Name: Pulpa Değerlendirilmesi için Doğrudan Selüloz-kapatma Modelinin Geliştirilmesi Yara İyileşmesi ve Farelerde Onarım dentin oluşumu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: Öğrenin farelerde doğrudan pulpa kapama prosedürünü; bu yöntem pulpa iyileşmesi ve onarıcı dentin oluşumunu in vivo çalışmak için güvenilir bir model sunar. Diş hekimliği ve rejeneratif tıpta malzeme geliştirme çalışmalarına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma NIDCR / NIH R01DE023348 (RHK) ve University of California, Los Angeles Bölümü Akademik Senatosu Araştırma Konseyi Fakültesi Araştırma Bursu (RHK) tarafından desteklenmiştir.

Fareleri Jackson Laboratory&#39;den satın alındı ​​ve Deney Hayvanları UCLA Tıp Bölümü (DLAM) bir patojen içermeyen vivaryum tutuldu. Deneyler Başbakan&#39;ın Hayvancılık Araştırma Komitesi (ARC # 2016-037) onaylanmış kurumsal kurallarına göre yapılmıştır. 1. Fare Anesthetization <ol><li> Sekiz haftalık dişi C57 / BL6 fareler kullanın (n = 3). </li><li> ketamin (fare ağırlığı 80-120 mg / kg) / ksilazin (5 mg / fare ağırlığındaki her bir kg) çözeltileri kullanılarak fareler anestezi ve 10 ml / kg&#39;lık bir dozda intraperitonal (ip) verilmesi. </li><li> ketamin hazırlanması (80-120 mg / kg) / ksilazin (5 mg / kg) çözeltiler ve 10 mL / kg bir dozda intraperitonal (ip) olarak onları yönetmek. </li><li> fareler tamamen ayak tutam yaparak anestezi onaylayın. </li></ol> 2. Selüloz-kapatma İşlemi <ol><li> Farenin ağzına ağız tutucu yerleştirin. </li><li> O böyle masada ağız yuvasını Güvenlireklam yukarı bakacak. </li><li> İlk maksiller molar tamamen görünür böylece ağız üstüne mikroskobu (10X) yerleştirin. </li><li> hamuru şeffaf dentin aracılığıyla görünür oluncaya kadar 200.000 rpm&#39;de yüksek hızda piyasemene ¼ yuvarlak bur kullanarak, ortada diş minesi parçası kaldırın. bur hamuru maruz bırakmayın. </li><li> Bir 15. endodontik K-dosya (150 mikron çapında) kullanılarak, dentin ile delmek ve hamuru maruz kalmaktadır. NOT: dentin enkaz hamuru içine itilmiş almaz böylece Özel bakım alınmalıdır. Bu üç aylık K-dosyayı dönen ve sonra dışarı K-dosya çekerek önlenebilir. </li><li> Üreticinin talimatlarına uygun olarak, steril H2O ile MTA karıştırın. Sunun ve kaşif ucuyla maruz hamuru üzerine MTA yerleştirin. nazik dokunarak maruz hamuru içine MTA paketi kağıt noktasının (ince) arka tarafını kullanın. Kağıt noktasının kalın tarafı düz ve bu nedenle izin verirmaruz hamuru içine MTA düzgün yoğunlaşması için. </li><li> Sadece diş kapsayan% 35&#39;lik fosforik asit pürüzlendirici koyarak 15 saniye boyunca diş etch. o dişeti dokuları tahriş edebilir gibi etchant yerleştirme sınırlamak için özel özen gösterin. NOT: dağlayıcı bir şırınga gelir ve diş yapıştırıcılar diş üzerine Mikromekanik bağ aracılık etmek akabilmesi için diş yüzeylerinin pürüzlendirin için kullanılır. viskoz olduğundan, kendi kendine yeten bir diş üzerine doğrudan küçük miktarlarda uygulanması ile yapılabilir. </li><li> pürüzlendirici kaldırmak için negatif basınçlı emiş kullanın. Hafifçe etchant ve artıklar kaldırmak için H 2 O ile ıslatılır pamuk bir pelet kullanın. dağlayıcı tamamen diş kaldırılana kadar bu adımı tekrarlayın. </li><li> bir sıkıştırılmış hava silgi kullanarak, yavaşça diş kurutun. </li><li> Kağıt noktasının ters kullanarak diş yapıştırıcıları uygulayın. </li><li> 3 saniye basınçlı hava kullanılarak yapışkan tabaka ince olun. </li><li> Cure kür ışık birimini kullanarak 20 saniye boyunca diş yapıştırıcılar. </li><li> MTA ile kapaklandı diş üzerine küçük miktarlarda akışkan kompozit yerleştirin. diş oluklarına içine kompozit akmaya explorer ucu kullanın. </li><li> Bunu polimerize bir ışıkla sertleşen birimini