Engineered Vaskülarize Muscle Flap

Bugüne kadar, kalın doku defektleri tipik olarak otolog doku flepleri veya mühendislik dokuları uygulanarak yeniden yapılandırılır. Bu protokolde, otolog fleplerin yerine geçecek şekilde otolog pediküllü vaskülarize doku flebi mühendisliği için yeni bir yöntem sunuyoruz.

Bu prosedürün genel amacı, tam kat karın duvarı defektlerinin rekonstrüksiyonu için kullanılacak iyi vaskülarize bir doku flebi oluşturmaktır. Bu, önce biyolojik olarak parçalanabilen bir polilaktik asit poli laktik-ko-glikolik asit iskelesi hazırlanarak gerçekleştirilir. Daha sonra, endotel hücreleri, kas hücreleri ve fibroblastlar tohumlanır ve greft, hücrelerin kendi kendine birleşmesine izin vermek için in vitro olarak kültürlenir.

Daha sonra tasarlanan doku, farenin femoral arteri ve damarları etrafına implante edilir, burada konakçı damarlarla anastimoza uğrar ve oldukça vaskülarize hale gelir. Son olarak, doku pediküllü flep olarak tam kat karın duvarı defektine aktarılır. Sonuç olarak, greft vaskülarizasyonu ultrason, T dekstran enjeksiyonu ve CD31 için immün boyama ile kanıtlanmıştır ve flep sertliği bir biyodinamik test cihazı kullanılarak incelenmiştir.

Bunun mevcut yöntemlere göre başlıca avantajları, daha düşük donör bölge hareketliliği ve tam kalınlıkta yumuşak dokuların inşası için kullanılabilen tasarlanmış flebin yüksek uygulanabilirliğidir. Bu yöntem, tam kalınlıkta karın duvarı defektleri olan hastalarda yardımcı olabilir. Prosedürün gösterilmesi, laboratuvarımla işbirliği içinde çalışan bir plastik cerrah olan Dr.Dana Egozi tarafından yapılacak ve Anina Freimann ona yardımcı olacak.

İskeleleri hazırladıktan ve hücreleri metin protokolüne göre gömdükten sonra, aşağıdaki cerrahi aletleri otoklavlayın: küçük ince düz bir makas, bir yaylı makas, düz ince uçlu bir forseps, tırtıklı bir forseps, Hudson forseps, bir iğne tutucu ve bir 15 numara bıçak neşteri. Bir mikrosantrifüj tüpünde 425 mikrolitre ketamin ve 75 mikrolitre silodsin karışımı hazırlayın ve bir şırıngaya aktarın. Daha sonra steril tuzlu su içinde mililitre buprenorfin başına 0.3 miligram bir ila 20

Fareyi metin protokolüne göre uyuşturduktan sonra, bir sahneye yerleştirin, normal vücut ısısını korumak için 37 santigrat dereceye ısıtın ve sahneye sabitlemek için yapışkan bir bandaj kullanın. Pamuk uçlarıyla, aseptik bir çalışma alanı oluşturmak için insizyon bölgesini temizlemek için iyot ve ardından %70 etanol kullanın. Sedasyon seviyesini doğruladıktan sonra, femoral arter ve ven damarları açığa çıkana kadar dizden kasık bağına femoral damarlara paralel olarak deriden kesiler yapmak için bir neşter kullanın.

Cildi tutmak için klips veya iğne kullanın. Daha sonra, yaylı makas ve forseps kullanarak, profunda'nın altındaki femoral AV'den başlayarak ve bifurkasyonun üstünden tibial ve peroneal AV'ye kadar, femoral arter ve ven damarlarını çevre dokudan dikkatlice izole edin. Bacağına giden kan akışını korumak ve sonraki diskemiyi önlemek için profunda'yı el değmeden bırakın.

Daha sonra, önceden hazırlanmış grefti açıkta kalan femoral AV'nin etrafına profunda'nın altına ve bifurkasyonun üzerine tibial ve proneal AV'ye katlayın ve 8-0 kullanın uçlarını birleştirmek için ipek dikişler. Sadece femoral AV damarlarından filizlenen kılcal damarlar tarafından implant vaskülarizasyonunu sağlamak için, greftin altına bir parça sterilize lateks koyun ve ardından 6-0 ipek kullanarak greft ve dikişin etrafına sarın. Daha sonra üstteki cildi kapatmak için 4-0 ipek dikişler kullanın.

