Name: Engineered Vaskülarize Muscle Flap (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-11T09:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 18 s
Description: Keşfedin, tam katmanlı karın duvarı defektlerinin rekonstrüksiyonu için mühendislikle üretilmiş vaskülarize kas flebi yöntemini. Biyobozunur iskelet üzerinde hücre ekimi ve fare modelinde anastomoz ile yüksek canlılık sağlanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma FP7 Avrupa Araştırma Konseyi Hibe 281501, ENGVASC tarafından desteklenmiştir.

Tüm hayvan çalışmaları Technion Hayvan Deneyleri Etik Kurulu tarafından kabul edildi. Bu işlem için, atimik çıplak farelere bağışıklık sistemince reddini önlemek için kullanılmıştır. Fare başka tür kullanıyorsanız, fareler cerrahi işlem ve siklosporin idaresi (ya da başka bir anti-ret yerine) öncesinde tavsiye edilir traş edilmelidir. 1. İskele Hazırlama ve Hücre katıştırma <ol><li> Aşağıdaki şekilde poli-L-laktik-asit (PLLA) ve polilaktik-ko-glikolik asit (PLGA) ve 1 karışımı: 1 oluşan iskeleleri hazırlayın: <ol><li> PLLA 500 mg ve 10 ml kloroform içinde PLGA 500 mg çözülür. </li><li> Bir Teflon kalıp toplandı, sodyum klorür parçacıkları 0.4 g polimer çözeltisi, 0.24 ml ilave edilir. 212-600 um&#39;lik bir tuzunun çapı kullanın. Kloroform O / N buharlaşmasına izin verin. </li><li> Birbirine bağlı gözenekli 3D iskeleleri giden damıtılmış su kullanarak tuz hemen çözün. </li><li> Polimer parçalar KesBir makas kullanılarak, daha sonra, 30 dakika süre ile,% 70 etanol (h / h) ile ıslatın ve kullanımdan önce 2 dakika boyunca PBS içinde 3 kez yıkayın. </li></ol></li><li> (1 endotelial hücre ortamında (EGM-2,% 10 fetal sığır serumu ile takviye edilmiş olan madde malzemesi ve kas hücresi ortamı (Dulbecco minimal esas ortamı (DMEM), bileşenleri ile takviye edilmiş FBS: 1, aşağıdaki hücreler bir tri-kültür hazırlama ),% 2.5 HEPES tamponu, 100 U / ml penisilin, ve 0.1 mg / ml streptomisin (Pen-Strep çözeltisi). <ol><li> 0.5 x 10 6 C2C12 miyoblastlar, 0.9 x 10 6 İnsan göbeğine yakın damar endotelial hücreler (HUVECs) ve 0.2 x 10 6 normal insan dermal fibroblastları (NHDF) kullanın. </li></ol></li><li> , 4 dakika boyunca 200 x g&#39;de bir mikrosantrifüj tüpü ve santrifüj hücreleri birlikte karıştırın orta aspire ve hücre ortamı ul 4 ul buz gibi soğuk hücre dışı matris çözeltisi karışımı ve 4 pelet yeniden askıya. </li><li> X 7 mm x 1 mm (uzunluk x genişlik x kalınlık) PLLA / PLG 10 mm&#39;lik bir parça kesinBir skafold ve 4 ml hücre orta eklemeden önce (30 dak, 37 ° C,% 5 CO2), bir 6-yuvalı plaka içinde bir hücre süspansiyonu tohum hücre dışı matris çözeltisi katılaşmaya sağlar. </li><li> Implantasyon öncesi on gün iskeleleri inkübe ve orta her gün değiştirin. </li></ol> 2. Cerrahi Prosedür Başlamadan Önce <ol><li> (Otoklav) aşağıdaki cerrahi aletler hazırlayın ve sterilize: küçük, ince, düz makas, bir yay makas, düz, ince uçlu forseps, taraklı forseps ve bir iğne tutucu. </li><li> 425 ul ketamin ve 1 ml şırınga içinde 75 ul ksilazin karıştırılarak, bir mikrosantrifüj tüpü içinde ksilazin çözelti: a ketamin karışım hazırlayın. </li><li> Steril tuzlu su (01:20) &#39;de 0,3 mg / ml buprenorfin seyreltilir. </li></ol> 3. Flap İnşaatı (Graft implantasyon) <ol><li> Bir insülin şırıngası kullanılarak, ketamin intraperitoneal bir enjeksiyonu yoluyla anestezi fare: ksilazin (35 ul başınaVücut ağırlığı 20 g) eklenmiştir. </li><li> Deri altına buprenorfin opperation önce (0.05-0.1 mg / kg nihai konsantrasyon) enjekte edilir. </li><li> Normal vücut sıcaklığını sağlamak için, 37 ° C ısıtılmış bir sahnede fare koyun ve daha sonra bir yapışkan bandaj kullanarak fare sabitleyin. </li><li> Pamuk ipuçlarını kullanarak, farenin gözlerinin (dehidratasyonu önlemek için) göz merhemi yağlama yönetmek. </li><li> Bir aseptik çalışma alanı oluşturmak için, pamuk ipuçları, iyot temiz kesi ve daha sonra% 70 etanol kullanılması. </li><li> Küçük bir makas ve forseps kullanarak, femoral arter ve ven (AV) damarlar açığa kadar, femoral damarların paralel inguinal ligaman diz seviyesinden, deri yoluyla bir kesi yapmak. </li><li> Dokuya daha rahat erişmek için, bir kafes kullanarak cilt basılı tutun. </li><li> Yaylı makas ve forseps kullanarak, dikkatli çevreleyen dokudan femoral arter ve ven damarları izole. Kasık lig seviyesinden başlayınÜstün epigastrik damarların çatallanma Ament. Bacağa kan akışını korumak ve daha sonra iskemi önlemek amacıyla, el değmemiş profunda bırakın. </li><li> Profunda&#39;da altında ve tibial ve proneal AV bifurkasyonunun yukarıda maruz femoral AV etrafında (Bölüm 1) greft katlayın ve 8-0 ipek sütür kullanarak uçları katılın. </li><li> Sadece femoral AV damarlarının çimlenme kılcal damarlar yoluyla implant kanlanmalı sağlamak için, 6-0 dikiş ile greft etrafında steril lateks parçası ve dikiş sarın. </li><li> 4-0 ipek sütür kullanarak üstteki deriyi kapatın. </li><li> Greft bir flep olarak aktarılır kadar anestezi ve bundan sonra her gün kurtarma kadar yakından fare izleyin. Deri altına buprenorfin 2-3 gün boyunca günde iki kez (0.05-0.1 mg / kg nihai konsantrasyon) enjekte edilir. NOT: maruz kalan doku dehidratasyonu önlemek için, herhangi bir aşamada tuz kullanın. </li></ol> 4. Flap Transferi <ol><li> Birinde ya daİki hafta İmplantasyon, ketamin intraperitoneal bir enjeksiyonu yoluyla anestezi fare: ksilazin (35 ul / 20 g), bir insülin şırıngası kullanılarak. </li><li> Deri altına buprenorfin opperation önce (0.05-0.1 mg / kg nihai konsantrasyon) enjekte edilir. </li><li> Normal vücut sıcaklığını sağlamak için, 37 ° C ısıtılmış bir sahnede fare koyun ve daha sonra bir yapışkan bandaj kullanarak fare sabitleyin. </li><li> Pamuk ipuçlarını kullanarak, farenin gözlerinin (dehidratasyonu önlemek için) göz merhemi yağlama uygulanır. </li><li> Pamuk ipuçları kullanılarak, mikropsuz bir çalışma alanı oluşturmak için, iyot ile ve daha sonra% 70 etanol ile (karın, diz alanı) kesi temizleyin. </li><li> Dikkatlice makas kullanılarak, deride sütürler açıp, bir makas ve forseps kullanarak, ventral deri yoluyla devam inguinal ligament cilt üzerinden paralel bir kesi yapmak. </li><li> Dikkatle forseps ile lateks parçası kaldırmak ve vaskülarize flep maruz kalmaktadır. </li><li> Bir SCISS kullanmaors ve forseps, çevredeki doku doku kapağı teşrih. </li><li> Bir forseps ve bir iğne tutucu kullanarak, AV kanamayı önlemek için 8-0 ipek dikişlerle femoral AV distal ucunu Arter. Ardından, distale katlanmış implante doku ve 8-0 sütür ile, diz hizasında AV dağlamak. </li><li> Yavaşça tam kat defekt yapılmalıdır hangi mesafeden belirlemek için, arter zarar gelmesin, ventral karın duvarına doğru, greft ile sarılmış femur AV aktarın. DİKKAT: çok arter çekilmesi arteri zarar verecektir. </li><li> Ince bir makas kullanarak, ventral karın duvarında bir kesi yapmak. </li><li> Bir bahar makas kullanarak, rektus abdominus kasında bir kesi yapmak. Üstteki deri ile rektus abdominus kas yaklaşık 1 cm x 0,8 cm segmenti çıkartın. </li><li> Ventral abdom tam kalınlıkta defekte, eksenel flep olarak, vaskülarize greft ile zarflı femur AV, Transferinal duvar. </li><li> Fıtık önlemek için, 8-0 ipek sütürler kullanılarak, çevredeki kas dokusuna kanadı dikin. </li><li> Karın kas flep dikilmesi sırasında iç organları dikilmesi önlemek için, bir forseps ile kas yükseltmek. Tam karın duvarı defekti etkisini taklit maruz kalan ventral cilt bırakın. </li><li> İyotlu gazlı bez ve maruz alanının kirlenmesini önlemek için steril bir bandajla deride yara örtün. </li><li> 4-0 ipek sütür kullanarak bacak cilt dikin. </li><li> Flep alımı kadar, anestezi ve bundan sonra her gün kurtarma kadar yakından fare izleyin. Deri altına buprenorfin 2-3 gün boyunca günde iki kez (0.05-0.1 mg / kg nihai konsantrasyon) enjekte edilir. </li><li> NOT: maruz kalan doku dehidratasyonu önlemek için herhangi bir aşamada tuz kullanın. </li></ol> Graft Damar Perfüzyon 5. Ultrason Belirlenmesi NOT: transferi öncesinde vasküler perfüzyon of greft ultrasonografi ile, implantasyon sonrası bir ve iki hafta ölçülür. <ol><li> % 2 izofluran kullanarak fare anestezisi. </li><li> Normal vücut sıcaklığını sağlamak için, 38 ° C ısıtılmış bir hareketli sahnede fare yerleştirin ve daha sonra bir yapışkan bandaj kullanarak fare sabitleyin. </li><li> B-mod ayarlanmış doğrusal olmayan dönüştürücü ile femoral arter ve ven damarları bulun. </li><li> Renkli Doppler moduna ayarlamak transdüser kullanılarak greft femoral damarların açıklığını inceleyin. </li><li> Üreticinin talimatlarına göre hedefli olmayan kontrast ajanı hazırlanır. </li><li> Tuzlu su ile dolu bir 1 ml şırınga için kuyruk damarından sonda (27 G iğne ile 12 cm boru) takın. Isıtma sahnede fare yanında şırınga sabitleyin (şırınga hareketini önlemek için). </li><li> Fare kuyruğu ven kateteri bağlayın ve iğne sabitleyin. </li><li> Her iki enjeksiyonlar damara ve doldurmak için yapılıyor emin olmak için tuzlu su enjekte bazıtuzlu su ile boru (hava kabarcıklarını önlemek için). </li><li> Kontrast maddenin 70 ul 1 ml şırınga doldurun ve kontrast maddesi şırınga ile tuzlu su şırınga değiştirin. </li><li> Kontrast madde enjeksiyonu görüntü için ultrason ayarlayın. Non-lineer modda özelliklerinde 1,500 kare sayısını ve kare% 30 bozulma darbe kurdu. Not: bozulması puls sonrasında mikro-kabarcıklar kılcal kabarcık akış hızına bağlıdır ve mikro-kabarcıkların enjekte hızından bağımsız olan bir oranda damarları yeniden doldurun. Kare sayısı doldurma zamanında 19,20 göre değiştirilebilir. </li><li> Yavaş yavaş kuyruk damar içine kontrast madde enjekte edilir. </li><li> Yüksek çözünürlüklü ultrason sisteminin doğrusal olmayan kontrast modunda görüntüler yakalayın. </li><li> Daha önce 19,20 açıklandığı gibi, yazılımı kullanarak sonuçları analiz. <ol><li> Görüntüsü elde im faiz (ROI) bir bölge çizindolaylı olarak kontrast modunda bozulması darbe sonrası. ROI sadece kontrast madde ile doldurulmuş alanı belirtilmelidir. </li><li> Bozulması darbe sonrası karşı mikro-kabarcıkların enjekte edildikten sonra, doğrusal olmayan sinyal ortalama yoğunluğu oranıdır ve perfüzyon hacminin bir ölçüsüdür pik geliştirme (PE), hesaplayın. </li><li> Pik sinyali (P) kadar geçen süre (T) tespit edilir akış oranı hesaplanır. </li></ol></li></ol> Greft Vaskülarizasyon Kapsamında 6. Belirlenmesi Not: greft vaskülarizasyonu ölçüde bir veya iki hafta implantasyondan sonra belirlenir. <ol><li> Bir insülin şırıngası kullanılarak, ketamin intraperitoneal bir enjeksiyonu yoluyla anestezi fare: ksilazin (35 ul / 20 