kullanarak 30 saniye boyunca kompozit Cure. Kompozit tam kürünü ve sert explorer kullanarak doğrulayın. </li></ol> 3. Ameliyat sonrası bakım <ol><li> Hemen kağıt hamuru kapatma işleminden sonra karprofen (5 mg / kg) deri altından (sc) uygulayınız. </li><li> Onlar uyanmadan sıcak hayvanları tutmak için düşük güçte bir ısıtma pedi üzerinde fareler yerleştirin. </li><li> konut vivari fareler dönün. </li></ol> 4. Doku Alımı <ol><li> 5 sonra - 6 hafta, izofluran ile tam bir anestezi koşulları altında servikal dislokasyon ile farelerin euthanize. </li><li> Dikkatle kafatasının tabanından maksilla çıkarın ve 50 ml tüp içine koydu. entir Fixgece boyunca 4 ° C &#39;de, kağıt hamuru başlıklı diş ve PBS içinde% 4 paraformaldehid, pH 7.4 içinde karşı sınırlanmamış diş hem de içerir, ve daha sonra% 70&#39;lik bir etanol çözeltisi içinde saklayın e maksilla. NOT: Paraformaldehyde toksik ve kanserojen olduğunu. standart operasyon prosedürleri (SOP) &#39;de belirtildiği gibi doğru kullanımı paraformaldehit izlenmelidir. </li><li> uCT tarama kullanarak fare maxillae tarayın. % 70 etanol ile ıslatılmış gazlı bez ile örnekleri sarın ve 15 ml hücre kültürü tüp koyun, tarama sırasında maxillae güvenceye almak için. </li></ol> 5. uCT Tarama <ol><li> uCT tarama için numune hazırlayın. Kısaca,% 70 etanol ile ıslatılmış gazlı bez ile örnekleri sarın ve bir jenerik 15 ml hücre kültürü konik tüp sabitleyin. üreticinin talimatlarında belirtildiği gibi, uCT tarama sahneye tüp monte edin. </li><li> 145 uA bir akıma, 55 kVp bir gerilim ve 2 bir pozlama süresi X-ışını kaynağı Set00 ms. </li><li> 20 mikron çözünürlükte ve 0.5 mm Al filtre ile uCT tarayıcı ile görüntü elde etme gerçekleştirin. </li><li> Görüntüyü yeniden ve 11 görselleştirmek. </li><li> uCT Tarama işlemi tamamlandıktan sonra, 2 hafta içinde% 5 EDTA ve PBS içinde% 4 sakroz (pH 7.4) dekalsifikasyon başlar. </li></ol> 6. Doku İşleme ve Boyama <ol><li> parafin dekalsifiye dokuları gömün. gömmeden önce, hemen birinci molar için ön bir sagital kesim yaparak maksilla kırpın. gömme birlikte, birinci molar uzunlamasına kesit kesme yüzeyi olacak şekilde, aşağı doğru, bu yüzey yerleştirin. </li><li> mikrotom kullanılarak, 5 mikron kalınlığında slaytlar hazırlamak. kağıt hamuru sınırı alanlar genellikle bir dönüm noktası olarak kullanılabilir distopalatal (DP) kök ile örtüşmektedir. Işık mikroskobu altında histoloji incelenmesi ve uCT görüntüleri karşılaştırarak ilgi belirli bir bölgede tespit. </li><li> H &amp; E boyama, depara içinffinize ve ksilen (2x) ve seri olarak seyreltilmiş, etanol (% 100 EtOH 2x,% 95 EtOH 2x,% 70 EtOH 1x) ile slaytlar rehidrate. </li><li> akan musluk suyu ile slaytlar durulayın. </li><li> 2.5 dakika boyunca Hematoksilen çözümü ile Leke ve musluk suyu ile durulayın. </li><li> 1 dakika boyunca% 95 etanol içinde slaytlar batırın. </li><li> 1 dakika süreyle Eosin çözeltisi ile Leke musluk suyu ile yıkayın. </li><li> seri olarak seyreltilmiş, etanol (% 70 EtOH 1x,% 95 EtOH 2x,% 100 EtOH 3x) ve ksilen (3x) ile kurutmak. </li><li> montaj çözümü ile slaytlar monte edin. </li></ol>

<ol><li>Dye, B., Thornton-Evans, G., Li, X., Iafolla, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+caries+and+tooth+loss+in+adults+in+the+United+States%2C+2011-2012%5BTitle%5D)+AND+%22NCHS+Data+Brief%22%5BJournal%5D)">Dental caries and tooth loss in adults in the United States, 2011-2012.</a> NCHS Data Brief. (197), 197(2015).</li>
<li>Bagramian, R. A., Garcia-Godoy, F., Volpe, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+increase+in+dental+caries.+A+pending+public+health+crisis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Dent%22%5BJournal%5D)">The global increase in dental caries. A pending public health crisis.</a> Am J Dent. 22 (1), 3-8 (2009).</li>
