Name: Bir Geliştirilmesi In vitro bir model sistem Equus Caballus ile IgE (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Öğrenin, IgE bağımlı mediyatör salınımını ölçmek için fare bazofilik lösemi hücrelerini kullanarak at alerjilerini inceleyen bu genetik mühendislik yöntemini. Alerji mekanizmalarını anlamak ve tedavi geliştirmek için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, tavsiye ve laboratuvar olanakları için Dr. Lynda Partridge'e teşekkür eder.

Celi Line 1) hazırlanması: <ol><li> At FcεRI α ifade RBL-2H3.1 hücre çizgisi Geliştirme: <ol><li> 28: tek tabakalı hücre hatları için temel doku kültürü teknikleri kullanılarak, at FcεRIα gen (Y18204.1 Gen Bankası) taşıyan, pEE6 plasmidi kullanılarak ebeveyn RBL-2H3.1 hücreleri transfekte. 1.2 x10 7 hücreleri mi -1 yoğunluğunda hücreler 0.8 ml 2 ug plasmid DNA ug ul -1 ekleyin. Hemen ardından 10 dakika süreyle buz üzerinde inkübe 0.4 cm'lik bir electrocuvette kullanılarak, 250 V 960 uF'de hücrelerin elektroporasyonu. </li><li> Genetisin G418 sülfat 0.4 g içeren bir ortam kullanılarak dönüştürülmüş hücreler daha sonra da bir floresan IgE antikorları ile etiketleyerek FACS yoluyla geri kalan canlı hücreler sıralamak. Soruşturma 2, 3, at FcεRIα hücre hattı ifade edilen RBL-2H3.1 kullanın. </li></ol></li><li> Ön testi, antikor hassasiyeti: <ol><li hasat birle bir petri kab at fc h ifade rbl-2h3.1.>5 mi -1 değerinde bir hücre yoğunluğu kültür ortamı içinde hücrelerin yeniden askıya yıkayın. </li><li> , 1 ng mL -1 nihai konsantrasyona kadar süspanse hücrelerine ilgi IgE ekleyin daha sonra sütun 1-6 bir 96 kuyulu bir levha üzerine hücre, 100 ul plaka ve 37 ° C ila +% 5 CO2 ile + 90% inkübe 16 saat süre bağıl nem. İnkübasyon süresinden sonra, ve salım deneyi gerçekleştirmeden önce, iyi bir karışmaya ve hücre yapışması için bir mikroskop altında kuyu edin. </li></ol></li></ol> 2) Salma Deneyi: <ol><li> Hücreleri Yıkama: <ol><li> Sıcak salınım tamponu 37 ° C 'de (25 mM PIPES, 120 mM sodyum klorür, 5 mM potasyum klorid, 0.04 mM magnezyum klorür, 1 mM kalsiyum klorür), nazik bir hücre yıkama için izin vermek. </li><li> Hücre ortamı çıkarmak için plaka iterek ve sıcak 100 ul ekleyerek 3 hücreleri yıkayın7 ° C, çıkış tamponu. Iki kez tekrarlayın. </li></ol></li><li> Antigen ile karşılaşmadan: <ol><li> Antijenin bir seri seyreltme 0 ng ml -1, mililitre başına 0,1 ng mi -1, 1 ng mL -1, 10 ng mi -1, 100 ng mi -1 (NIP-HSA ve DNP-HSA), 1.000 ng ml hazırlayın -1, 10,000 ng açma tamponu mi -1 ve 37 ° C'de ısıtın. </li><li> Ikinci hücre yıkamadan sonra, ortam atmak ve antijen çözümler 100 ul ile değiştirilir. Aynı sıradaki çukurlar (örneğin A1-6) 'ü ilave aynı antijen konsantrasyonu olduğundan emin olun. </li><li> 0 ng ml -1 antijeni ekleyerek satır A negatif kontrol kurmak. Triton-X tamponu (% 5 Triton X-100), H sırası hücreleri içinde hücreleri lize etmek için, ardından sıra (BG) aşağı doğru artan antijen konsantrasyonu ekleme, bir pozitif kontrol olarak kullanılır. 20 dakika sonra, hücreler, kendi aracıları bırakma izin vermek için 37 ° C'de inkübe edilir. </li></ol></li><li> Birey kontrolleri ayarlama: <ol><li> İnkübasyondan sonra, levha, diğer yarısı (kuyular A1-6 kuyu A7-12 için, vs.), hücre süpernatan 50 ul transfer. Süpernatant geri kalan 50 ul atın ve sütun 1-6 hücrelerin içindeki toplam aracıların yüzdesi de sütun 7-12 her serbest aracıların niceliğin ölçülmesini sağlamak için Triton-X tampon maddesi 50 ul ile değiştirin . </li></ol></li><li> Enzim alt-tabaka: </li><li> Β-heksosaminidaz alt-tabaka (50 mM 4-nitrofenil N-asetil-β-D-glükozaminit sitrat tamponu 0.2 M sitrik asit ve 0.2 M sodyum asetat ilave edilmesi ile 2 mM'ye kadar seyreltilir DMSO içinde hazırlanmış, pH 4.5) 50 ul ekle Tüm oyuklara β-heksosaminidaz enzim ile 4-nitrofenol için alt-tabaka dönüşümünü kolaylaştırdı. 2 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edin. </li></ol><img alt="Şekil 2.4.1" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/52222/52222fig241.jpg" width='"400"'><ol start="5"><li> Reaksiyonu Sonlandırma: <ol><li> Her bir ilave 150 ul Tris tamponu (1 M Tris-HCI, pH 9) ayrıca tampon yüksek pH ile reaksiyonu durdurun reaksiyonu durdurur ve bir sarı renk içine 4-nitrofenol döner. </li></ol></li><li> Sonuçları Okuma ve analiz: <ol><li> Sarı renk içine çekmeyi ölçmek üzere 405 nm 'de bir plakalı spektrofotometresi kullanılarak, plaka okuyun. Aşağıdaki formül kullanılarak serbest β-heksosamınıdaz yüzdesi hesaplanmıştır: </li></ol></li></ol><img alt="Şekil 2.6.1" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52222/52222fig261.jpg" width="100"><ol start="2"><li> Ortalama her satır için alınır sonra her kuyuya, bu formülü uygulayın. A1 ve A7 96 oyuklu bir plaka içerisinde kuyu konumunu temsil eder. Agai (toplam mediatör salınımı karşılık) β-heksosaminidaz salımının yüzde grafiğenst antijen konsantrasyonu 2, 3. </li></ol>