g) eklenmiştir. </li><li> 1 ml şırınga kullanılarak, damar içinden, kuyruk damarına 10 mg / ml floresin izotiyosiyanat-eşlenikli dekstran (FITC-Dextran, = 500,000 MW) 200 ul enjekte edilir. &lt;/ li&gt; <li> On sn enjeksiyonundan sonra servikal dislokasyon ile fare euthanize. </li><li> Fare bacak açın ve greft maruz kalmaktadır. </li><li> Fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile greft yıkayın ve% 10 nötr tamponlu formalin uygulanır. </li><li> Görüntü konfokal mikroskop kullanılarak fare bacak greft. </li><li> Fonksiyonel damar yoğunluğu (FVD) ölçmek. <ol><li> Odaklı mikroskopik görüntülerin yeşil kanal (uyarma = 488 nm) izole edin. </li><li> Yüksek kontrastlı yapıları vurgulamak amacıyla, bir yüksek geçiren filtre ile sonuçlanan görüntüleri geçirin. </li><li> Yüksek geçiren filtre tarafından güçlendirilmiş olabileceğini gürültü çıkarmak için bir despeckling filtresi kullanın. </li><li> Elde edilen görüntü üzerinde eşik değerini ayarlayın; orijinal görüntüdeki özellikleri ve yapıları, ikili görüntüde görülebilir olacak şekilde eşik değeri ayarlanır. </li><li> Bir boyut eşiği uygulayın, böylece tanımlanan sIz daha büyük Bağlı piksel sadece gruplare eşiği ikili görüntüdeki kalır. </li><li> Zhang-Suen algoritması kullanarak 21 greft gemilerin iskelet özetleyin. </li><li> Her geminin orta hat uzunlukları toplanmasıyla ve ROI alanına göre sonucu bölerek FVD hesaplayın. </li></ol></li></ol> Graft 7. Immünohistolojik ve histolojik Boyama <ol><li> Immünohistolojik Boyama <ol><li> Konfokal görüntüleme sonra, küçük bir makas ve forseps bir kullanarak greft almak. Greft iki ucu AV damarları incelemek ve greft almak. </li><li> 30 dakika boyunca% 10 nötr tamponlu formalin içinde greft saptamak - 2 saat. </li><li> Parafine kadar% 70 etanol içinde histoloji kasetlerinde greft ve mağaza yerleştirin. </li><li> Parafin standart fiksasyon kullanarak ve protokol 22 gömme göm ve bir mikrotom kullanılarak 5 mikron dilimler halinde parafin doku dilim. AV dikey bütün doku dilimgemiler. </li><li> 10 dakika her biri, iki kez% 100 ksilen içine daldırma ile parafine gömülü bölümleri Deparaffinize. </li><li> 250 ml&#39;lik plastik Coplin kavanoza slaytlar düzenleyin. </li><li> 3 dakika her biri için etanol konsantrasyonunun (100,% 96,% 90,% 80,% 70,% 50,% 30,% ve çift damıtılmış su (DDW)) azaltılması seri batırma ile rehidrate. </li><li> DDW 250 mL antijeninin ortaya çıkartılması çözeltisi 2.35 ml sulandırarak antijeninin ortaya çıkartılması çözeltisi hazırlayın. 95 ° C&#39;ye ayarlanmış bir mikrodalga 2 dakika boyunca antijeninin ortaya çıkartılması çözeltisi ısıtın. </li><li> 95 ° C&#39;ye ayarlanmış bir mikrodalga fırın içinde 3 dakika boyunca daha önceden ısıtılmış antijeninin ortaya çıkartılması çözeltisi ve ısı içine slaytlar yerleştirin. 50 ° C&#39;ye kadar slaytlar soğutun. </li><li> 2 dakika boyunca daha ısıtılır ve oda sıcaklığına soğutulur. </li><li> Endojen peroksidaz aktivitesi söndürmek ve daha sonra PBS içinde iki kere yıkayın, oda sıcaklığında, 10 dakika boyunca% 3.3 H, metanol içinde 2 O 2 çözeltisi slaytlar inkübe edin. </li><li> Bir kuluçka odasına hazırlayın: Yer ıslak absoBir histoloji kutu içinde rbent çarşaf ve hassas bir görev silecekleri kullanarak slaytları kurulayın. </li><li> Yuvarlak dilim başına (PBS içinde hazırlanan% 2) çözeltisi bloke keçi serumu yaklaşık 50 ul bir hidrofobik kalem kullanılarak ve oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edilir slayt üzerinde kesit alanı. </li><li> Çözümü engelleme tavşan anti-CD31 antikoru 1:50 seyreltin, dilim başına yaklaşık 50 ul antikor uygulayın ve 4 ° C &#39;de O / N, inkübe edilir. PBS ile 3 kez, her biri 5 dakika durulayın. </li><li> Slaytlarının yer, PBS içinde dilim başına antikorun yaklaşık 50 ul 400 ve oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edilir: biyotinlenmiş keçi anti-tavşan ikincil antikoru 1 seyreltin. </li><li> PBS ile 3 kez, her biri 5 dakika durulayın. </li><li> PBS içinde 400, oda sıcaklığında, 30 dakika süre ile slaytlar ile dilim başına yaklaşık 50 ul uygulamak ve inkübe: streptavidin-peroksidaz 1 seyreltin. PBS ile 3 kez, her biri 5 dakika durulayın. </li><li> Üreticinin # göre dilim başına yaklaşık aminoethylcarbazole 50 ul (AEC) alt-tabakanın uygulama8217; ın talimatları. Reaksiyonu durdurmak için DDW slaytlar batırın. </li><li> 2 dakika süreyle Mayer&#39;in hematoksilen çözeltisi yaklaşık 50 ul bölümleri daldırarak mavi çekirdekleri Leke. Yavaşça su ile durulayın ve ardından orta montaj bölümleri kapsamaktadır. </li><li> Bir çift-kör bir yaklaşım kullanarak CD31-pozitif boyanma niceliğini. CD31 boyama kahverengi leke olarak belirir. Binoküler mikroskop altında 40X büyütme görüş alanında 4-5 farklı alanları seçin. CD31-pozitif lümen sayısını. <ol><li> Alanların sayısı ve (binoküler verilerine göre) fieldarea ile sayılan lümen sayısı bölerek iskele başına CD31-pozitif lümen ortalama sayısını hesaplayın. NOT: uygulanan reaktif hacmi, tüm hatlarıyla dilim karşılamak için yeterli olmalıdır. </li></ol></li></ol></li><li> Histolojik Boyama <ol><li> % 10 nötral tamponlu formalin greft sabitleyin. </li><li> Parafin kullanılarak standart göm greftlertespit ve gömme işlemleri. </li><li> 10 dakika boyunca iki kez,% 100 ksilen içine daldırma ile parafin kesitlerinden parafin çıkarın. </li><li> % 100 izopropanol içinde rehidrasyon için iki kez hızlı yıkama. </li><li> Iki kez hızlı yıkama% 95 Etanol. </li><li> Musluk suyu ile üç kez yıkayın. </li><li> 10 dakika boyunca Hematoksilen daldırın. </li><li> Musluk suyu ile üç kez yıkayın. </li><li> 2 dakika boyunca Eosin bölgesindeki Immere. </li><li> Hızlı yıkama iki kez% 95 Etanol içinde kurutmak. </li><li> Iki kez hızlı yıkama% 100 izopropanol. </li><li> Iki kez hızlı yıkama% 100 ksilen. </li><li> 1.5 mm kalınlığında cam kapak ile DPX yapıştırıcı ile kaplayın. </li><li> 40X büyütmede mikroskop kullanılarak görüntü. </li></ol></li></ol> 8. Mekanik Özellikler Değerlendirme <ol><li> Küçük makas ve forseps bir kullanarak greft almak. </li><li> PBS greft durulayın. </li><li> Greft genişlik ve kalınlık ölçülür ve kalınlığı ile çarpılan genişliği çapraz kesit alanı hesaplanır. </li><li> Bizehidratlı greft bir gerilme-deformasyon eğrisi oluşturmak için test cihazı e. <ol><li> Sistem çekme kulpları arasındaki greft monte edin ve iki kulpları (yani, ilk uzunluk) arasındaki son uzunluğunu ölçmek. </li><li> Başarısızlık kadar, 0.01 mm / sn gerilme hızını uygulayın. </li><li> Üreticinin protokolünü kullanarak geliştirilen kuvvet ve deplasman kaydedin. </li><li> Matlab bir gerilme-uzama eğrisi oluşturun. <ol><li> Bölü ilk uzunluk değiştirmesine göre, bu tür hesaplayın. Stres kesit alanına bölünmesi ile elde ölçülen kuvvet olarak hesaplanır. </li><li> Gerilme-uzama eğrisindeki doğrusal bölgesi eğimi ve eğrinin maksimum noktası olarak sertliği belirlemek nihai gerilme mukavemetidir. </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol><li>Engelsman, A. F., van der Mei, H. C., Ploeg, R. J., Busscher, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+phenomenon+of+infection+with+abdominal+wall+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The phenomenon of infection with abdominal wall reconstruction.</a> Biomaterials. 28 (14), 2314-2327 (2007).</li>
<li>De Coppi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myoblast-acellular+skeletal+muscle+matrix+constructs+guarantee+a+long-term+repair+of+experimental+full-thickness+abdominal+wall+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Myoblast-acellular skeletal muscle matrix constructs guarantee a long-term repair of experimental full-thickness abdominal wall defects.</a> Tissue Eng. 12 (7), 1929-1936 (2006).</li>
<li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+full-thickness+abdominal+wall+defects+in+rats+using+collagen+scaffolds+loaded+with+collagen-binding+basic+fibroblast+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Regeneration of full-thickness abdominal wall defects in rats using collagen scaffolds loaded with collagen-binding basic fibroblast growth factor.</a> Biomaterials. 32 (3), 753-759 (2011).</li>
<li>Yezhelyev, M. V., Deigni, O., Losken, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+full-thickness+abdominal+wall+defects+following+tumor+resection%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">Management of full-thickness abdominal wall defects following tumor resection.</a> Ann Plast Surg. 69 (2), 186-191 (2012).</li>
<li>Macchiarini, P., Walles, T., Biancosino, C., Mertsching, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+human+transplantation+of+a+bioengineered+airway+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">First human transplantation of a bioengineered airway tissue.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 128 (4), 638-641 (2004).</li>
<li>Macchiarini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+transplantation+of+a+tissue-engineered+airway%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Clinical transplantation of a tissue-engineered airway.</a> Lancet. 372 (9665), 2023-2030 (2008).</li>
<li>Atala, A., Bauer, S. B., Soker, S., Yoo, J. J., Retik, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+autologous+bladders+for+patients+needing+cystoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered autologous bladders for patients needing cystoplasty.</a> Lancet. 367 (9518), 1241-1246 (2006).</li>
<li>Nishida, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+reconstruction+with+tissue-engineered+cell+sheets+composed+of+autologous+oral+mucosal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Corneal reconstruction with tissue-engineered cell sheets composed of autologous oral mucosal epithelium.</a> N Engl J Med. 351 (12), 1187-1196 (2004).</li>
<li>Petite, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+bone+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered bone regeneration.</a> Nat Biotechnol. 18 (9), 959-963 (2000).</li>
<li>Banta, M. N., Kirsner, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulating+diseased+skin+with+tissue+engineering%3A+actinic+purpura+treated+with+Apligraf%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatol+Surg%22%5BJournal%5D)">Modulating diseased skin with tissue engineering: actinic purpura treated with Apligraf.</a> Dermatol Surg. 28 (12), 1103-1106 (2002).</li>