<li>Koliniotou-Koumpia, E., Tziafas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulpal+responses+following+direct+pulp+capping+of+healthy+dog+teeth+with+dentine+adhesive+systems%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent%22%5BJournal%5D)">Pulpal responses following direct pulp capping of healthy dog teeth with dentine adhesive systems.</a> J Dent. 33 (8), 639-647 (2005).</li>
<li>Tarim, B., Hafez, A. A., Cox, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulpal+response+to+a+resin-modified+glass-ionomer+material+on+nonexposed+and+exposed+monkey+pulps%5BTitle%5D)+AND+%22Quintessence+Int%22%5BJournal%5D)">Pulpal response to a resin-modified glass-ionomer material on nonexposed and exposed monkey pulps.</a> Quintessence Int. 29 (8), 535-542 (1998).</li>
<li>Tziafa, C., Koliniotou-Koumpia, E., Papadimitriou, S., Tziafas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dentinogenic+responses+after+direct+pulp+capping+of+miniature+swine+teeth+with+Biodentine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endod%22%5BJournal%5D)">Dentinogenic responses after direct pulp capping of miniature swine teeth with Biodentine.</a> J Endod. 40 (12), 1967-1971 (2014).</li>
<li>Dammaschke, T., Stratmann, U., Fischer, R. J., Sagheri, D., Schafer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+histologic+investigation+of+direct+pulp+capping+in+rodents+with+dentin+adhesives+and+calcium+hydroxide%5BTitle%5D)+AND+%22Quintessence+Int%22%5BJournal%5D)">A histologic investigation of direct pulp capping in rodents with dentin adhesives and calcium hydroxide.</a> Quintessence Int. 41 (4), 62-71 (2010).</li>
<li>Jegat, N., Septier, D., Veis, A., Poliard, A., Goldberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-term+effects+of+amelogenin+gene+splice+products+A%2B4+and+A-4+implanted+in+the+exposed+rat+molar+pulp%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Face+Med%22%5BJournal%5D)">Short-term effects of amelogenin gene splice products A+4 and A-4 implanted in the exposed rat molar pulp.</a> Head Face Med. 3, 40(2007).</li>
<li>Paterson, R. C., Radford, J. R., Watts, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+response+of+the+rat+molar+pulp+of+two+proprietary+calcium+hydroxide+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Br+Dent+J%22%5BJournal%5D)">The response of the rat molar pulp of two proprietary calcium hydroxide preparations.</a> Br Dent J. 151 (6), 184-186 (1981).</li>
<li>Sela, J., Ulmansky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reaction+of+normal+and+inflamed+dental+pulp+to+Calxyl+and+zinc+oxide+and+eugenol+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Surg+Oral+Med+Oral+Pathol%22%5BJournal%5D)">Reaction of normal and inflamed dental pulp to Calxyl and zinc oxide and eugenol in rats.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 30 (3), 425-430 (1970).</li>
<li>Maurice, C. G., Schour, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+cavity+preparations+in+the+molar+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Experimental cavity preparations in the molar of the rat.</a> J Dent Res. 34 (3), 429-434 (1955).</li>
<li>Skyscan, N. V. NRecon user manual. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://bruker-microct.com/next/NReconUserGuide.pdf">http://bruker-microct.com/next/NReconUserGuide.pdf</a> (2011).</li>
<li>Sohn, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+ORAI1+in+the+Odontogenic+Differentiation+of+Human+Dental+Pulp+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">The Role of ORAI1 in the Odontogenic Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells.</a> J Dent Res. 94 (11), 1560-1567 (2015).</li>
