S., Lin, V. S. Y., Nilsen-Hamilton, M., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulation%2C+stabilization%2C+and+release+of+BSA-FITC+from+polyanhydride+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Encapsulation, stabilization, and release of BSA-FITC from polyanhydride microspheres.</a> J. Controlled Release. 100, 97-109 (2004).</li>
<li>Chavez-Santoscoy, A., Roychoudhury, R., Ramer-Tait, A. E., Pohl, N. L. B., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tailoring+the+immune+response+of+alveolar+macrophages+by+targeting+different+C-type+lectin+receptors+using+%22pathogen-like%22+amphiphilic+polyanhydride+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Tailoring the immune response of alveolar macrophages by targeting different C-type lectin receptors using "pathogen-like" amphiphilic polyanhydride nanoparticles.</a> Biomaterials. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Carrillo-Conde, B., Song, E. -H., Chavez-Santoscoy, A., Phanse, Y., Ramer-Tait, A., Pohl, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mannose-functionalized+%22pathogen-like%22+polyanhydride+nanoparticles+target+C-type+lectin+receptors+on+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Mannose-functionalized "pathogen-like" polyanhydride nanoparticles target C-type lectin receptors on dendritic cells.</a> Mol. Pharmaceutics. 8, 1877-1886 (2011).</li>
<li>Carrillo-Conde, B., Schiltz, E., Torres, M. P., Yu, J., Phillips, G., Minion, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphipilic+polyanhydrides+for+stabilization+of+Yersinia+pestis+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Biomater%22%5BJournal%5D)">Amphipilic polyanhydrides for stabilization of Yersinia pestis antigens.</a> Acta. Biomater. 6, 3110-3119 (2010).</li>
<li>Reddy, S. T., Swartz, M. A., Hubbell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+dendritic+cells+with+biomaterials%3A+developing+the+next+generation+of+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">Targeting dendritic cells with biomaterials: developing the next generation of vaccines.</a> Trends Immunol. 27, 573-580 (2006).</li>
<li>Higashi, N., Fujioka, K., Denda-Nagai, K., Hashimoto, S., Nagai, S., Sato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+macrophage+C-type+lectin+specific+for+galactose%2FN-acetylgalactosamine+is+an+endocytic+receptor+expressed+on+monocyte-derived+immature+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">The macrophage C-type lectin specific for galactose/N-acetylgalactosamine is an endocytic receptor expressed on monocyte-derived immature dendritic cells.</a> J. Biol. Chem. 277, 20686(2002).</li>
<li>Geijtenbeek, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signalling+through+C-type+lectin+receptors%3A+shaping+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Signalling through C-type lectin receptors: shaping immune responses.</a> Nat. Rev. Immunol. 9, 465-479 (2009).</li>
<li>Seeberger, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+oligosaccharide+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Automated oligosaccharide synthesis.</a> Chem. Soc. Rev. 37, 19-28 (2008).</li>
<li>Seeberger, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+Carbohydrate+Synthesis+as+Platform+to+Address+Fundamental+Aspects+of+Glycobiology-Current+Status+and+Future+Challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Carb.+Res%22%5BJournal%5D)">Automated Carbohydrate Synthesis as Platform to Address Fundamental Aspects of Glycobiology-Current Status and Future Challenges.</a> Carb. Res. 343, 1889-1896 (2008).</li>
<li>Jaipuri, F. A., Pohl, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+solution-phase+automated+iterative+synthesis%3A+fluorous-tag+assisted+solution-phase+synthesis+of+linear+and+branched+mannose+oligomers%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Biomol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Toward solution-phase automated iterative synthesis: fluorous-tag assisted solution-phase synthesis of linear and branched mannose oligomers.</a> Org. Biomol. Chem. 6, 2686-2691 (2008).</li>
<li>Petersen, L. K., Chavez-Santoscoy, A., Narasimhan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combinatorial+synthesis+of+and+high-throughput+protein+release+from+polymer+film+and+nanoparticle+libraries%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Combinatorial synthesis of and high-throughput protein release from polymer film and nanoparticle libraries.</a> J. Vis. Exp. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Song, E. -H., Osanya, A. O., Petersen, C. A., Pohl, N. L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+multivalent+tuberculosis+and+Leishmania-associated+capping+carbohydrates+reveals+structure-dependent+responses+allowing+immune+evasion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Synthesis of multivalent tuberculosis and Leishmania-associated capping carbohydrates reveals structure-dependent responses allowing immune evasion.</a> J. Am. Chem. Soc. 132, 11428-11430 (2010).</li>
<li>Hakamori, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aberrant+glycosylation+in+tumor+and+tumor+associated+carbohydrate+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Aberrant glycosylation in tumor and tumor associated carbohydrate antigens.</a> Adv. Cancer Res. 59, 257-331 (1989).</li>
<li>Atherton, T., Sheppard, R. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAtherton%2C+T+%22Solid-phase+peptide+synthesis%3A+a+practical+approach%22">Solid-phase peptide synthesis: a practical approach</a>. , Oxford Univ Press. Oxford, UK. (1999).</li>
<li>Caruthers, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+synthesis+machines%3A+DNA+chemistry+and+the+uses%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Gene synthesis machines: DNA chemistry and the uses.</a> Science. 230, 281-285 (1985).</li>
<li>Plante, O. J., Palmacci, E. R., Seeberger, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+solid-+phase+synthesis+of+oligosaccharides%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Automated solid- phase synthesis of oligosaccharides.</a> Science. 291, 1523-1527 (2001).</li>
<li>Ko, K. -S., Park, G., Yu, Y., Pohl, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protecting+group-based+colorimetric+monitoring+of+fluorous-phase+and+solid-phase+synthesis+of+oligoglucosamines%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Lett%22%5BJournal%5D)">Protecting group-based colorimetric monitoring of fluorous-phase and solid-phase synthesis of oligoglucosamines.</a> Org. Lett. 10, 5381-5384 (2008).</li>
<li>Pohl, N. L. Automated solution-phase oligosaccharide synthesis and carbohydrate microarrays: development of fluorous-based tools for glycomics. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPohl%2C+NL+%22Chemical+Glycobiology%22">Chemical Glycobiology</a>. Chen, X. H. R., Wang, G. P. , American Chemical Society. Washington, DC. 272-287 (2008).</li>
</ol>