<li>Vunjak-Novakovic, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+cardiac+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+engineering.+Part+B%2C+Reviews%22%5BJournal%5D)">Challenges in cardiac tissue engineering.</a> Tissue engineering. Part B, Reviews. 16 (2), 169-187 (2010).</li>
<li>Novosel, E. C., Kleinhans, C., Kluger, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularization+is+the+key+challenge+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Vascularization is the key challenge in tissue engineering.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 63 (4-5), 300-311 (2011).</li>
<li>Lesman, A., Gepstein, L., Levenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularization+shaping+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Vascularization shaping the heart.</a> Ann N Y Acad Sci. 1188, 46-51 (2010).</li>
<li>Patton Jr, H., Berry, S., Kralovich, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+human+acellular+dermal+matrix+in+complex+and+contaminated+abdominal+wall+reconstructions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Am+J+of+Surg%22%5BJournal%5D)">Use of human acellular dermal matrix in complex and contaminated abdominal wall reconstructions.</a> The Am J of Surg. 193 (3), 360-363 (2007).</li>
<li>Menon, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revascularization+of+human+acellular+dermis+in+full-thickness+abdominal+wall+reconstruction+in+the+rabbit+model%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">Revascularization of human acellular dermis in full-thickness abdominal wall reconstruction in the rabbit model.</a> Ann Plast Surg. 50 (5), 523-527 (2003).</li>
<li>Buinewicz, B., Rosen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acellular+cadaveric+dermis+%28AlloDerm%29%3A+a+new+alternative+for+abdominal+hernia+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Plast+Surg%22%5BJournal%5D)">Acellular cadaveric dermis (AlloDerm): a new alternative for abdominal hernia repair.</a> Ann Plast Surg. 52 (2), 188-194 (2004).</li>
<li>Bringman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hernia+repair%3A+the+search+for+ideal+meshes%5BTitle%5D)+AND+%22Hernia%22%5BJournal%5D)">Hernia repair: the search for ideal meshes.</a> Hernia. 14 (1), 81-87 (2010).</li>
<li>Meintjes, J., Yan, S., Zhou, L., Zheng, S., Zheng, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+biological+and+composite+scaffolds+for+abdominal+wall+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+rev+of+med+dev%22%5BJournal%5D)">Synthetic biological and composite scaffolds for abdominal wall reconstruction.</a> Exp rev of med dev. 8 (2), 275-288 (2011).</li>
<li>Cheng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+blood+vessel+networks+connect+to+host+vasculature+via+wrapping-and-tapping+anastomosis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Engineered blood vessel networks connect to host vasculature via wrapping-and-tapping anastomosis.</a> Blood. 118 (17), 4740-4749 (2011).</li>
<li>Shandalov, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+engineered+muscle+flap+for+reconstruction+of+large+soft+tissue+defects%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS+of+the+USA%22%5BJournal%5D)">An engineered muscle flap for reconstruction of large soft tissue defects.</a> PNAS of the USA. 111 (16), 6010-6015 (2014).</li>
<li>Zhang, T. Y., Suen, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fast+parallel+algorithm+for+thinning+digital+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22Commun.+ACM%22%5BJournal%5D)">A fast parallel algorithm for thinning digital patterns.</a> Commun. ACM. 27 (3), 236-239 (1984).</li>
<li>Luna, L. G. AFIo Pathology. Manual of Histo Stain Meth ; of the Arm Forcs Inst of Path. Luna, L. G. , Blakiston Division, McGraw-Hill. (1968).</li>
<li>Choi, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue+engineering+for+soft+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+engineering.+Part+B%2C+Reviews%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue engineering for soft tissue regeneration.</a> Tissue engineering. Part B, Reviews. 16 (4), 413-426 (2010).</li>
<li>Bellows, C. F., Alder, A., Helton, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abdominal+wall+reconstruction+using+biological+tissue+grafts%3A+present+status+and+future+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+rev+of+med+dev%22%5BJournal%5D)">Abdominal wall reconstruction using biological tissue grafts: present status and future opportunities.</a> Exp rev of med dev. 3 (5), 657-675 (2006).</li>
<li>Caspi, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+of+vascularized+cardiac+muscle+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering of vascularized cardiac muscle from human embryonic stem cells.</a> Circ Res. 100 (2), 263-272 (2007).</li>
<li>Kaufman-Francis, K., Koffler, J., Weinberg, N., Dor, Y., Levenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+vascular+beds+provide+key+signals+to+pancreatic+hormone-producing+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Engineered vascular beds provide key signals to pancreatic hormone-producing cells.</a> PloS one. 7 (7), e40741(2012).</li>
<li>Kaully, T., Kaufman-Francis, K., Lesman, A., Levenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularization--the+conduit+to+viable+engineered+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Tiss+eng.+Part+B%2C+Reviews%22%5BJournal%5D)">Vascularization--the conduit to viable engineered tissues.</a> Tiss eng. Part B, Reviews. 15 (2), 159-169 (2009).</li>
<li>Koffler, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+vascular+organization+enhances+functional+integration+of+engineered+skeletal+muscle+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS+of+the+USA%22%5BJournal%5D)">Improved vascular organization enhances functional integration of engineered skeletal muscle grafts.</a> PNAS of the USA. 108 (36), 14789-14794 (2011).</li>
<li>Lesman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+a+tissue-engineered+human+vascularized+cardiac+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Tisseng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Transplantation of a tissue-engineered human vascularized cardiac muscle.</a> Tisseng. Part A. 16 (1), 115-125 (2010).</li>
<li>Levenberg, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+vascularized+skeletal+muscle+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Engineering vascularized skeletal muscle tissue.</a> Nat Biotechnol. 23 (7), 879-884 (2005).</li>
<li>Bearzi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PlGF-MMP9-engineered+iPS+cells+supported+on+a+PEG-fibrinogen+hydrogel+scaffold+possess+an+enhanced+capacity+to+repair+damaged+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+death+%26+disease%22%5BJournal%5D)">PlGF-MMP9-engineered iPS cells supported on a PEG-fibrinogen hydrogel scaffold possess an enhanced capacity to repair damaged myocardium.</a> Cell death & disease. 5, e1053(2014).</li>
<li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SDF-1+expression+by+mesenchymal+stem+cells+results+in+trophic+support+of+cardiac+myocytes+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J+%3A+official+publication+of+the+.Fed+Am+Soc+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">SDF-1 expression by mesenchymal stem cells results in trophic support of cardiac myocytes after myocardial infarction.</a> FASEB J : official publication of the .Fed Am Soc Exp Biol. 21 (12), 3197-3207 (2007).</li>
<li>Dvir, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevascularization+of+cardiac+patch+on+the+omentum+improves+its+therapeutic+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Prevascularization of cardiac patch on the omentum improves its therapeutic outcome.</a> PNAS. 106 (35), 14990-14995 (2009).</li>
<li>Marsano, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+controlled+expression+of+VEGF+by+transduced+myoblasts+in+a+cardiac+patch+on+vascularization+in+a+mouse+model+of+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The effect of controlled expression of VEGF by transduced myoblasts in a cardiac patch on vascularization in a mouse model of myocardial infarction.</a> Biomaterials. 34 (2), 393-401 (2013).</li>
<li>Rufaihah, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+infarct+stabilization+and+neovascularization+mediated+by+VEGF-loaded+PEGylated+fibrinogen+hydrogel+in+a+rodent+myocardial+infarction+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Enhanced infarct stabilization and neovascularization mediated by VEGF-loaded PEGylated fibrinogen hydrogel in a rodent myocardial infarction model.</a> Biomaterials. 34 (33), 8195-8202 (2013).</li>
<li>Nillesen, S. T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+angiogenesis+in+acellular+scaffolds+by+combined+release+of+FGF2+and+VEGF%5BTitle%5D)+AND+%22J+of+Contr+Release%22%5BJournal%5D)">Increased angiogenesis in acellular scaffolds by combined release of FGF2 and VEGF.</a> J of Contr Release. 116 (2), e88-e90 (2006).</li>
<li>Sekine, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+fabrication+of+functional+three-dimensional+tissues+with+perfusable+blood+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">In vitro fabrication of functional three-dimensional tissues with perfusable blood vessels.</a> Nat Commun. 4, 1399(2013).</li>
<li>Tee, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+engineered+cardiac+muscle+flaps+in+syngeneic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Tiss+eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Transplantation of engineered cardiac muscle flaps in syngeneic rats.</a> Tiss eng. Part A. (19-20), 1992-1999 (2012).</li>
<li>Morritt, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+tissue+engineering+in+an+in+vivo+vascularized+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cardiac tissue engineering in an in vivo vascularized chamber.</a> Circulation. 115 (3), 353-360 (2007).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Doku mühendisliği alanındaki ilerlemeler, çeşitli doku tiplerinin yeniden inşası için yedek dokular için büyüyen bir talep ile karşılandı. 1,17,18, sentetik ve biyolojik 14-16 malzeme olarak hem de üretim yöntemlerinin çeşitliliği, bu talepleri karşılamak için kapasiteleri açısından değerlendirilmiştir. Ancak, klinik bakım ve doku mühendisliği gelişmelere rağmen, tam kalınlıkta karın duvarı defektleri restorasyonu bir sorun olmaya devam etmektedir. Bu tür kitlesel defektlerinin rekonstrüksiyonu içi...