<ol><li>Taudou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+Alpha+Chain+of+Human+Fc%CE%B5RI+in+Transfected+Rat+Basophilic+Leukemia+Cells%3A+Functional+Activation+after+Sensitization+with+Human+Mite-Specific+IgE%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Arch+Allergy+Immunol%22%5BJournal%5D)">Expression of the Alpha Chain of Human FcεRI in Transfected Rat Basophilic Leukemia Cells: Functional Activation after Sensitization with Human Mite-Specific IgE.</a> Int Arch Allergy Immunol. 100 (4), 344-350 (1993).</li>
<li>Sabban, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Development+of+an+in+Vitro+Model+System+for+Studying+the+Interaction+of+EquuscaballusIgE+with+Its+High-Affinity+Fc%CE%B5RI+Receptor%22">Development of an in Vitro Model System for Studying the Interaction of EquuscaballusIgE with Its High-Affinity FcεRI Receptor</a>. , The University of Sheffield. Sheffield. (2011).</li>
<li>Sabban, S., Ye, H., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+in+Vitro+Model+System+for+Studying+the+Interaction+of+EquuscaballusIgE+with+Its+High-Affinity+Receptor+Fc%CE%B5RI%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">Development of an in Vitro Model System for Studying the Interaction of EquuscaballusIgE with Its High-Affinity Receptor FcεRI.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 153 (1-2), 6-10 (2013).</li>
<li>Wilson, A. P. M., Pullar, C. E., Camp, A. M., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+IgE+mediates+stimulus+secretion+coupling+in+rat+basophilic+leukemia+cells+transfected+with+the+a+chain+of+the+human+high-affinity+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human IgE mediates stimulus secretion coupling in rat basophilic leukemia cells transfected with the a chain of the human high-affinity receptor.</a> Eur J Immunol. 23, 240-244 (1993).</li>
<li>Hunter, M. J., Vratimos, A. P., Housden, J. E. M., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+canine-human+Fc+IgE+chimeric+antibodies+for+the+determination+of+the+canine+IgE+domain+of+interaction+with+Fc%CE%B5RI%CE%B1%5BTitle%5D)+AND+%22MolImmunol%22%5BJournal%5D)">Generation of canine-human Fc IgE chimeric antibodies for the determination of the canine IgE domain of interaction with FcεRIα.</a> MolImmunol. 45 (8), 2262-2268 (2008).</li>
<li>Rashid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+Diagnostic+and+therapeutic+applications+of+rat+basophilic+leukemia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22MolImmunol%22%5BJournal%5D)">Review: Diagnostic and therapeutic applications of rat basophilic leukemia cells.</a> MolImmunol. 52 (3-4), 224-228 (2012).</li>
<li>Cohen, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asthma+in+antiquity%3A+the+Ebers+Papyrus%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy+Proc%22%5BJournal%5D)">Asthma in antiquity: the Ebers Papyrus.</a> Allergy Proc. 13 (3), 147-154 (1992).</li>
<li>Dudler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+link+between+catalytic+activity%2C+IgE-independent+mast+cell+activation%2C+and+allergenicity+of+bee+venom+phospholipase+A2%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A link between catalytic activity, IgE-independent mast cell activation, and allergenicity of bee venom phospholipase A2.</a> J. Immunol. 155, 2605-2613 (1995).</li>
<li>Machado, D. C., Horton, D., Harrop, R., Peachell, P. T., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+allergens+stimulate+the+release+of+mediators+of+the+allergic+response+from+cells+of+mast+cell+lineage+in+the+absence+of+sensitization+with+antigen-specific+IgE%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Potential allergens stimulate the release of mediators of the allergic response from cells of mast cell lineage in the absence of sensitization with antigen-specific IgE.</a> Eur J Immunol. 26 (12), 2972-2980 (1996).</li>
<li>Smyth, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+molecular+basis+of+pro-allergenic+effects+of+cigarette+smoke%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the molecular basis of pro-allergenic effects of cigarette smoke.</a> Environ Sci Technol. 34 (7), 1370-1374 (2000).</li>
<li>Okada, H., Kuhn, C., Feillet, H., Bach, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%27hygiene+hypothesis%27+for+autoimmune+and+allergic+diseases%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22ClinExpImmunol%22%5BJournal%5D)">The 'hygiene hypothesis' for autoimmune and allergic diseases: an update.</a> ClinExpImmunol. 160 (1), 1-9 (2010).</li>
<li>Eder, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+environmental+and+genetic+factors+on+allergen-specific+immunoglobulin-E+levels+in+sera+from+Lipizzan+horses%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Vet+J%22%5BJournal%5D)">Influence of environmental and genetic factors on allergen-specific immunoglobulin-E levels in sera from Lipizzan horses.</a> Equine Vet J. 33 (7), 714-720 (2001).</li>
<li>Cook, W. R., Rossdale, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+syndrome+of+%27Broken+Wind%27+in+the+horse%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">The syndrome of 'Broken Wind' in the horse.</a> Proceedings of the Royal Society of Medicine. 56, 972-977 (1963).</li>
<li>Eyre, P., Lewis, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+systemic+anaphylaxis+in+the+horse%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Acute systemic anaphylaxis in the horse.</a> Br. J. Pharmacol. 48 (3), 426-437 (1973).</li>
<li>Bruggink, M. Global betting stable, but some countries suffer recession. , International Federation of Horseracing Authorities. Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www.horseracingintfed.com/Default.asp?section=Resources&area=0&story=664">http://www.horseracingintfed.com/Default.asp?section=Resources&area=0&story=664</a> (2009).</li>
<li>Wagner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IgE+in+horses%3A+occurrence+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">IgE in horses: occurrence in health and disease.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 132 (1), 21-23 (2009).</li>