Deri altından iki ila üç gün boyunca günde iki kez bupreorfin enjekte edin. Anesteziden iyileşene kadar fareyi yakından izleyin ve daha sonra greft bir flep olarak transfer edilene kadar her gün izleyin. İmplantasyondan bir ila iki hafta sonra, fareyi uyuşturduktan sonra, hayvanı ısıtılmış sahneye yerleştirin ve sabitleyin.

Bu videoda daha önce gösterildiği gibi kesi bölgesini temizledikten sonra, ciltteki dikişleri dikkatlice açmak için makas ve forseps kullanın ve bir neşter ile ventral cilt boyunca devam ederek kasık ligamentine dik olarak cilde bir kesi yapın. Bir neşter kullanarak, ventral karın duvarında bir kesi yapın. Lateks parçasını dikkatlice çıkarın ve vaskülarize flebi ortaya çıkarın.

Daha sonra makas ve forseps ile doku flebini çevreleyen dokudan ayırın. 8-0 ile ipek sütür, AV'den kanamayı önlemek için femoral AV'nin distal ucunu bağlar. Daha sonra AV'yi dizde, katlanmış implante edilmiş dokunun distalinde koterize edin ve 8-0 Dikiş. Greft tarafından sarılan femoral AV'yi, tam kalınlıktaki defektin hangi mesafede yapılması gerektiğini belirlemek için artere zarar vermekten kaçınarak ventral karın duvarına doğru nazikçe aktarın.

Yaylı makasla, rektus abdominis kasında bir kesi yapın ve kasın yaklaşık bir santimetreye 0,8 santimetrelik bir segmentini üstteki deri ile çıkarın. Vaskülarize greft tarafından sarılan femoral AV'yi eksenel bir flep olarak ventral karın duvarındaki tam kalınlıktaki defekte 8-0 kullanarak aktarın fıtığı önlemek için ipek dikişler. Flebi çevreleyen kas dokusuna dikin.

Daha sonra 4-0 ipek ile bacağın derisini dikin. Tam bir karın duvarı defektinin etkisini taklit etmek için ventral cildi açıkta bırakın. İyotlu gazlı bez ve steril bir bandajla, maruz kalan alanın kirlenmesini önlemek için ciltteki yarayı örtün.

Buprenorfini bu videoda daha önce anlatıldığı gibi uygulayın. Anesteziden iyileşene kadar hayvanı yakından izleyin ve daha sonra metin protokolünde belirtilen çalışmalar için flebin iyileşmesine kadar her gün izleyin. İmplantasyondan bir ve iki hafta sonra, greft alanının brüt gözlemi, pozitif CD31 immün boyama ile belirlendiği gibi canlı ve yüksek derecede vaskülarize doku greftlerini ortaya çıkardı.

Doku greftleri ayrıca FITC-dekstran kuyruk veni enjeksiyonu ve ultrason ölçümlerinde görüldüğü gibi yüksek oranda perfüze edildi. Bu grafik, implantasyondan bir hafta sonra birçok damarın zaten gözlemlendiğini ve AV damarlarının yakınında ek bir hafta sonra önemli ölçüde artmış bir sayı olduğunu göstermektedir. Burada görüldüğü gibi, greft implantasyonu sonrası femoral açıklık ve bütünlük, renkli Doppler modunda ultrason görüntüleme ile doğrulandı.

Mavi ve kırmızı, greftteki kan akışını temsil eder. Ayrıca, ultrasonik grafik muayene, greft alanı içinde perfüzyon olduğunu ortaya çıkardı, bu da implantasyon sonrası bir haftaya kıyasla biraz daha yüksekti. Transferden bir hafta sonra fleplerin ayrıntılı muayenesi, çevrelerine sıkı bir şekilde bağlandıklarını ortaya çıkardı.

Pre-vaskülarize hücre gömülü flepler karşılaştırıldığında, kontrol aselüler vaskülarize olmayan greftler, birincisi sertlik ve mukavemet dahil olmak üzere üstün mekanik özellikler gösterdi ve bu da daha az ayrışma ve fıtıklaşma ile sonuçlandı. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa yaklaşık 30 dakika içinde yapılabilir. Geliştirildikten sonra, bu teknik, plastik cerrahların tam kalınlıkta karın duvarı defektinin yanı sıra diğer karmaşık ve önemli yumuşak doku kusurlarından muzdarip hastaları tedavi etmesinin yolunu açar.