Karın duvarı defektleri sıklıkla şiddetli travma, kanser tedavisi, yanık ve enfekte mesh çıkarılmasını takiben ortaya çıkar. Bu kusurlar genellikle komplike cerrahi girişimler gerektiren ve plastik rekonstrüksiyon cerrahlar 1-4 için büyük bir meydan okuma sunan, önemli doku kaybı içerir. Yapay dokular için yeni kaynaklar arayan Doku mühendisliği araştırmacılar farklı malzemeler, hücre kaynakları ve büyüme faktörleri incelemiş bulunuyoruz. Bu tür işlenmiş dokular implantasyonu ile trakea 5,6, mesane 7, kornea 8, kemik 9 ve cilt 10, çeşitli dokuların başarılı restorasyonu daha önce rapor edilmiştir. Ancak, kalın damarlı mühendislik dokusunun fabrikasyon özellikle büyük defektlerinin rekonstrüksiyonu için, doku mühendisliğinde önemli bir sorun olmaya devam etmektedir. Bir canlı doku yapısının kalınlığını sınırlayan en önemli faktörlerden biri de eksilerini oksijen kaynağı kontrolünü olantituent hücreleri. Difüzyon dayanarak zaman, kalınlığı çok ince bir tabaka bu sınırlıdır oluştururlar. , Oksijen ve in vivo besin tedarik kılcal damarların arasındaki maksimum mesafe oksijen 11,12 difüzyon sınırı ile bağlantılı olan, yaklaşık 200 mm. Yetersiz vaskülarizasyon doku iskemisi neden ve doku rezorpsiyonu veya nekroz 13 kadar varabilmektedir. Buna ek olarak, doku onarımı için kullanılan ideal malzeme, biyolojik uyumlu ve immünojenik olmayan olmalıdır. Ayrıca, biyo ev sahibi hücrelerin daha da entegrasronu ve yapısal bütünlüğünü muhafaza kapasitesine sahip olmalıdır. Çeşitli biyolojik 14-16 ve sentetik 1,17,18 matrisler önce ancak bunların kullanımı etkili kan temini, enfeksiyonlara veya yetersiz doku gücü eksikliği nedeniyle sınırlı kalmaktadır, doku rekonstrüksiyonu için araştırılmıştır. Bu çalışmada, biyolojik olarak uyumlu, hücre embGıda ve İlaç İdaresi (FDA) onaylı poli-L-laktik asit (PLLA) / laktik-ko-glikolik asit (PLGA), poli, oluşan gömülmüştür skafold çıplak farenin femoral arter ve ven (AV) damarların etrafında yerleştirildi ve Sadece AV Gemilerden damarlanmayı sağlanması, çevre dokuya ayrılmış. Bir hafta implantasyon sonrası, greft, canlı, kalın ve iyi vaskülarize oldu. AV damarları ile bu kalın vaskülarize doku, daha sonra aynı fare bir karın tam kat defekt pediküllü flep olarak aktarıldı. Bir hafta sonrası transferi, flep, canlı damarlı ve iyi karın iç organları desteklemek için yeterli gücü taşıyan, çevre doku ile entegre oldu. Böylece, otolog pedikül taşıyan mühendislik kalın, damarlı doku flep, tam kat karın duvarı defektleri onarmak için yeni bir yöntem sunuyor.