<li>Hellberg, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Equine+insect+bite+hypersensitivity%3A+immunoblot+analysis+of+IgE+and+IgG+subclass+responses+to+Culicoidesnubeculosus+salivary+gland+extract%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Immunol.+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Equine insect bite hypersensitivity: immunoblot analysis of IgE and IgG subclass responses to Culicoidesnubeculosus salivary gland extract.</a> Vet. Immunol. Immunopathol. 113 (1-2), 99-112 (2006).</li>
<li>Schaffartzik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Equine+insect+bite+hypersensitivity%3A+what+do+we+know%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">Equine insect bite hypersensitivity: what do we know.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 147 (3-4), 113-126 (2012).</li>
<li>Künzle, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IgE-bearing+cells+in+bronchoalveolar+lavage+fluid+and+allergen-specific+IgE+levels+in+sera+from+RAO-affected+horses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vet+Med+A+PhysiolPatholClin+Med%22%5BJournal%5D)">IgE-bearing cells in bronchoalveolar lavage fluid and allergen-specific IgE levels in sera from RAO-affected horses.</a> J Vet Med A PhysiolPatholClin Med. 54 (1), 40-47 (2007).</li>
<li>Tahon, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+allergy+tests+compared+to+intradermal+testing+in+horses+with+recurrent+airway+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">In vitro allergy tests compared to intradermal testing in horses with recurrent airway obstruction.</a> Vet ImmunolImmunopathol. (1-2), 85-93 (2009).</li>
<li>Wagner, B., Radbruch, A., Rohwer, J., Leibold, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+anti-equine+IgE+antibodies+with+specificity+for+different+epitopes+on+the+immunoglobulin+heavy+chain+of+native+IgE%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">Monoclonal anti-equine IgE antibodies with specificity for different epitopes on the immunoglobulin heavy chain of native IgE.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 92 (1-2), 45-60 (2003).</li>
<li>Wilson, A. D., Harwood, L., Torsteinsdottir, S., Marti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+monoclonal+antibodies+specific+for+native+equine+IgE+and+their+application+to+monitor+total+serum+IgE+responses+in+Icelandic+and+non-Icelandic+horses+with+insect+bite+dermal+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">Production of monoclonal antibodies specific for native equine IgE and their application to monitor total serum IgE responses in Icelandic and non-Icelandic horses with insect bite dermal hypersensitivity.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 112 (3-4), 156-170 (2006).</li>
<li>McAleese, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning+and+expression+of+the+extra-cellular+part+of+the+alpha+chain+of+the+equine+high-affinity+IgE+receptor+and+its+use+in+the+detection+of+IgE%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">Cloning and expression of the extra-cellular part of the alpha chain of the equine high-affinity IgE receptor and its use in the detection of IgE.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 110 (1-2), 187-191 (2006).</li>
<li>Ledin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+therapeutic+antibody+responses+against+IgE+in+dogs%2C+an+animal+species+with+exceptionally+high+plasma+IgE+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Generation of therapeutic antibody responses against IgE in dogs, an animal species with exceptionally high plasma IgE levels.</a> Vaccine. 24 (1), 66-74 (2006).</li>
<li>Siraganian, R. P., Hook, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histamine+release+and+assay+methods+for+the+study+of+human+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Manual+of+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Histamine release and assay methods for the study of human allergy.</a> Manual of Clinical Immunology. , American Society for Microbiology. Washington, D. C. (1980).</li>
<li>Neuberger, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hapten-specific+chimaericIgE+antibody+with+human+physiological+effector+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A hapten-specific chimaericIgE antibody with human physiological effector function.</a> Nature. 314 (6008), 268-270 (1985).</li>
<li>Bingham, B. R., Monk, P. N., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+Protein+Phosphorylation+and+Ca2%2B+Mobilization+in+a+low+secreting+variant+of+the+rat+basophilic+leukemia+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Defective Protein Phosphorylation and Ca2+ Mobilization in a low secreting variant of the rat basophilic leukemia cell line.</a> The Journal of Biological Chemistry. 269 (30), 19300-19306 (1994).</li>
<li>McAleese, S. M., Halliwell, R. E., Miller, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning+and+sequencing+of+the+horse+and+sheep+high-affinity+IgE+receptor+alpha+chain+cDNA%5BTitle%5D)+AND+%22Immunogenetics%22%5BJournal%5D)">Cloning and sequencing of the horse and sheep high-affinity IgE receptor alpha chain cDNA.</a> Immunogenetics. 1 (51), 878-881 (2000).</li>
<li>Hongtu, Y. Study of the structure/function relationship in canine and human IgE as the basis for the development of rational therapeutic intervention strategies in allergic disease. , The University of Sheffield. (2010).</li>
<li>Sabban, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+pan-anti-allergy+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22JIBTVA%22%5BJournal%5D)">Towards a pan-anti-allergy vaccine.</a> JIBTVA. 2 (2), 15-27 (2013).</li>
<li>Moran, G., Burgos, R., Araya, O., Folch, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+bioassay+to+detect+reaginic+antibodies+from+the+serum+of+horses+affected+with+recurrent+airway+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">In vitro bioassay to detect reaginic antibodies from the serum of horses affected with recurrent airway obstruction.</a> Vet Res Commun. 34, 91-99 (2010).</li>
</ol>