NLBP kurucularından ve karbonhidrat şirket LuCella Biosciences, Inc özkaynak tutar

Bağışıklık hücreleri için doğrudan nanoparçacık etkileşimler maddeleri hedeflemek olarak karbonhidrat etkinliği, daha önce 10, 11 gösterilmiştir. Laboratuvarlarımızda Önceki araştırma ve böylece daha fazla T hücre aktivasyonunun 10, 11 için önemli olabilir bağışıklık hücreleri aktivasyonu arttırılması, polianhidrid nanopartiküller bağlı belirli şekerler antijen sunan hücreler (APC) üzerinde farklı CLRs hedeflemek için mümkün olduğunu göstermiştir. Ancak, çeşitli parametreleri gibi polianhidrid-kimy...

<table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Motorlu XYZ Aşama: 3x T-LSM050A, eksen başına 50 mm seyahat </td><td> Zaber Teknolojileri </td><td> T-XYZ-LSM050A-KT04 </td></tr><tr><td> KD-1000 Tek Şırınga Pompası </td><td> New Era Pompa Sistemleri </td><td> KD-1000 </td></tr><tr><td> Pyrex * Vista * Rimless Yeniden Cam Kültür Tüpler </td><td> Corning </td><td> 07-250-125 </td></tr><tr><td> ASW 1000 </td><td> Chemspeed Teknolojileri </td><td></td></tr><tr><td> LabVIEW </td><td> National Instruments </td><td> 776671-35 </td></tr><tr><td> SGE Gaz Geçirmez Şırınga, Luer Loc </td><td> Sigma Aldrich </td><td> 509507 </td></tr><tr><td> XL-2000 Sonicator </td><td> Qsonica </td><td> Q55 </td></tr><tr><td> Mini tüp rotator </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-450-127 </td></tr></tbody></table>

polianhidrid nanopartiküller yüksek throughput karbonhidrat sentezi ve işlevsel

High-throughput Synthesis of Carbohydrates and Functionalization of Polyanhydride Nanoparticles