<table><tbody><tr><td>küçük ince düz makas</td><td>Güzel Bilim Araçları (FST)</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>yaylı makas</td><td>Güzel Bilim Araçları (FST)</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>ince uçlu düz forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları (FST)</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>tırtıklı forseps&nbsp;</td><td>Güzel Bilim Araçları (FST)</td><td>11050-10</td><td></td></tr><tr><td>iğne tutucu</td><td>Güzel Bilim Araçları (FST)</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>Küçük damar koterizatörü ve nbsp;</td><td>Güzel Bilim Araçları (FST)</td><td>18000-00</td><td></td></tr><tr><td>Duratears</td><td>Alcon</td><td>5686</td><td></td></tr><tr><td>Sedaxylan</td><td>Euravet</td><td>DJ03</td><td></td></tr><tr><td>Clorketam 1000</td><td>Vetoquinol</td><td>4A0726B</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfin</td><td>vetmarket</td><td>B15100</td><td></td></tr><tr><td>4-0 ipek sütürler</td><td>Assut sütürler</td><td>647</td><td></td></tr><tr><td>6-0 polipropilen sütürler</td><td>Assut sütürler</td><td>9351F</td><td></td></tr><tr><td>8-0 ipek sütürler</td><td>Assut sütürler</td><td>684568</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin şırıngası (6 mm iğne)</td><td>BD</td><td>324911</td><td></td></tr><tr><td>Vevo 2100 yüksek çözünürlüklü ultrason sistemi</td><td>VisualSonics inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MS250 doğrusal olmayan dönüştürücü</td><td>VisualSonics inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikro işaretleyici hedeflenmemiş kontrast madde</td><td>VisualSonics inc.</td><td>VS-11694</td><td></td></tr><tr><td>kuyruk ven kateteri</td><td>VisualSonics inc.</td><td>VS-11912</td><td></td></tr><tr><td>Vevo 2100 yazılımı</td><td>VisualSonics inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>floresein izotiyosiyanat konjuge dekstran</td><td>Sigma</td><td>FD500S</td><td></td></tr><tr><td>Matlab</td><td>Mathworks, MA, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimtech</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>antijen maskeleme çözeltisi</td><td>Vektör laboratuvarları</td><td>H-3300</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD31 antikoru</td><td>Abcam&nbsp;</td><td>ab28364</td><td></td></tr><tr><td>biyotinile keçi anti-tavşan (ikincil) antikor</td><td>Vektör laboratuvarları</td><td>BA-1000</td><td></td></tr><tr><td>streptavidin-peroksidaz</td><td>Jackson&nbsp;</td><td>016-030-084</td><td></td></tr><tr><td>Mayer'in hamatoksilen çözeltisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MHS-16</td><td></td></tr><tr><td>aminoetilkarbazol (AEC) substrat kiti</td><td>Yaşam teknolojileri, Invitrogen&nbsp;</td><td>00-2007</td><td></td></tr><tr><td>Vectamount</td><td>Vektör laboratuvarları</td><td>H-5501</td><td></td></tr></tbody></table>