Yazarlar, bu makalede rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Özetle bu soruşturmanın sonuçları at FcεRIα ifade RBL-2H3.1 hücreleri, bir antijen tarafından at IgE ile duyarlı ve meydan, onlar içinde arabulucu toplam miktarın% 4.88 ± 36,68% bir zirve mediatör salınımını vermek olduğunu gösterdi Hücreler, RBL-2H3.1 göre ana hücreler ekuin FcεRIα ifade değildir. Dolayısıyla, bu tahlil soruşturma ve in vitro at alerjik yanıtları incelemek için yararlı bir araç sağlar. Onun mast hücresi / bazofil soy hücreleri tarafından salınan arabulucu miktarını...

Alerji bin beri bilinmektedir. Bir astım tedavisi Ebers Papirüs (~ 1550 BCE) olarak bilinen Antik Mısır tıbbi metinde açıklanan ve 7 tedavisinde bitkisel ilaçlar tartışıldı. Günümüzde alerji T yardımcı hücre tür 2 (T H 2), bağışıklık sistemi kolu alerjenler olarak adlandırılan, çevresel antijenlere yanıt olarak immünoglobülin E (IgE) antikorlarının üretimi yön, bir tip I hipersensitivite cevabı olarak sınıflandırılır. Bunlar yaygın olarak bağışıklık sistemi hücreleri ile etkileşen ve IgE sentezi, sigara dumanı ya da dizel egzoz parçacıklar içinde parçacıklar geliştirmek göstermemektedir gibi interlökin-4 ve interlökin-13 8, 9 da dahil olmak üzere sentez ve pro-inflamatuar sitokinlerin salgılanmasını uyaran çeşitli maddelerdir 10. Son 50 yılda sanayileşmiş ülkelerde alerjik belirtiler de artış etkisi bir arada atfedilmiştir&#39;Hijyen Hipotezi&#39; 11 tarafından önerilen TH 2 sitokinler tarafından baskın bir profil yönünde immün yanıtı kaydırmaya birleştirmek çevresel kirleticiler ve daha dezenfekte çevre için bir eğilim,. Yukarıda belirtildiği gibi, insanlar alerjiden muzdarip olan tek memeli değildir. Özellikle atlar ve köpekler de klasik alerjik tepkiler geliştirebilir ve at alerji genetik ve çevresel faktörlere atfedilen insanlarda olduğu gibi 12 tarafından bir çalışma olduğunu göstermiştir. Sonuç olarak, bu hayvanlar bir kez klinik bulgular koymuş alerji genetik ve çevresel nedenler, hastalığa karşı duyarlılık onun ilerlemesi ve olası müdahale stratejileri arasındaki etkileşimi incelemek için iyi modeller sunuyoruz 1887 yılında, Stömmer, at kardiyovasküler sistem üzerindeki histamin etkisi insan ve at astım 13 arasındaki benzerliği açıklamak için ilk kişi olduİnsanlarda 14 çok benzer. Atlar da 15 yıllık 115.000.000.000 $ ABD bir bahis cirosu ile değer US $ 72 milyar at yarışı endüstrisinin temel taşı vardır. En çağdaş yarış atları itibaren 1878 Lady Anne Blunt tarafından yetiştirilen Arap atları az sayıda torunlarıdır. Modern yarış atları yaygın performans yetenekleri seçmek için akrabası olan. Bunlar, allerjik tepkileri monte duyarlılıkları bunlardan biri genetik bozukluklar, yatkındır. Onlar da bile en ciddi alerjik insanlarda 16 1000 kat daha yüksek serum IgE seviyeleri var. At alerjik tepkiler genellikle böcek ısırığı hipersensitivitesi (IBH) 17, 18 olarak ortaya çıkmaktadır. Sebebiyle sokması dermatit IBH sonuçlar cinsi Culicoides böcekler oluşturur. At alerjik hastalığın diğer bir şekli tekrarlayan solunum yolu tıkanmaları (RAO), bu akciğerlerde ve solunum yollarında tecelli olmasıdır. Hışıltı ve laboratuarı ile karakterizedirORed nefes. RAO sık mantar sporlarına tepki olarak ortaya çıkar ve başka bir soruşturma bu 20 teyit edilmemiş olmasına rağmen, yüksek alerjen spesifik IgE düzeyleri bir çalışmada 19 RAO muzdarip atların kaydedilmiştir. At alerjisi çalışmalar girişimi izlemeyi ve anti-at IgE monoklonal antikorları (mAb &#39;ler) 21, 22 geliştirerek ekuin IgE nötralize etrafında dönmektedir. Bundan başka, 23 tarafından yapılan çalışmada at yüksek afiniteli Fc reseptörün α hücre dışı etki üretimini tartışmaktadır at serumu IgE tespit etmek ve miktarını belirlemek için bir girişim zincirli (FcεRIα) reseptörü. Ledin 24 ile ilgili bir çalışma öz / non-self immünojenlerini kullanarak bağışıklık sistemini astarlanırsa serum IgE nötralize amaçlayan yeni bir yaklaşım anlatılmaktadır. Tüm bu çalışmalar, ancak, kendi protokollerinin güvenliğini ve etkinliğini test etmek etkili bir tahlil yoktu. Bu makalede, biz şimdi böyle bir tahlil sys sunmakβ-heksosaminidaz bırakma, hücre arabulucu degranülasyonunun bir göstergesi olarak, at FcεRIα ifade RBL-2H3.1 hücreleri üzerinde değerlendirilmiştir at sistemi ile ilgili tanı ve tedavi stratejilerinin çalışmaya uygulanabilir tem. Bu protokol, farklı türlerden elde edilen IgE için yüksek afinite reseptörünün IgE bağlama alanını kodlayan gen ile transfekte edilmiş, RBL hücrelerinde ve mühendislik tarif Önceki yayınlarda 25, 4, 5, 2, 3 dayanır. Protokol, sonuçları üçlü deneylerde standart sapma ± ortalama olarak sunulan bir β-heksosaminidaz salım deneyi gerçekleştirmek açıklar. Salınım testi ilk Siraganian tarafından geliştirilen ve insan alerji incelemek için 25 Hook edildi. Dr. Reuben Siraganian liderliğindeki laboratuar grubu da RBL hücre hattı geliştirdi. Bu RBL hücreler, insan FcεRIα ifade geliştirilmiş ve protokol 4 tarafından yayınlandı. Son parçasıDeney 4-hidroksi-3 hapten hedef bir IgE değişken bölgesi için bir fare geninin aşağısında ağır zincir genini klonlayarak, bir IgE antikorlarının üretimini tarif Neuberger 26 ile kağıt pSV plazmidin gelişimi ile gelen bölgesinin -nitro-fenasetil (NP), elde edilen kimerik antikor, tam fonksiyonel. Ayrıca bazofil hücre degranülasyonu ölçmek için yararlı bir protokol verme deneyinin standardizasyon sonuçlanan RBL hücrelerinde yüzeyi reseptörüne klonlanması ise becerisi aynı hapten hedefleme IgE geliştirmektir. Tahlil artıları ve eksileri var. Analizin artıları, bizim laboratuvar böylece insan, köpek ve at sistemleri degranülasyonunu test etmek için kullanılan olan herhangi bir memeli sistemi içinde kullanılmak üzere olan uyum ve bu basit bir organizmanın IgE sentezlenmesi ve bunun reseptörü klonlama ile elde edilebilir RBL hücrelerinde yüzeyi üzerine. Diğer taraftan,Tahlil dezavantajları, RBL hücrelerinde bunların Aynı deney içinde degranülasyon seviyelerinin varyasyonu elde yapma, termal, mekanik ve pH değişikliklerine karşı çok duyarlı olmasıdır. Bu nedenle kuvvetli tahliller zaman, üç kez tekrar edilir ve daha sonra bir ortalama onlardan alınır tavsiye edilir. Ayrıca, RBL hücreleri kendi bakım hantal hale uzun bir zaman (&gt; 10 haftalık) 27 doku kültürü içinde kalması durumunda olmayan serbest fenotipe doğru kayma eğilimindedir. Onlar da bir ışık mikroskobu görünmez ve hücrenin morfolojisi değişmez mikoplazma bakterilerin neden olduğu enfeksiyonların, eğilimli, ama büyük ölçüde onların degranülasyona düzeylerini değiştirmek istiyorum. Böylece düzenli mikoplazma testleri gereklidir.