Bu malzeme tasarım, nanoteknoloji, kimya ve immünoloji gibi alanlarda ilgili Transdisipliner yaklaşımlar rasyonel etkili aşılar taşıyıcıları tasarlamak için kullanılmıştır gerekir. Nanopartikül-tabanlı platformlar aşı immünojenitesi 1 artırabilirsiniz aşı antijenleri sebat uzatabilir. Çeşitli biyo-bozunabilir polimerler aşı dağıtım araçları 1 olarak ele alınmıştır, özellikle de, polianhidrid partikülleri stabil protein antijenleri arasında sürekli bir şekilde tahliye edilmesini sağlayacak ve antijen sunan hücreler aktif hale getirmek ve bağışıklık yanıtı 2-12 modüle etmek için yeteneğini göstermişlerdir. Bu aşı taşıyıcıların moleküler tasarım polimerin özelliklerinin rasyonel seçimi gibi uygun bir hedef ajanların eklenmesi entegre gerekiyor. Ligandlar ve fonksiyonlandırılmış parçacıklar hedefliyorsunuz Yüksek throughput otomatik imalat geniş bir r çalışma yeteneğini artıracak güçlü bir araçtırözelliklerinin ange ve tekrarlanabilir bir aşı uygulama araçları tasarımına yol açacaktır. Bağışıklık hücreleri belirli reseptörleri tarafından kabul olma yeteneğine sahip ligandların hedefleme Ayrıca 10,11,13 C-tipi lektin reseptörleri (CLRs) üzerine karbonhidrat mevcut tanıması örüntü tanıma reseptörleri (PRR) olan modüle ve kişiye bağışıklık yanıtlarını gösterilmiştir patojenlerin yüzey. CLRs ile bağışıklık hücreleri antijene uyarılması ve daha da T hücresi aktivasyonu için 14,15 sonraki sunum geliştirilmiş interne sağlar. Bu nedenle, karbonhidrat molekülleri immün yanıtın çalışmada önemli bir rol oynar, ancak bu biyomoleküllerin kullanımı sıklıkla yapısal olarak iyi tanımlanmış ve saf karbonhidrat kullanılabilirlik eksikliğinden muzdarip. Çözüm fazlı reaksiyonlar iteratif dayalı bir otomasyon platformu anlamlı derecede düşük b kullanarak bu zorlu sentetik moleküllerin hızlı ve kontrollü sentezi etkinleştirebilirsinizGeleneksel bir katı-faz yöntemleri 16,17 &#39;den blok miktarlarda uilding. Bu yazıda böyle bir ara arıtma için fluorous katı-faz ekstraksiyon ile mannoz tabanlı ligandları olarak oligosakkarid otomatikleştirilmiş bir çözüm-faz sentezi için bir protokol rapor. Karbonhidrat bazlı hedeflemeyi ajan yapmak için otomatik yöntemler geliştirilmesi sonra, daha önce açıklandığı gibi 10 LabVIEW tarafından işletilen bir otomatik robotlu kurulum istihdam polianhidrid Nano partikülleri yüzeyinde bağlılığını yöntemleri açıklanmaktadır. Karbonhidrat ile yüzeyi fonksiyonlandırmalar CLRs 10,11 hedefleme ve ortaya çıkarmak bir çoklu-parametrik sistemi ile ilişkili karmaşıklıklara büyük bir değer (Şekil 1a) olacak kadar imalat yönteminin verim artan etkinlik göstermiştir.

Bu makale, yüksek bir verim yöntemi antijen sunan hücreler üzerinde belirli reseptörlerine yönelik olarak kullanım için polianhidrid Nanopartiküllerin yüzeyine oligosaccharidler ve ekin sentezi için sunulmuştur.

Polianhidrid Nanopartiküller Yüksek throughput Karbonhidrat sentezi ve işlevsel

Materyal tasarımı, nanoteknoloji, kimya ve immünoloji gibi alanları kapsayan disiplinlerarası yaklaşımlar, ... rasyonel bir şekilde tasarlamak için kullanılmalıdır.