<li>Kim, S., Shin, S. J., Song, Y., Kim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Experiments+with+Dental+Pulp+Stem+Cells+for+Pulp-Dentin+Complex+Regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Mediators+Inflamm%22%5BJournal%5D)">In Vivo Experiments with Dental Pulp Stem Cells for Pulp-Dentin Complex Regeneration.</a> Mediators Inflamm. 2015, 409347(2015).</li>
<li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+%28DPSCs%29+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (25), 13625-13630 (2000).</li>
<li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odontogenic+capability%3A+bone+marrow+stromal+stem+cells+versus+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Odontogenic capability: bone marrow stromal stem cells versus dental pulp stem cells.</a> Biol Cell. 99 (8), 465-474 (2007).</li>
<li>Zhu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+dental+pulp+stem+cells+and+platelet-rich+plasma+for+pulp+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endod%22%5BJournal%5D)">Transplantation of dental pulp stem cells and platelet-rich plasma for pulp regeneration.</a> J Endod. 38 (12), 1604-1609 (2012).</li>
<li>Iohara, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dentin+regeneration+by+dental+pulp+stem+cell+therapy+with+recombinant+human+bone+morphogenetic+protein+2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Dentin regeneration by dental pulp stem cell therapy with recombinant human bone morphogenetic protein 2.</a> J Dent Res. 83 (8), 590-595 (2004).</li>
<li>Saito, K., Nakatomi, M., Ida-Yonemochi, H., Ohshima, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteopontin+Is+Essential+for+Type+I+Collagen+Secretion+in+Reparative+Dentin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Osteopontin Is Essential for Type I Collagen Secretion in Reparative Dentin.</a> J Dent Res. , (2016).</li>
<li>Hunter, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+Acts+as+a+Pro-Survival+Signal+to+Enhance+Dentin+Regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Wnt Acts as a Pro-Survival Signal to Enhance Dentin Regeneration.</a> J Bone Miner Res. , (2015).</li>
<li>Goldberg, M., Kulkarni, A. B., Young, M., Boskey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dentin%3A+structure%2C+composition+and+mineralization%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci+%28Elite+Ed%29%22%5BJournal%5D)">Dentin: structure, composition and mineralization.</a> Front Biosci (Elite Ed). 3, 711-735 (2011).</li>
<li>Nascimento, A. B., Fontana, U. F., Teixeira, H. M., Costa, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocompatibility+of+a+resin-modified+glass-ionomer+cement+applied+as+pulp+capping+in+human+teeth%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Dent%22%5BJournal%5D)">Biocompatibility of a resin-modified glass-ionomer cement applied as pulp capping in human teeth).</a> Am J Dent. 13 (1), 28-34 (2000).</li>
<li>Bogen, G., Kim, J. S., Bakland, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+pulp+capping+with+mineral+trioxide+aggregate%3A+an+observational+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Dent+Assoc%22%5BJournal%5D)">Direct pulp capping with mineral trioxide aggregate: an observational study.</a> J Am Dent Assoc. 139 (3), 305-315 (2008).</li>
<li>Miller, R. A., Nadon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+animal+use+for+gerontological+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gerontol+A+Biol+Sci+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Principles of animal use for gerontological research.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 55 (3), 117-123 (2000).</li>