<table><tbody><tr><td>RBL-2H3.1 At Fc & epsilon İfade Etme; RI ve alfa;</td><td>-</td><td></td> <td>Laboratuvarda üretilen</td></tr><tr><td>At IgE anti NIP-HSA</td> <td>-</td><td></td> <td>Laboratuvarda üretilen</td></tr><tr><td>96 Kuyulu Plaka</td><td>Sigma</td> <td>CLS3595-Çok</td><td></td></tr> <tr><td>Kanallı Pipet Anachem</td><td></td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>İnkübatör</td><td>Galaxy R</td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>4Hidroksi-5-iyodo-3-nitrofenilasetik asit</td><td>Cambridge Araştırma Biyokimyasalları</td><td>N-1070-1</td><td>NIP-OH, laboratuvarda NIP-HSA yapmak için İnsan Serum Albümini ile konjuge edildi</td></tr><tr><td>İnsan Serum Albüminine Konjuge Dinitrofenil</td><td>Sigma</td><td>A6661</td><td>Kısaltılmış DNP-HSA</td></tr><tr><td>Plaka Spektrofotometresi</td><td>Anthos Labtec HT2</td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>Borular</td><td>Sigma</td><td>P1851-Sodyum</td><td></td></tr> <tr><td>Klorür</td><td>Sigma</td><td>S7653-Potasyum</td><td></td></tr> <tr><td>Klorür</td><td>Sigma</td><td>P9333-Magnezyum</td><td></td></tr> <tr><td>Klorür</td><td>Sigma</td><td>M2670-Kalsiyum</td><td></td></tr> <tr><td>Klorür</td><td>Sigma</td><td>C1016-Triton</td><td></td></tr> <tr><td>x100</td><td>Sigma</td><td>X100-4-nitrofenil</td><td></td></tr> <tr><td>N-asetil-&beta;-D-glukozaminid</td><td>Sigma</td><td>N9376</td><td>&beta;-heksosaminidaz substratı adı verilen stok çözeltisi, DMSO Dimetil Sülfoksit Sigma'da hazırlanan 50mM idi</td></tr>.<tr><td></td><td></td><td>D2650-Sitrik</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Asit Sigma</td><td></td> <td>251275-Sodyum</td></tr> <tr><td>Asetat</td><td>Sigma</td><td>S7670-Tris</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma</td><td>T5941</td><td>-</td></tr></tbody></table>

bir geliştirilmesi in vitro bir model sistem equus caballus ile ige

Development of an in vitro model system for studying the interaction of Equus caballus IgE with its high-affinity receptor Fc&#949;RI