Bu video makalesinde, oligosakkaritlerin otomatik çözelti fazı sentezi ve poli anhy nanopartiküllerinin fonksiyonelleştirilmesi için yeni bir hidro put protokolü açıklıyoruz. Bu karbonhidrat tabanlı hedefleme ajanları ile ilk olarak, katı faz sentezleyiciler yerine çözelti fazı sentezi kullanan otomatik bir sistem kullanılarak karbonhidrat molekülleri sentezlenir. Ardından, oligosakkarit ara ürünleri florist, katı faz ekstraksiyonu veya FSPE ile saflaştırılır.Üretilen karbonhidrat molekülleri NMR ile karakterize edilir ve ardından karbo IDE konjugasyonu ile polianhidrit nanopartiküllere bağlanır. Son olarak, karbonhidrat ile fonksiyonelleştirilmiş nanopartiküller, X-ışını fotoelektron spektroskopisi ve bir hidro put fenil sülfürik asit analizi ile karakterize edilir. Nihayetinde, burada açıklanan hidro put metodolojisi kullanılarak, nanopartikül morfolojisini ve partikül yüzeyindeki karbonhidrat yoğunluğunu optimize edecek reaksiyon koşulları elde edilmiştir.Bu yöntemin, katı faz oligosakkarit sentezi gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, yapı taşlarının çok daha düşük miktarlarda kullanılmasıdır. Bu yöntemde, genellikle 10 ila 20 eşdeğer yerine iki ila üç eşdeğer kullanırız. Bu yönteme dair fikri ilk kez, karşıdentritik hücrelerdeki reseptörleri hedeflemek için karbonhidratlar kullanarak polihidro nanopartiküllerin fonksiyonelleştirilmesi ile yüzey etkilerinin etkinliğini kanıtladığımızda geliştirdik. Daha sonra, bu yeni taşıyıcıların üretimi ve uygulamasında yer alan çok sayıda parametreyi taramamıza olanak tanıyacak yüksek kapasiteli bir sistem tasarlamak istedik.Bu yöntemin görsel gösterimi kritik öneme sahiptir çünkü oligosakkaritlerin yüksek verimli sentezi ve bunların polimer parçacıklara bağlanması için otomatik platformların geliştirilmesi, mevcut dokümantasyonun az olduğu yeni bir araştırma alanıdır. Diano asidin otomatik sentezinden önce; tipik olarak trikloroasetamid olan uygun şekilde korunan bir şeker donörü ve temel olarak Alcon, florlu alkol olan bir akseptör tezgah üstünde sentezlenir ve klorometan içinde hazırlanır; ayrıca klorometan, %80 metanol ve %100 metanol içinde trimetil silo, triflorometan sülfonat da hazırlayın. Otomasyon odasındaki bağıl nemin %30 veya daha düşük olduğundan emin olun.Yüksek nem, glikozilasyon reaksiyonları için zararlıdır. Aşağıdaki adımlar bir otomasyon platformu kullanılarak gerçekleştirilir. İlk glikozilasyon, donör ve florist alkolü ile gerçekleştirilir.İşlem tamamlandığında, elde edilen florist tag şeker molekülü FSPE ile saflaştırılır. Ardından, geçici koruyucu grup sodyum, metoksit ve metanol kullanılarak uzaklaştırılır ve ürün tekrar FSPE ile saflaştırılır. Bunun ardından, florist tag şeker bir akseptör olarak kullanılır ve disakkaridi elde etmek için aynı donör ile kenetlenir; başlangıca geçmek için disakkarit FSPE ile saflaştırılır.Donör akseptör promotörü, %80 metanol su, %100 metanol ve sodyum metoksit dahil olmak üzere reaktifleri robotik platforma yerleştirin ve programı başlatın. Robotik kol, önce donörü ardından akseptörü flakonlardan çekecek ve bunları bir reaksiyon flakonuna aktaracaktır. Ardından, donör ve akseptör karışımı 30 dakika boyunca karıştırılır.30 dakika geçtikten sonra, robotik kol katalitik trimetil silil triflorometansülfonatı karışımın içine aktarır. Çözelti daha sonra 30 dakika daha karıştırılır. Karıştırma işlemi tamamlandığında program duraklar.Reaksiyonun tamamlanıp tamamlanmadığını incelemek için ince tabaka kromatografisi ile kontrol etmek üzere 10 µL'lik bir alikot alın. Reaksiyon tamamlanmışsa, akseptör molekül görülmeyecektir. Reaksiyon tamamlanmamışsa, TLC plakasındaki akseptör hâlâ görünür durumdadır.Eğer durum böyleyse, programı durdurun, glikozilasyon zamanlamasını yaklaşık 30 dakikaya sıfırlayın ve fazla miktarda promotör trimetil silo, tri fluoro, metan sülfonat ekleyin. Reaksiyon tamamlandığında bir sonraki adımla devam edin. Reaksiyon tamamlandıktan sonra robot, reaksiyon karışımını saflaştırma için C dokuz F 17 modifiyeli silika jel içeren FSPE kartuşlarına aktarır.Ardından, kartuşlar sekiz mililitre %80 metanol ve ardından sekiz mililitre %100 metanol ile yıkanır. Floristleştirilmemiş fraksiyonu elemek için, istenen floristleştirilmiş ürün elde edilene kadar akış vials içerisine toplanır. Ek saflaştırma gerekirse, robotu durdurun ve uygun reaksiyon ürünlerini çıkarın.Yapıya bağlı olarak, donörler son derece reaktif olmayabilir ve yeterli promotör eklendikten sonra bile bazı florist akseptör moleküller kalabilir. Bu durumda, FSPE saflaştırma için yeterince verimli olmayacaktır ve saflaştırmadan sonra silika jel