<li>Shah, A., Song, M., Cao, Y., Kang, M. K., Kim, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoclasts+are+absent+in+pulpal+and+periapical+inflammatory+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Osteoclasts are absent in pulpal and periapical inflammatory lesions.</a> J Dent Res. 95, 1503(2016).</li>
<li>Williams, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+bone+resorption+and+woven+bone+formation+are+associated+with+development+of+osteonecrosis+of+the+jaw-like+lesions+by+bisphosphonate+and+anti-receptor+activator+of+NF-kappaB+ligand+antibody+in+mice%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Impaired bone resorption and woven bone formation are associated with development of osteonecrosis of the jaw-like lesions by bisphosphonate and anti-receptor activator of NF-kappaB ligand antibody in mice).</a> Am J Pathol. 184 (11), 3084-3093 (2014).</li>
<li>McPherson, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+physical+map+of+the+human+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A physical map of the human genome.</a> Nature. 409 (6822), 934-941 (2001).</li>
<li>Gregory, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+physical+map+of+the+mouse+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A physical map of the mouse genome.</a> Nature. 418 (6899), 743-750 (2002).</li>
<li>Hilton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Keys+to+clinical+success+with+pulp+capping%3A+a+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Oper+Dent%22%5BJournal%5D)">Keys to clinical success with pulp capping: a review of the literature.</a> Oper Dent. 34 (5), 615-625 (2009).</li>
<li>Holmdahl, R., Bockermann, R., Backlund, J., Yamada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+pathogenesis+of+collagen-induced+arthritis+in+mice--a+model+for+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Ageing+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">The molecular pathogenesis of collagen-induced arthritis in mice--a model for rheumatoid arthritis.</a> Ageing Res Rev. 1 (1), 135-147 (2002).</li>
<li>Kalu, D. N., Chen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovariectomized+murine+model+of+postmenopausal+calcium+malabsorption%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Ovariectomized murine model of postmenopausal calcium malabsorption.</a> J Bone Miner Res. 14 (4), 593-601 (1999).</li>
<li>Yokochi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+experimental+murine+model+for+lipopolysaccharide-mediated+lethal+shock+with+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Innate+Immun%22%5BJournal%5D)">A new experimental murine model for lipopolysaccharide-mediated lethal shock with lung injury.</a> Innate Immun. 18 (2), 364-370 (2012).</li>
<li>Abe, T., Hajishengallis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+ligature-induced+periodontitis+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of the ligature-induced periodontitis model in mice.</a> J Immunol Methods. 394 (1-2), 49-54 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Şu anda, dental pulpa kök hücrelerin (DPSCs) 13 odontojenik farklılaşma dental materyaller, iskeleler, ya da büyüme faktörlerinin in vivo etkilerini doğrulamak için birkaç farklı deneysel model vardır. Bu modeller gibi böbrek kapsül gibi bir organ DPSCs ektopik otolog transplantasyon, ya da iskeleler 14,15 ile immün sistemi baskılanmış farelere DPSCs deri altına nakli sayılabilir. Bununla birlikte, bu yöntemler DPSCs üzerindeki odontojenik etkisi ortotopik hamur ortamında gerçekleştirilmez...