IgE'nin yüksek afiniteli Fc reseptörü (FcεRI) ile etkileşimi ve ardından antijenik bir meydan okuma, IgE aracılı alerjik reaksiyonlardaki temel yoldur. IgE ve FcεRI arasındaki yüksek afiniteli bağlanmanın bir sonucu olarak, B hücreleri tarafından sürekli IgE üretimi ile birlikte, alerjiler genellikle yaşam boyu devam eder ve şu anda kalıcı bir tedavi mevcut değildir. Atlar, özellikle yaygın olarak akraba evliliği olan yarış atları, performanslarını ciddi şekilde etkileyebilecek aşırı duyarlılık tepkilerinin gelişmesine çok yatkın bir memeli türüdür. Atlarda alerjik duyarlılığa verilen fizyolojik tepkiler, insanlarda ve köpeklerde gözlenenleri yansıtır. Bu yazıda, at sistemine ait alerjik yanıtın aracılarının salınımının kantitatif değerlendirmesi için yerinde bir tahlil sisteminin geliştirilmesini açıklıyoruz. Bu amaçla, at FcεRIα'yı kodlayan gen, ebeveyn Sıçan Bazofil Lösemi (RBL-2H3.1) hücrelerinin yüzeyine transfekte edildi ve eksprese edildi. Transfekte edilmiş at α zincirinin gen ürünü, endojen sıçan β ve γ zincirleri 1 ile fonksiyonel bir reseptör kompleksi oluşturdu. Elde edilen tahlil sistemi, at IgE ile duyarlılık ve β-hekzosaminidaz salınımı kullanılarak antijenik meydan okumayı takiben at FcεRIα transfekte edilmiş RBL-2H3.1 hücrelerinden salgılanan aracı miktarının değerlendirilmesini kolaylaştırdı 2, 3. Mediatör salınımı 100 ng ml-1 antijende %36.68 ± %4.88 ile zirve yaptı. Bu test, insan ve köpek alerjik tepkilerini incelemek için kullanılan önceki testlerden modifiye edilmiştir 4, 5. Ayrıca, bu tür bir tahlil sisteminin, alerjik hastalıkta tanı araçlarının geliştirilmesi ve potansiyel terapötik müdahale stratejilerinin güvenlik değerlendirmesi için birden fazla uygulamaya sahip olduğunu göstermiştir 6, 2, 3.

Ebeveyn RBL-2H3.1 hücreleri ve at FcεRIα reseptörü geni ile transfekte edilmiş olan birinci fare IgE anti-DNP-HSA ile duyarlı ve DNP-HSA antigen ile tehdit edildi. Fare IgE her iki hücre içinde endojen fare reseptörüne bağlanan ve bu nedenle mediatörler (Şekil 1 A) 'serbest bırakmak için, her iki hücre çizgilerinin salma canlılığını test etmek için bir kontrol olarak işlev görür. Bu önemli bir kontroldür ve hücre kültüründe uzatılmış (&gt; 10 hafta) geçmesi üzerine rutin beri yapılmalıdır, RBL-2H3.1 hüc...

Bu çalışma, sıçan bazofilik lösemi hücrelerinin at FcεRIα geni ile transfeksiyonuna dayanan genetik olarak tasarlanmış bir test sisteminin geliştirilmesini ve uygulamalarını açıklamaktadır. Transfekte edilmiş hücreler, alerjik yanıtın mediatörlerinin salınımının IgE ve antijen tarafından aktive edilebildiği fonksiyonel bir reseptörü eksprese eder.