kolon kromatografisi ile ek saflaştırma işlemi gerçekleştirilebilir; robotik kol reaksiyon tüpüne sodyum metoksit dağıtır. Reaksiyon daha sonra robotik platformda iki saat boyunca karıştırılır; TLC ile belirlendiğinde reaksiyon tamamlanmamışsa, inkübasyon süresini yaklaşık bir saat daha uzatın.Reaksiyon tamamlandıktan sonra, ürün daha önce olduğu gibi FSPE ile saflaştırılır. Ardından, reaksiyon ürünü robottan çıkarılır ve laboratuvar tezgahında susuz toluende çözündürülür, ardından kalıntı suyu gidermek için evaporasyona tabi tutulur. Numune kuruduktan sonra, FSPE ile glikozilasyon saflaştırmasını da içeren aynı döngü için tekrar robota yerleştirilir.Hedef molekül için istenen zincir uzunluğu elde edilene kadar, geçici koruyucu grubun derin korumasının ardından glikozilasyon işlemi tekrarlanır; otomasyondan elde edilen korunmuş ürünün korumasını kaldırmak için şişeyi robottan çıkarın. Prosedürün son adımlarında patlayıcı hidrojen gazı kullanılır ve bu adımlar otomasyon platformu dışında gerçekleştirilmelidir. Tezgah üzerinde, florist etiketindeki çift bağın ozonolizi gerçekleşir ve bunu, üretilen aldehitten karboksilik asite oksidasyon izler.Elde edilen ürünü, laboratuvar tezgahı üzerinde diklorometan içinde %30 metanol karışımı kullanarak silika jel kolon kromatografisi ile saflaştırın. Son olarak, benzo eter gruplarını paladyum katalizli hidrojenasyonla korumasız hale getirmek için, paladyumu uzaklaştırmak ve saf nihai ürünü elde etmek amacıyla ürünü bir satelit pedden geçirin. Ürünü nükleer manyetik rezonans veya NMR spektroskopisi kullanarak tamamen karakterize edin.Yüksek kapasiteli polimer sentezi ve nanoparçacık üretimi, Peterson ve ark. tarafından açıklanan protokol takip edilerek gerçekleştirilir. Ekli belgede referans verildiği üzere, parçacık fonksiyonelleştirme için kullanılan otomatik biriktirme düzeneği; üç adet ne 1000 pompa, biri X yönündeki hareket için diğeri Y yönündeki hareket için olmak üzere iki aktüatörle entegre edilmiş bir robotik platform ve pompaların her bir yönü için birer adet olmak üzere toplam üç aktüatör içeren iki bitişik rafı olan ikinci bir robotik platformdan oluşmaktadır. Toplam beş aktüatör seri olarak bağlanmıştır. Aktüatörler ve pompalar, LabVIEW yazılımı kullanan bir bilgisayar tarafından çalıştırılır.Parçacık üretimi için kullanılan kopolimer sistemleri, SEBA asidi veya SA ile altı bis, paraik karboksiy, oksil hekan veya CPH ve on sekiz BIS para karboksiy fenoksi üç altı dioksan veya CP Teeg'e dayanmaktadır. Nanoparçacık üretimi sonrası, polianhidrit parçacıkların yüzeyine karbonhidratların bağlanması için nanoparçacık kütüphanesini içeren 1,7 mililitrelik santrifüj tüplerinin bulunduğu bir raf, lineer aktüatör platformuna yerleştirilir ve iki ardışık reaksiyondan oluşan bir ortalama karboksilik asit kenetlenme reaksiyonu gerçekleştirilir; ilk reaksiyon için, programlanabilir bir şırınga pompasındaki şırınga, sırasıyla nanoparçacık başına iki miligram ve nanoparçacık başına 0,6 miligram konsantrasyonundaki EDC ve etilen diaminden oluşan sulu bir çözelti ile doldurulur.Programlanabilir bir şırınga pompasındaki ikinci bir şırıngayı, nanoparçacık örneği başına toplam 12 eşdeğer olacak şekilde, 2,5 mg/mg parçacık oranında NHSA sulu çözeltisi ile doldurun. Ardından, LabVIEW programını kullanarak robotun reaktif süspansiyonlarını nanoparçacık kütüphanesine yerleştirmesini sağlayın. Robot aktüatörleri, çözeltilerin, EDC ve NHS'nin dağıtımı için tüp tutucuyu platformdaki doğru konuma taşıyacaktır.Polianhidrit nanoparçacıkların yüzeyindeki karboksilik asit gruplarını aktive edin ve ortalama bir kenetlenmeye izin verin. Ardından, her tüpün içine bir sonikasyon probu daldırın ve her örneği 40 hertz frekansta 30 saniye boyunca sonikasyon işlemine tabi tutun. Bir sonraki örneğe geçmeden önce probu asetonla temizleyin.Tüm numuneler doyurulduğunda, tüp tutucu robotik platformdan ayrılır. Nanoparçacık süspansiyonlarını dört °C'de sabit rotasyonla dokuz saat boyunca inkübe edin. Nihai sakkarit konsantrasyonunu ayarlamak için birinci ve ikinci reaksiyonların reaksiyon süreleri değiştirilebilir.Reaksiyon tamamlandıktan sonra, tüpleri 12,000 ×g'de beş dakika boyunca santrifüjleyin. Soğuk bir ortamda robotik istasyona geri dönün. Tüp tutucuyu robotik kola yeniden takın ve robotik platformdaki ikinci şırıngayı doldurun.Soğuk su kullanıldığında, ilk şırınga boş kalmalıdır. Robotu başlatın. Her tüpteki süpernatan boş şırıngaya çekilir ve ikinci pompa tüplere soğuk su ekler.Bu adım, nanoparçacık süspansiyonlarından reaksiyona girmemiş reaktifleri uzaklaştırmak için gerçekleştirilir. Ardından, daha önce gösterildiği gibi sonikasyon yoluyla nanoparçacık süspansiyonunu homojenize edin. Son olarak tüpleri 12,000 ×g'de beş dakika boyunca santrifüjleyin.