Pulpa Değerlendirilmesi için Doğrudan Selüloz-kapatma Modelinin Geliştirilmesi Yara İyileşmesi ve Farelerde Onarım dentin oluşumu

Bu protokolün genel amacı, farelerde doğrudan pulpa kapatma prosedürünü sunmaktır. Bu yöntem, pulpanın nasıl iyileştiği veya açıkta kalan pulpa üzerine sıkışmış pulpa kaplama materyalleri yerleştirdiğinizde pulpanın nasıl oluştuğu gibi pulpa biyolojisindeki temel soruları yanıtlamanıza yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, insanlarda gerçekleştirilen gerçek doğrudan pulpa kapatma prosedürünün farelerde de aynı şekilde yapılabilmesidir.

Bu tekniğin sonuçları, aksi takdirde kanal tedavisi gibi daha invaziv tedavilere mahkum olan dişleri kurtarmak için malzeme özelliklerinin iyileştirilmesine kadar uzanır. Prosedür için fareyi uygun şekilde uyuşturduktan sonra, ağız tutucuyu ağzına yerleştirin ve diğer ucunu baş yukarı bakacak şekilde masaya sabitleyin. İyi bir aydınlatma ve stereoskop kullanarak ilk maksiller azı dişini gözlemleyin.

Daha sonra, 200.000 rpm'de yüksek hızlı bir el aletinde çeyrek yuvarlak frez kullanarak, pulpa şeffaf dentinden görünene kadar diş minesinin merkezi bölgesini çıkarın. Hamurun içine girmemesine dikkat edin. Ardından, hayır kullanarak.

15 Endodontik K-eğesi, dentinden delinir ve pulpayı açığa çıkarır. Hamurun içine herhangi bir kalıntı itmeyin; Bu, K dosyasını üç ayda bir döndürerek ve ardından K dosyasını dışarı çekerek önlenebilir. Şimdi, MTA'yı hazırlayın ve kaşifi kullanarak MTA'yı teslim edin, ardından kağıt ucunun arka tarafını ve hafifçe vurarak açıkta kalan bölgeye paketleyin.

Daha sonra,% 35 fosforik asit aşındırıcı yüklü bir şırınga kullanarak, dişeti dokularından kaçınarak dişi aşındırıcı ile örtün ve aşındırıcının 15 saniye çalışmasına izin verin. 15 saniye sonra, dişten aşındırıcıyı emdirin ve kalan aşındırıcıyı silmek için suyla nemlendirilmiş bir pamuklu aplikatör kullanın. Tüm aşındırıcılar çıkarılana kadar emdirin ve silin.

Ardından, kağıt ucunun arka tarafını kullanarak diş yapıştırıcılarını uygulayın. Yapışkan tabakayı birkaç saniye basınçlı hava ile üfleyerek ince hale getirin. Daha sonra yapıştırıcıyı uygun ışıkla 30 saniye kürleyin.

Şimdi, kompoziti diş oluklarına akıtmak için kaşifin ucunu kullanarak dişin üzerine küçük miktarlarda kompozit yerleştirin. Uygulandıktan sonra, kompoziti 30 saniye boyunca sertleştirin. Fareyi ötenazi yaptıktan ve tüm maksillayı çıkardıktan sonra, çeneyi pH 7.4'te PBS'de% 4 paraformaldehite yerleştirin.

Dokuyu gece boyunca 4 santigrat derecede tutun ve ertesi sabah, işlenene kadar saklamak için% 70 etanole aktarın. Maksillanın mikro BT taramasını yapmak için önce %70 etanol ile ıslatılmış gazlı beze sabitleyin, ardından 15 mililitrelik bir hücre kültürü tüpüne koyun. Ardından tüpü mikro CT tarama aşamasına monte edin.

Ardından, x-ışını kaynağını 145 milisaniye boyunca 55 tepe kilovolt ile 200 mikroamper akım sağlayacak şekilde ayarlayın. 0,5 milimetre alüminyum filtre kullanarak 20 mikron çözünürlükte görüntüler elde edin. Taramalar tamamlandıktan sonra, PBS'de %5 EDTA ve %4 sükroz ile maksillayı 7.4 pH değerinde kireçten arındırmaya başlayın.

Bu reaksiyonun 4 santigrat derecede iki hafta sürmesine izin verin. Maksillayı gömdükten sonra beş mikron kalınlığında dilimler yapın. Pulpa kaplama alanları genellikle bir dönüm noktası olarak kullanılabilen distal damak kökü ile çakışır.

Işık mikroskobu altında histolojiyi inceleyerek ve sonuçları mikro BT taramalarıyla karşılaştırarak kesin ilgi alanını belirleyin. H & E boyama için, parafini çıkarın ve slaytları her biri birkaç dakika boyunca ksilen içinde iki banyo ile yeniden sulandırın. Daha sonra bunları bir dizi seri olarak seyreltilmiş etanolden geçirin.

Her banyo sadece bir dakika boyunca uygulanmalıdır. Rehidrasyonu bir durulama ile takip edin. Ve sonra hemotoksilin çözeltisini iki buçuk dakika boyunca uygulayın.

Boyayı durulama ile çıkarın ve ardından slaytları bir dakika boyunca% 95 etanol içine koyun. Daha sonra, slaytları bir dakika boyunca eozin çözeltisiyle boyayın ve ardından durulayın. Etanol ile başlayarak lekeli dokuları kurutmak için hidrasyon adımlarını tersine çevirin.

Ardından, onlara ksilen ile muamele edin. Slaytlar daha sonra monte edilebilir ve görüntülenebilir. Açıklanan prosedürler kullanılarak, 8 haftalık farelerde pulpa kapatma işlemi yapıldı.

Altı hafta sonra maksillaları alındı ve incelendi. İlginç bir şekilde, H&E boyaması, pulpa odası ve kök kanalları boyunca dentin oluşumunu ortaya çıkardı. Karşılaştırmalı olarak, kapaksız azı dişi aynı dentin oluşumunu göstermedi.

Kapaklı azı dişinde, hem dentin tübülleri hem de onarıcı dentinde osteositler bulunduğundan, hem dentin benzeri hem de kemik benzeri oluşum özellikleri vardı, bu da yaralı pulpanın hem yerleşik odontoblastlar hem de göç etmiş osteoblastlar tarafından mineralize edilebileceğini düşündürdü. DMP1 immünohistokimyasal boyamanın kullanılması, onarıcı dentin oluşturan hücrelerin aktivitelerinin arttığını daha da doğruladı. Tıpkı gerçek diş kliniği uygulamalarında olduğu gibi, bir asistana sahip olmak son derece faydalıdır.

Örneğin, bir asistanla, bu teknik, ustalaştıktan sonra sadece on dakika içinde yapılabilir. Daha da önemlisi, posayı açığa çıkarırken, frez değil endofile kullanmayı unutmayın. Ve MTA'yı teslim ederken dikkatli olun.

Paraformaldehit gibi fiksatiflerle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın. Kişisel koruyucu ekipman giymek gibi önlemler her zaman alınmalıdır.