Bir Geliştirilmesi In vitro bir model sistem Equus Caballus ile IgE

The interaction of IgE with its high-affinity Fc receptor (Fc&#949;RI) followed by an antigenic challenge is the principal pathway in IgE mediated ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, RAD Bazofil lösemi hücrelerinden IgE'ye bağımlı mediatör salınımının miktarını ölçmektir. Alerji semptomları, histamin gibi aracıların salınmasından kaynaklanır. Şimdi, bazofiller tarafından salınan tek mediatör histamin mast hücreleri değildir.Bu hücreler tarafından salınan tüm mediatörlerin toplamı, ani ve gecikmiş aşırı duyarlılığın belirti ve semptomlarına neden olur. Şimdi, köpekler ve atlar da alerjiden muzdarip olan tek organizma insanlar değil. Araştırmayı daha da geliştirmek ve aşılar gibi alerjiye karşı tedaviler bulmak için, varsa araştırma tedavisinden salınan aracıların miktarını ölçmek için bir salım testi gereklidir.Bu serbest bırakma testinin nedeni budur. İnsan sistemi için serbest bırakılan RBL aracısı testi ilk olarak 1986 yılında Ian ve Hook tarafından geliştirilmiş ve yayınlanmıştır. Daha sonra DOC sistemi için ve şimdi de at sistemi için geliştirildi.Modifikasyonlar, ilgilenilen proteinleri değiştirmek kadar basittir. Hücre hattı haberleri, at yüksek FNT ffc Serin R bir reseptör alfa zincirini mililitre başına 500.000 hücrelik bir hücre yoğunluğuna ifade eden Rat Baso lösemisi veya RBL iki H 3.1 hücre hattıydı. İlgilenilen IgE antikorunu mililitre başına bir nanogramlık bir nihai konsantrasyona ekleyin.Karışımdan 100 mikrolitre 96 toprak plakasına ekleyin ve 37 derecede 16 saat inkübe edin. Bu, hücrelerin kuyu yüzeyine yapışmasına izin verir ve antikor, reseptör yıkamasına bağlanır. Kalan bağlanmamış antikoru ve ölü hücreleri içeren ortamın iki katı 100 mikrolitre ılık 37 derece serbest bırakma tamponu.Tamponu son yıkamadan atın ve ilgilenilen konsantrasyonda 100 mikrolitre ilgilenilen antijen ile değiştirin. 37 derecede 20 dakikalık inkübasyondan sonra, salım mediatörlerini içeren 50 mikrolitre SUP natini yeni bir kuyucuğa aktarın ve kalan süpernatanı hücreleri bağlamak ve kalan mediyatörleri hücrelerin içinde serbest bırakmak için 50 mikrolitre Triton X tamponu ile değiştirin. 50 mikrolitrede 2 milyon molar beta hx.Birçok gün substrat sitrat tamponu içinde çözülür. 37 derecede iki saatlik bir inkübasyondan sonra, her kuyucuğa 150 mikrolitre tris tamponu ekleyin ve kuyuyu sarıya çevirin. 16 saat sonra 405 nanometrede renk emilimini ölçün.Ian Buffer olarak da bilinen serbest bırakma tahlil tamponunu 37 derecede ısıtın. Ayrıca, konsantrasyonlarda salım tamponundaki antijenin konsantrasyon gradyanını hazırlayın. Sıfır 0.1 1 10, 100, 1000 ve mililitre başına 10.000 nanogram.Sonra 37 derecede ısıtın. Ortamı çıkarmak için tabağı hızlı bir şekilde hafifçe vurarak kuyuları yıkayın ve kuyuların duvarlarına doğru yavaşça 100 mikrolitre ılık salma tamponu ekleyin. Bu, sıcaklık farkından kaynaklanan hücre stresini azaltmak içindir, bu da aracıları erken serbest bırakmalarına neden olur.Çanak iki kez yıkanmalıdır. Son salım tamponunu atın, yıkayın ve 100 mikrolitre antijen ekleyin, negatif kontrol için A satırında sıfır antijen konsantrasyonundan başlayarak ve konsantrasyon gradyanını B satırlarından G'ye ve son olarak Triton X dilimlerine indirgeyin, H satırında tamponlayın. Plakayı 37 derecede 20 dakika inkübe edin.Bu, hücrelerin inkübasyon döneminden sonra mediyatörleri serbest bıraktığı noktadır. Her kuyucuğun içindeki 50 mikrolitre sıvıyı ilgili kuyucuğuna aktarın. Yedi ila 12 sütununda, kalan sıvıyı bir ila altı konumlarında tamamen dışarı çıkarın ve atın ve 50 mikrolitre Triton X lizis tamponu ile değiştirin.Yemeğin 96 kuyusunun tümüne hazırlanan substrattan 50 mikrolitre ekleyin. İki saat boyunca 37 derecede inkübe edin. Beta H, birçok gün substratı dört nitro fenole dönüştürür.Kuluçka süresinden sonra, 150 mikrolitre tris tamponu ekleyerek reaksiyonu durdurun ve dört nitrofenolü sarı bir renge dönüştürün. 405 Nanometrede bir plaka spektrofotometresi kullanarak plakayı okuyun. Absorbans verilerini ölçtükten sonra, A kuyu pozisyonundaki hücrelerin içindeki toplam aracıların miktarını çarparak hesaplayın.Yediye iki konumunda karşılık gelen kuyu ve sonucu birdeki değere ekler. Bunun nedeni, deney sırasında, onu yeni bir kuyu muhalefetine aktardığımız gibi, serbest bırakma aracıları A muhalefetini içeren supinatın olmasıdır. Bir yedi.Kuyuların geri kalanı için hesaplamaları tekrarlayın. Kuyu karşıtlığındaki serbest bırakma aracılarının yüzdesini, A yedi konum değerini iki ile çarparak hücrelerin içindeki hesaplanan toplam aracılardan A yedi'yi hesaplayın. Yine, çünkü deney sırasında, Reese aracılarını içeren süpernata sahibiz.Onu yeni bir ürüne aktarırken, o ürünü 100 ile çarpın ve bu ürünü, o konum için hücrelerin içindeki aracıların karşılık gelen toplam değerine bölün. Bu, şişme için serbest bırakma aracılarının yüzdesini verir. Kuyucukların geri kalanı için hesaplamaları tekrarlayın, çünkü her sıradaki altı şişme aynı antijen ortalaması konsantrasyonu ile karşı karşıya kalır.Bu değerler ve standart sapmayı hesaplayın, bu değerleri aşağıdaki gibi bir grafik üzerinde çizin. Grafik, antijen konsantrasyonu arttıkça, mililitre başına 100 nanogramda zirveye ulaşana kadar daha fazla aracının salındığını, ardından aracı salınımının artan antijen konsantrasyonu ile azaldığını göstermektedir. Açık mavi renkteki kontrol salım testi, IgE antikorları içermez ve bu nedenle artan antijen konsantrasyonu ile aracı salınımında herhangi bir değişiklik göstermez.Bunu, IgE antikoru içerebilecek koyu mavi renkli deneysel sonuçla karşılaştırın. Bu, güvenlik açısından test edilen bir anti-IgE aşısının bir örneğidir. Kırmızı renkteki bu grafikten, anti-IgE serumunun hücre yüzeyindeki reseptörleri çapraz bağladığı ve RBL hücrelerinin tıpkı mor pozitif kontrolde görüldüğü gibi gri renkteki negatif kontrole kıyasla granül hale gelmesine neden olduğu ve bu aşıyı güvensiz hale getirdiği açıktır.Bu test çok yararlıdır, çünkü potansiyel anti-alerji ilaçları veya aşıları test edilirken aracı salınımını ölçebilir veya bunun gecikmesini ölçebilir, ayrıca gösterildiği gibi insan köpek veya at sistemleri için de uyarlanabilir, tahlil, anti-alerji antikorlarını test ederken mediatör salınımının başarılı bir şekilde bloke edilmesini veya başarısız bir şekilde bloke edilmesini belirleyebilir.

development-an-vitro-model-system-for-studying-interaction-equus

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu videoda, anti-GFP antikorları ile kaplanmış boncuklar kullanarak GFP etiketli vahşi tip ve mutasyona uğramış PD-1 proteinlerinin ko-immünopresipitasyonunu gerçekleştirmek için bir teknik gösteriyoruz. Boncuk bağlı PD-1-GFP proteinleri, PD-1 ile etkileşime giren SHP2 proteinleri ile inkübe edilir ve PD-1'de SHP2 etkileşiminde kritik bir rol oynayan spesifik yapısal motiflerin tanımlanmasını sağlar.