İkinci reaksiyon yüklemesi için robotik düzenek kullanarak soğuk su ile ikinci bir yıkama gerçekleştirin; birinci pompaya nanopartikül örneği başına 12 eşdeğer EDC ve ikinci pompaya nanopartikül örneği başına 12 eşdeğer NHS ekleyin. Nanopartikül içeren tüplere uygun hacimlerin dağıtılması için robotik platformu başlatın. EDC ve NHS varlığı, nanopartikül yüzeyine halihazırda bağlanmış olan etilen ditin amin grupları ile korumalı şekerin karboksilik asit grubu arasında bir amit bağının oluşmasını sağlayacaktır.Biriktirme işlemi tamamlandığında, 10 eşdeğer miktarda belirli bir sakkarit yükleyin. Bu çalışmada laktoz ve mevcut iki pompadaki glikolik asit kontrolü kullanılmıştır. Her bir sakkarit, her tüpte elde edilmek istenen fonksiyonelleştirmeye bağlı olarak test tüplerine biriktirilir; bu işlem, kullanılan spesifik reaksiyon için aktüatörleri ve pompa fonksiyonlarını çalıştırmak amacıyla kullanılan LabVIEW programında önceden programlanmıştır. Bu çalışmada karbonhidratların bağlanması için glikolik asit bir bağlayıcı kontrol olarak kullanılır; çünkü derin korumalı sakkaritler bu moleküle halihazırda kovalent olarak bağlıdır ve bu durum, nanoparçacık yüzeyine daha sonra bağlanmaya olanak tanır.Nanopartikül süspansiyonları, daha önce yapıldığı gibi sonikasyonla homojenize edilir ve ardından dört degrees Celsius'ta sabit rotasyonla dokuz saat boyunca inkübe edilir. İnkübasyonun ardından, nanopartikül süspansiyonları santrifüj edilip süpernatant uzaklaştırılarak yıkanır, ardından pellet soğuk su içerisinde yeniden süspanse edilerek sonikasyona tabi tutulur; fonksiyonelleştirilmiş nanopartikül kütüphanesini içeren tüpler, kuruması için en az iki saat boyunca bir vakum odasına yerleştirilir. Fonksiyonelleştirilmiş nanopartiküller; yüzey kompozisyonu, konsantrasyon, partikül boyutu, boyut dağılımı ve yüzey yükünü değerlendirmek amacıyla dinamik ışık saçılımı ve diğer yöntemlerle karakterize edilir.Burada gösterilen tam korumalı diano yan ürünü, otomasyon platformu kullanılarak sentezlenmiştir. Sentezlenen bileşiğin karakterizasyonu, VXR 400 megahertz spektrometre ile proton NMR kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Çözücü olarak CDC 13 kullanılarak, ürünün oluşumu bazı karakteristik piklerin varlığından teyit edilebilir.Proton NMR diyagramında, 1.79 ile 2.21 arasındaki dört proton ve 3.38'deki iki proton floristin etiketine aittir. 2.16'daki singlet pik asetata karşılık gelirken, 4.94 ve 5.11'deki pikler, reaksiyon süresinin nanoparçacıkların nihai morfolojisi ve elde edilen şeker bağlanma derecesi üzerindeki etkisini değerlendirmek için anomerik protonlardır. Nanoparçacıklar burada gösterildiği gibi artan reaksiyon süreleriyle fonksiyonelleştirilmiştir; 50 50 CPT CPH nanoparçacıklarının yüzeyindeki diano konsantrasyonu toplam reaksiyon süresiyle birlikte artmış ve 18 saat sonra maksimuma ulaşmıştır.Toplam 24 saatlik reaksiyon süresiyle fonksiyonelleştirilmiş nanopartiküller, burada gösterildiği üzere, akış sitometrisi kullanılarak fare kemik iliği kaynaklı dendritik hücrelerdeki CLR'leri hedefleme yeteneklerini değerlendirmek için kullanılmıştır. Fonksiyonelleştirilmemiş nanopartiküllerin yanı sıra laktoz ve dano ile fonksiyonelleştirilmiş nanopartiküllerle yapılan stimülasyon sonrası, C tipi lektin reseptörlerine karşı DC-SIGN ve manoz reseptörünün ekspresyonunda artış gözlemlenmiştir. Bu durum, etkili bir hedeflemeye işaret etmektedir.Buna karşın, Diano fonksiyonelleştirilmiş partiküller daha yüksek bir ekspresyon seviyesi göstermiş olup, bu durum söz konusu ligandın incelenen reseptörlere karşı özgüllüğünü ortaya koymuştur. Bu videoyu izledikten sonra, oligosakkaritlerin yüksek verimli otomatik sentezinin yanı sıra poli nanopartiküllerin fonksiyonelleştirilmesinin nasıl gerçekleştirileceği konusunda kapsamlı bir bilgi edinmiş olmanız gerekir. Hedefleme ajanları olarak bu karbonhidrat bazlı maddeler kullanıldığında, donör-akseptör korumalı şeker sentezi ve cihazın kurulumu ustalaşıldıktan sonra 24 ila 48 saat içinde tamamlanabilir.Elbette, süre uzunluğu, fonksiyonelleştirme süresinin yanı sıra kütüphanenin boyutuna da bağlıdır. Bu yöntemi uygularken, biyobozunur poli hidro partiküllerin fonksiyonelleştirilmesine yönelik reaksiyon koşullarını, nanopartikül kimyasına bağlı olarak optimize edebileceğinizi unutmamak önemlidir. Bu prosedür takip edilerek, immünolojik sonucu etkilemek amacıyla farklı hücre reseptörlerini hedeflemek için çeşitli karbonhidrat yapıları sentezlenebilir.