engineered vaskülarize muscle flap

Engineered Vascularized Muscle Flap

Bir doku yapısının kalınlığını ve bunun sonucunda in vivo olarak yaşayabilirliğini ve uygulanabilirliğini sınırlayan ana faktörlerden biri, pasif difüzyon çok ince bir tabaka ile sınırlı olduğundan, hücre mikro çevresine oksijen tedarikinin kontrolüdür. Karın duvarının tam kat defektlerinin bütünlüğünü eski haline getirmek için çeşitli materyaller tanımlanmış olsa da, düşük greft vaskülarizasyonu, doku reddi, enfeksiyon veya yetersiz mekanik özellikler nedeniyle hiçbir materyalin optimal olduğu henüz kanıtlanmamıştır. Bu protokol, kas dokusunun rekonstrüksiyonu için uygun bir kalınlığa sahip, tamamen vaskülarize bir flep mühendisliğinin bir yolunu tanımlar. Hücreye gömülü poli L-laktik asit / poli laktik-ko-glikolik asit yapıları, fare femoral arteri ve damarı etrafına implante edilir ve bir veya iki haftalık bir süre boyunca in vivo olarak tutulur. Vaskülarize greft daha sonra karın içinde yapılan tam kalınlıktaki bir defekte doğru bir flep olarak transfer edilir. Bu teknik, otolog doku sakrisyonlarına olan ihtiyacın yerini alır ve birçok cerrahi uygulamada in vitro olarak tasarlanmış vaskülarize fleplerin kullanılmasını sağlayabilir.

In vivo Greft damarlanma ve perfüzyon Greftler önce eksenel flep olarak transfer bir ya da iki hafta implante edildi. Bir ve iki hafta sonrası implantasyon anda, greft alanının brüt gözlem canlı ve vaskülarize doku greft saptandı. Pozitif CD31 immün (Şekil 1A) ile tespit ve son derece perfüze FITC-dekstran kuyruk damarından enjeksiyon ve ultrason ölçümleri ile kanıtlandığı gibi, bu greftler, oldukça yüksek oranda damarlanmış kanıtladı. Birçok gemiler zaten bir hafta...