Transfekte Edilmiş Hücrelerde Enzim Reseptör Etkileşimlerini İncelemek için İmmünopresipitasyon Testi

Bu video, insan doğal öldürücü hücrelerinde terapötik antikorlar tarafından başlatılan FcγRIIIa kaynaklı olayları göstermektedir. Yapay stimülasyon platformu, hücre iskeletinin yeniden düzenlenmesi, degranülasyon, kemokin/sitokin üretimi ve bağlanmada yer alan antikorların FcyRIIIa ve Fc kısımlarının aracılık ettiği sinyal yollarını kapsayan aşağı akış efektör fonksiyonlarının araştırılmasını kolaylaştırır.

Antikorlar tarafından Fc Reseptör Aktivasyonunu İncelemek için Bir İn Vitro Yapay Aktivasyon Testi

Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), çoklu skleroz kurulmuş bir hayvan modelidir. C57BL / 6 fareleri, merkezi sinir sistemi otoreaktif bağışıklık hücreleri tarafından neden olduğu artan gevşek felce neden, miyelin oligodendrosit glikoprotein (MOG) peptit 35-55 (MOG 35-55) ile immünize edilir. Hastalığın başlama ve izleme için protokoller tartışılacaktır.

Miyelin Oligodendrosit Glikoprotein (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) C57BL / 6 Farelerde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit (EAE) Bağlı

Gömme sonrası immünogold yöntemi, spesifik moleküllerin hücre altı lokalizasyonunun yüksek çözünürlüklü analizlerini sağlamanın en etkili yollarından biridir. Burada, retinal şerit sinapslarında glutamat reseptörlerini kantitatif olarak analiz etmek için bir protokol açıklıyoruz.

Retina Şerit Sinapslar at Membran Reseptör Yüksek Çözünürlüklü Sayısal immunogold Analizi

sığır endotel hücrelerinin ana bir kültürü kornea endotelial-mezenkimal geçiş mekanizmasını araştırmak için kullanıldı. Ayrıca, bir fare endotel cryoinjury modeli in vivo olarak endotel-mezenkimal geçiş göstermek için kullanılmıştır.

Vitro ve in vivo Modelleri Kornea Endotel-mezenkimal Geçiş Çalışması için

Multipl sklerozun bir hayvan modeli olan deneysel otoimmün ensefalomiyeliti indüklemek için, fareler bir otoantijen ve Freund'un adjuvanını tamamlayan bir yağda su emülsiyonu ile bağışıklanır. Bu emülsiyonların hazırlanması için çeşitli protokoller mevcut olsa da, emülsiyon hazırlığı için hızlı, basit ve standartlaştırılmış bir homojenizasyon protokolü burada sunulmaktadır.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyeliti İndüklemek için Antijen/Adjuvan Emülsiyonlar Hazırlamak için Hızlı, Basit ve Standartlaştırılmış Bir Homojenizasyon Yöntemi

Enteroidler, doku fizyolojisi ve patofizyolojisi, ilaç geliştirme ve rejeneratif tıp çalışmaları için yeni bir model olarak ortaya çıkmaktadır. Burada, ilgili doku hücresi tipleriyle ko-kültüre izin veren bir sığır birincil hücre 2D enteroid türevi kültür sistemini tanımlıyoruz. Bu model, gastrointestinal araştırma modellemesi için translasyonel bir avantaj sunar.

Translasyonel Biyomedikal Araştırma Uygulamaları için Sığır Primer Enteroid Türevli İki Boyutlu Tek Katmanlı Kültür Sisteminin Oluşturulması

mScarlet adı verilen bir floresan proteini kullanarak Epon gömme sonrası bağıntılı ışık ve elektron mikroskobu için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem, floresan ve üst yapıyı aynı anda koruyabilir. Bu teknik, çok çeşitli biyolojik uygulamalara uygundur.

Epon Post Gömme Korbağıntılı Işık ve Elektron Mikroskobu

Bu protokol, retinadaki sinaptik devreleri ve protein lokalizasyonunu keşfetmeye odaklanarak, önceden gömülü immünoelektron mikroskobunun ayrıntılı adımlarını ana hatlarıyla belirtir.

İmmünoelektron Mikroskobunun Önceden Gömülmesi ile Retina Devrelerinin ve Moleküler Lokalizasyonun İncelenmesi

Enterik glia, postoperatif komplikasyonlar da dahil olmak üzere bağırsak homeostazı ve hastalık süreçlerindeki rolleri nedeniyle giderek daha fazla tanınmaktadır. Acil keşif laparotomisinden iyileşen at hastaları, yüksek inflamatuar postoperatif durum riskinden muzdariptir ve bu da çalışma için tekrarlanabilir at enterik glial primer hücre kültürü oluşturmanın önemini vurgulamaktadır.

At Enterik Glial Kültürü ve At Kolikinde Nöral İnflamatuar Mekanizmanın Çalışmasına Uygulama

Öğrenin, IgE bağımlı mediyatör salınımını ölçmek için fare bazofilik lösemi hücrelerini kullanarak at alerjilerini inceleyen bu genetik mühendislik yöntemini. Alerji mekanizmalarını anlamak ve tedavi geliştirmek için değerlidir.

Bir Geliştirilmesi In vitro bir model sistem Equus Caballus ile IgE

Daha fazla video keşfet