high-throughput-synthesis-carbohydrates-functionalization

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bu yöntem biyolojik polianhidrid film ve nanoparçacık kütüphanelerin kombinatoryal sentezi ve bu kütüphanelerin protein serbest high-throughput algılama anlatılmaktadır.

Kombinatorik Sentezi ve Polimer Film ve Nanoparçacık Kütüphaneler gelen Yüksek throughput Protein Yayın

Özellikle proteinleri ile etkileşim yeteneğine fonksiyonel grupları ile dekore nanoelyaflar hazırlamak için etkili bir yaklaşım tarif edilmektedir. Yaklaşım, ilk olarak uygun bir fonksiyonel grup ile fonksiyonelleştirilmiş bir polimerin hazırlanmasını gerektirmektedir. Işlevsel polimer elektroeğirme nanoelyaflar içine imal edilir. Bir protein ile nanoliflerden bağlanma etkinliği konfokal mikroskopi ile incelenmiştir.

Biofunctional Nanoliflerin Yapımı İçin Prosedür

Bu video zincir polimerizasyonların gizlenmemesi ve hidrojel sentezini sağlayan, poli (etilen glikol), metakrilat, hızlı, verimli bir yöntem gösterecektir. Bu benzer, fonksiyonlandırmalar verimliliğini değerlendirmek giderme ve gelişmiş değişiklikler için öneriler sunmak ve tipik hidrojel karakterizasyon teknikleri göstermek için peptidler, detay ortak analitik yöntemler içine metakrilamit işlevlerini tanıtmak için nasıl gösterecektir.

Mikrodalga destekli Poli işlevselleştirilmesi (etilen glikol) ve zincir polimerizasyonu ve Hidrojel formasyonunda kullanılan On-reçine Peptides

Glikomonomer hazırlama, kopolimerizasyon ve modifikasyon sonrasından oluşan RAFT bazlı floresan glikopolimerlerin verimli, üç aşamalı bir sentezi gösterilmiştir. Bu protokol, istenen yapılara sahip RAFT bazlı istatistiksel glikopolimerleri hazırlamak için kullanılabilir.