Bugüne kadar, kalın doku defektleri tipik olarak otolog doku flepleri veya mühendislik dokuları uygulanarak yeniden yapılandırılır. Bu protokolde, otolog fleplerin yerine geçecek şekilde otolog pediküllü vaskülarize doku flebi mühendisliği için yeni bir yöntem sunuyoruz.

Engineered Vaskülarize Muscle Flap

One of the main factors limiting the thickness of a tissue construct and its consequential viability and applicability in vivo, is the control of oxygen ...

Bu prosedürün genel amacı, tam kat abdominal duvar defektlerinin rekonstrüksiyonunda kullanılmak üzere iyi vaskülarize olmuş bir doku flebi oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle biyobozunur bir polilaktik asit polilaktik-ko-glikolik asit iskele hazırlanarak gerçekleştirilir. Ardından, endotel hücreleri, kas hücreleri ve fibroblastlar ekilir ve hücrelerin kendi kendine organize olmasına izin vermek için greft in vitro ortamda kültüre edilir.Ardından, mühendislik ürünü doku farenin femoral arteri ve venleri çevresine implante edilir; burada konak damarlarıyla anastomoz gerçekleşir ve doku yüksek düzeyde vaskülarize olur. Son olarak doku, saplı flep şeklinde tam kat karın duvarı defektine transfer edilir. Nihayetinde, greft vaskülarizasyonu ultrason, T dekstran enjeksiyonu ve CD31 için immünboyama ile kanıtlanır ve flep sertliği biyodinamik bir test cihazı kullanılarak incelenir.Bunun mevcut yöntemlere göre temel avantajları, daha düşük donör bölge morbiditesi ve tam kat yumuşak doku yapımında kullanılabilecek mühendislik ürünü flebin yüksek canlılığıdır. Bu yöntem, tam kat abdominal duvar defektleri olan hastalara yardımcı olabilir. Prosedürün gösterimi, laboratuvarımla iş birliği içinde çalışan plastik cerrah Dr. Dana Egozi tarafından gerçekleştirilecek ve Anina Freimann ona yardımcı olacaktır.Metin protokolüne uygun olarak iskeleler hazırlandıktan ve hücreler gömüldükten sonra aşağıdaki cerrahi aletleri otoklavlayın: küçük ince düz makas, yaylı makas, düz ince uçlu pens, tırtıklı pens, Hudson pens, iğne tutucu ve 15 numara bistüri ucu. Bir mikrosantrifüj tüpünde 425 µL ketamin ve 75 µL silodsin karışımı hazırlayıp bir şırıngaya aktarın. Ardından, 0,3 mg/mL buprenorphine çözeltisini steril salin ile 1'e 20 oranında seyreltin.Fareyi metin protokolüne uygun şekilde anestezi altına aldıktan sonra, normal vücut sıcaklığını korumak için 37 °C'ye ısıtılmış bir sahneye yerleştirin ve sahneye sabitlemek için yapışkanlı bir bandaj kullanın. Aseptik bir çalışma alanı oluşturmak için, insizyon bölgesini önce iyot ardından %70 etanol kullanarak pamuklu çubuklarla temizleyin. Sedasyon düzeyini doğruladıktan sonra, femoral arter ve ven damarları açığa çıkana kadar, dizden inguinal ligamente kadar femoral damarlara paralel olacak şekilde cilt üzerinden insizyonlar yapmak için bir skalpel kullanın.Cildi sabit tutmak için klipsler veya iğneler kullanın. Ardından, yaylı makas ve pensler yardımıyla, profunda altındaki ve tibial ile peroneal AV bifurkasyonunun üstündeki femoral AV'den başlayarak, femoral arter ve ven damarlarını çevre dokulardan dikkatlice izole edin. Bacağa giden kan akışını korumak ve sonrasında iskemiyi önlemek için profunda damarına dokunmayın.Ardından, daha önce hazırlanan grefti, profunda arterin altında ve tibial ile peroneal AV bifurkasyonunun üzerinde kalan açık femoral AV çevresine katlayın ve uçlarını birleştirmek için 8-0 ipek sütürler kullanın. İmplantın yalnızca femoral AV damarlarından çıkan kılcal damarlar aracılığıyla vaskülarize olmasını sağlamak için, greftin altına sterilize edilmiş bir lateks parçası yerleştirin, ardından bunu greft ve sütür çevresine sararak 6-0 ipek ile dikin. Son olarak, üzerindeki cildi kapatmak için 4-0 ipek sütürler kullanın.İki ila üç gün boyunca günde iki kez deri altına bupreorfin enjekte edin. Fareyi anestezi sonrası iyileşme sürecine kadar ve sonrasında greft bir flep olarak transfer edilene kadar her gün yakından izleyin. İmplantasyondan bir ila iki hafta sonra, fareyi anestezi altına aldıktan sonra hayvanı ısıtmalı sahneye yerleştirin ve sabitleyin.Bu videoda daha önce gösterildiği gibi insizyon bölgesi temizlendikten sonra, deri üzerindeki sütürleri dikkatlice açmak için makas ve pens kullanın ve bir skalpel ile inguinal ligamente dik olacak şekilde deri üzerinde bir insizyon yaparak ventral deri boyunca devam edin. Bir skalpel kullanarak ventral abdominal duvarda bir insizyon yapın. Lateks parçayı dikkatlice çıkarın ve vaskülarize flebi açığa çıkarın.Ardından makas ve forseps yardımıyla, doku flebini çevre dokulardan ayırın. AV'den kaynaklanan kanamayı önlemek için femoral AV'nin distal ucunu 8-0 ipek sütur ile ligasyon yapın. Daha sonra, implante edilen katlanmış dokunun ve 8-0 süturların distalinde, diz seviyesindeki AV'yi koterize edin. Tam kat defektin hangi mesafede oluşturulacağını belirlemek için, artere zarar vermemeye dikkat ederek, greft ile sarılı femoral AV'yi ventral abdominal duvara doğru nazikçe transfer edin.Yaylı makas kullanarak rectus abdominis kasında bir insizyon yapın ve kasın yaklaşık bir santimetreye 0,8 santimetre boyutundaki bir segmentini üzerindeki deriyle birlikte çıkarın. Vaskülarize greft ile çevrelenmiş femoral AV'yi, fıtığı önlemek için 8-0 ipek sütürler kullanarak ventral abdominal duvarındaki tam kat defekte aksiyal flep olarak transfer edin. Flebi çevre kas dokusuna sütüre edin.Ardından, 4-0 ipek sütürlerle bacak derisini dikin. Tam bir karın duvarı defektinin etkisini taklit etmek için ventral deriyi açık bırakın. Açık kalan bölgenin kontamine olmasını önlemek için yara üzerindeki deriyi iyotlu gaz ve steril bir bandajla kapatın.Buprenorfinle uygulama, bu videoda daha önce açıklandığı şekilde gerçekleştirin. Hayvanı, anesteziden uyanana kadar ve metin protokolünde belirtilen çalışmalar için flep iyileşene kadar sonraki her gün yakından izleyin. İmplantasyon sonrası birinci ve ikinci haftalarda, greft bölgesinin makroskobik gözlemi, pozitif CD31 immünboyama ile belirlendiği üzere canlı ve yüksek derecede vaskülarize doku greftlerini ortaya koymuştur.FITC-dekstran kuyruk ven enjeksiyonu ve ultrason ölçümleriyle görüldüğü üzere, doku greftleri ayrıca yüksek düzeyde perfüzyona sahipti. Bu grafik, implantasyondan bir hafta sonra birçok damarın zaten gözlemlendiğini ve bu sayının AV damarları civarında ek bir haftadan sonra önemli ölçüde arttığını göstermektedir. Burada görüldüğü gibi, greft implantasyonu sonrası femoral sonrası açıklık ve bütünlük, renkli Doppler modundaki ultrason görüntüleme ile doğrulanmıştır.Mavi ve kırmızı renkler grafttaki kan akışını temsil etmektedir. Ayrıca, ultrasonik grafik inceleme graft alanı içinde bir perfüzyon olduğunu ortaya çıkarmış olup, bu perfüzyon implantasyon sonrası dönemde, bir haftalık süreye kıyasla biraz daha yüksek seyretmiştir. Transferden bir hafta sonra fleplerin makroskobik incelemesi, çevre dokulara sıkı bir şekilde tutunduklarını göstermiştir.Pre-vaskülarize hücre gömülü flepler ile kontrol grubu olarak kullanılan aselüler non-vaskülarize greftler karşılaştırıldığında, ilk grubun sertlik ve dayanıklılık dahil olmak üzere daha üstün mekanik özellikler gösterdiği, bunun da daha az dehissens ve herniasyon ile sonuçlandığı görülmüştür. Uzmanlaşıldığında, bu teknik uygun şekilde uygulandığı takdirde yaklaşık 30 dakikada tamamlanabilir. Geliştirilmesinin ardından bu teknik, plastik cerrahların tam kat abdominal duvar defekti olan hastaların yanı sıra diğer karmaşık ve önemli yumuşak doku defektleri olan hastaları tedavi etmelerinin önünü açmaktadır.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Vaskülarize Kompozit allotrans (VCA) klinik bir gerçeklik haline gelmiştir. Bununla birlikte, VCA geniş klinik uygulama kronik çoklu ilaç bağışıklık bastırılması ile sınırlıdır. Yazarlar, en aza indirmek veya potansiyel olarak VCA bağışıklık ihtiyacı ortadan kaldırabilir, yeni bağışıklık stratejileri çevirmek için güvenilir ve yeniden üretilebilir bir büyük hayvan modeli sunar.