RAFT kontrollü Polimerizasyon yoluyla Tri-bileşenli Floresan Glycopolymers uyduruk ve Etkin Hazırlık

Çeşitli polimer kapsüllenmiş metal nanopartikül türlerini "homo-" ve "ko-polimerler" oluşan uzun zincirlere "polimerize etmek" için protokoller rapor ediyoruz.

Polistiren kullanma<em&gt; Bloğu</em&gt; -poli (Akrilik asit) Bunların homo- ve ko-polimerizasyon için monomer olarak metal Nanopartiküller -kaplı

Küçük ölçekte mikrobiyal ekzopolisakkaritlerin tanımlanması ve karakterizasyonu için otomatikleştirilmiş modüler yüksek verimli bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem, yeni izole edilen bakteri suşlarının veya tüm suş koleksiyonlarının hızlı bir şekilde taranmasını sağlamak için salgılanan polisakkaritlerin toplam miktarını ayrıntılı bir karbonhidrat parmak izi ile analiz etmek için hızlı bir ön seçimi birleştirir.

Otomatik Modüler Yüksek Verimli Ekzopolisakkarit Tarama Platformu Oldukça hassas Karbonhidrat Parmak İzi Analizi ile birleştiğinde

Yüksek derecede kararlı ağaç lifi bazlı tüylü nanopartiküller ve fonksiyonel selüloz bazlı biyopolimerler hazırlamak için sentez şemaları detaylandırılmıştır.

Son derece kararlı, Fonksiyonel Tüylü Nanoparçacıklar ve Ahşap Elyaf Biyopolimerler: Sürdürülebilir Nanoteknoloji Doğru

Hücre ve ilaç iletimi için cihazlar olarak RGD ile işlevselleştirilmiş hidrojellerin sentezi için bir protokol sunuyoruz. Prosedür, alkin ile modifiye edilmiş poliakrilik asit (PAA) ile bir RGD-azid türevi arasında bakır katalizli alkin-azid siklo ilavesini (CuAAC) içerir. Hidrojeller, mikrodalga destekli polikondensasyon kullanılarak oluşturulur ve fizikokimyasal özellikleri araştırılır.

Tedavi Uygulamaları için bir alet olarak RGD-fonksiyonelleştirilmiş Hidrojeller Sentezi

N- glukanlardir bağlantı için bir alüminyum oksit kaplı cam sentezi için modüler bir yaklaşım olarak geliştirilen glycan Mikroarray ve geniş antikor nötralize bir HIV profil oluşturma için kullanımı gösterilmiştir (ACG slayt) kaydırın.

N- glukanlardir dizi geliştirme ve HIV antikor için kemoterapi enzimatik sentezi profil oluşturma

Bu protokol, oligosakkaritlerin hiyerarşik ve programlanabilir tek pot sentezi için Auto-CHO yazılımının nasıl kullanılacağını göstermektedir. Ayrıca RRV tayini deneyleri ve SSEA-4'ün tek potlu glikozilasyonunun genel prosedürünü açıklar.

Hiyerarşik ve Programlanabilir Tek Pot Oligosakkarit Sentezi

Proteinler ve amin içeren ligandlar, ssiyansiyon reaktifi, 1-cyano-4-dimetilamiopyridine tetrafluoroborate (CDAP) tarafından aktive edilen polisakkaritlere, kurvalent protein (ligand)-polisakkarit konjugeleri oluşturmak için koaktif olarak bağlanabilir. Bu makalede, 0 °C'de kontrollü CDAP aktivasyonu ve değişen pH'da gerçekleştirme ve aktif polisakkaritlerin sonraki konjugasyonunu gerçekleştirmek için geliştirilmiş bir protokol açıklanmaktadır.

1-Cyano-4-Dimetilamiopyridine Tetrafluoroborate (CDAP) kullanılarak Çözünür Polisakkaritlerin Aktivasyonu ve Konjugasyonu

Öğrenin, otomatik çözelti fazı sentezi ile polianhidrid nanopartikülleri fonksiyonelleştirme yöntemini. Bu yüksek verimli yaklaşım, antijen sunan hücreleri hedeflemek için karbonhidrat bazlı ajanlar geliştirmeyi sağlar.

Polianhidrid Nanopartiküller Yüksek throughput Karbonhidrat sentezi ve işlevsel

Daha fazla video keşfet