Translational Vaskülarize Kompozit allotransplantasyon (VCA) Araştırma için Modifiye heterotopik Domuz Hind Ekstremite nakli Modeli

Burada, biz çift tohumlama kısmen uyarılmış pluripotent kök hücre ile farelere aşılama için fonksiyonel doku mühendisliği gemi greft oluşturmak için bir protokol mevcut (PiPSC) - Bir decellularized damar iskele biyoreaktör üzerinde elde edilen endotel hücreleri - düz kas hücreleri ve PiPSC türetilmiş.

Bir Fare Modeli Doku mühendisliği Kapların Üretimi ve Tırnak

Bu, bir doku mühendisliği odası içinde mikrocerrahi arteriyovenöz döngü veya akışlı bir pedikül konfigürasyonu kullanarak in vivo vaskülarize doku oluşturmak için bir kılavuzdur. Üretilen vaskülarize dokular, organ rejenerasyonu ve doku defektlerinin değiştirilmesinin yanı sıra ilaç testi ve hastalık modellemesi için de kullanılabilir.

Bir ıntrinsic Vaskülarizasyon tarafından Doku Mühendisliği<em&gt; İn Vivo</em&gt; Doku Mühendisliği Odası

Bu makale, sıçanlarda fasyokutanöz epigastrik serbest flebi kaldırmak ve boynuna aktarmak için gereken adımları açıklamaktadır.

Ücretsiz Doku Transferi Modeli: Sıçan Epigastrik Serbest Flep

Burada domuz üstün epigastrik arter perforator flap baş ve boyun mikrovasküler yeniden inşası için bir öğrenme modülü olarak kullanmak için bir iletişim kuralı mevcut.

Baş ve boyun mikrovasküler rekonstrüksiyon için bir eğitim modülü olarak domuz

Vascularized kompozit allogreft, nakil alıcılarına yaşam değiştiren avantajlar sunar, ancak greft reddi ve vaskas patasının biyolojik nedenleri kötü anlaşılmalıdır. Burada sunulan kemirgen cerrahi modeli reproducible, klinik olarak ilgili transplantasyon modeli sunar ve araştırmacılar reddedilme olaylarını ve olası terapötik stratejileri kendi oluşumunu önlemek için değerlendirmelerine izin verir.

Translasyonel vaskülarize kompozit allotransplantasyon araştırmaları için Rat 'ta değiştirilmiş heterotopik Hindekstremite Osteomokutanöz Flap modeli

Bu protokol domuz fasyo-kutanöz flep modelini ve vaskülarize kompozit doku araştırmalarında potansiyel kullanımını tanımlamaktadır.

Vaskülarize Kompozit Allogreftler Biyomühendislik Çalışmaları için Güvenilir Bir Domuz Fasyo-Kutanöz Flap Modeli

Tasarlanmış flepler, dahil edilmiş bir fonksiyonel vasküler ağ gerektirir. Bu protokolde, hiyerarşik vasküler ağ ve onun doğrudan mikrocerrahi anastomozlarını sıçan femoral arterine içeren 3D baskılı bir doku flebi üretme yöntemini sunuyoruz.

3D Baskı Teknolojileri Kullanılarak Mühendislik Vasküler Flaplarının İmalatı

Protokol, özelleştirilmiş bir perfüzyon biyoreaktöründe flep vaskülatürü boyunca sodyum dodesil sülfat deterjanının perfüzyonu ile vaskülarize domuz fleplerinin cerrahi tedarikini ve ardından desellülarizasyonunu açıklamaktadır.

Özelleştirilmiş Perfüzyon Biyoreaktöründe Domuz Vaskülarize Fleplerinin Tedariği ve Perfüzyon-Desellülarizasyonu

Bu protokol, deneysel araştırmalar için tasarlanan derin inferior epigastrik arter pedikulu temelinde insan perforatör flep modelinin toplanma cerrahi tekniğini açıklar.

Vaskülerize Kompozit Allograftlar ve Serbest Flepler için Koruma Stratejilerini Araştırmak İçin Deneysel İnsan DIEP Flep Modeli

Keşfedin, tam katmanlı karın duvarı defektlerinin rekonstrüksiyonu için mühendislikle üretilmiş vaskülarize kas flebi yöntemini. Biyobozunur iskelet üzerinde hücre ekimi ve fare modelinde anastomoz ile yüksek canlılık sağlanır.

Engineered Vaskülarize Muscle Flap

Daha fazla video keşfet