Diş çürükleri hemen hemen tüm bireylerde en sık görülen ağız hastalıklarından biridir ve dişlere yönelik cerrahi girişimlerin önde gelen nedenidir1,2. Bir dişin cerrahi girişimlerinin ve restorasyonlarının prognozu büyük ölçüde uygun pulpa yanıtına ve başarılı yara iyileşmesine bağlıdır. Gerçekten de, mine ve dentinden derinlemesine nüfuz eden diş çürükleri sıklıkla, mineral trioksit agregatları (MTA) dahil olmak üzere kalsiyum hidroksit (Ca(OH)2) veya hidrolik kalsiyum-silikat çimentoları (HCSC'ler) gibi diş materyalleriyle "kapatılan" alttaki pulpa dokusunun açığa çıkmasına neden olur. Bu tür bir pulpa kapatma prosedürünün nihai amacı, alttaki pulpa dokusunu korumak ve dişin yaşam beklentisini ve genel ağız sağlığını artırmak için "biyolojik mühür" işlevi gören fiziksel bir bariyer olan onarıcı dentini yeniden oluşturarak pulpa yara iyileşmesini hızlandırmaktır. Bununla birlikte, pulpal yara iyileşmesi ve onarıcı dentin oluşumunun altında yatan mekanizma tam olarak anlaşılamamıştır.
Pulpal yara iyileşmesi ve onarıcı dentin oluşumunun in vivo mekanizmalarını daha iyi anlamak için daha önce maymunlar, köpekler ve domuzlar3-5 dahil olmak üzere birkaç hayvan kullanıldı. Bunlar arasında sıçanlar, diğer hayvanlara göre nispeten daha küçük boyutlarda olmaları, ancak dişlerinin herhangi bir teknik zorluk yaşamadan doğrudan pulpa kapatma işlemini yapabilecek kadar büyük olması nedeniyle sıklıkla kullanılmaktadır6-10. Bu hayvan modelleri, pulpa tepkilerini ve onarıcı dentin oluşumunu incelemek için insan çalışmalarına ideal alternatiflerdir. Bununla birlikte, kullanımları hücresel düzeyde gözlemsel çalışmalarla sınırlıdır ve moleküler düzeyde onarıcı dentin oluşumu sırasında nadiren mekanik içgörüler sağlarlar.
Genetik mühendisliğindeki son teknik gelişmeler, insan hastalıklarının moleküler mekanizmalarını in vivo olarak incelemek için etkili olan, aşırı eksprese edilmiş veya silinmiş bir geni barındıran paha biçilmez ve vazgeçilmez araştırma araçları sağladı. Hücreye özgü bir şekilde stratejik olarak indüklenebilen farklı transgenik veya nakavt fare suşlarının sayısı, bilim camiasında sürekli olarak artmaktadır. Bu nedenle, bu farelerde pulpal yara iyileşmesi ve onarıcı dentin rejenerasyonunu incelemek, bu süreçleri moleküler düzeyde anlamamızı hızlandırmaya büyük ölçüde yardımcı olacaktır. Bununla birlikte, minyatür boyutu nedeniyle bir fare dişi üzerinde pulpa kapatma prosedürü uygulamak teknik olarak zor olduğundan, farelerin kullanımı önemli ölçüde azaltılır. Burada, pulpa yara iyileşmesinin ve onarıcı dentin oluşumunun in vivo olarak değerlendirilmesi için farelerde doğrudan pulpa kapatma işleminin tekrarlanabilir yöntemini sunuyoruz.

<table><tbody><tr><td>BM-LED stereo mikroskop</td><td>MEIJI Tekno</td><td></td><td>Mikroskop&nbsp;</td></tr><tr><td>Optima MCX-LED&nbsp;</td><td>Bien Air Dental</td><td>1700588-001</td><td>Elektrikli motor motoru</td></tr><tr><td>izofluran</td><td>Henry schein hayvan sağlığı</td><td>NDC 11695-0500-2</td><td></td></tr><tr><td>1/4 yuvarlak frez</td><td>Brasseler</td><td>001092T0</td><td></td></tr><tr><td>Endodontik K-file</td><td>Roydent</td><td>98947</td><td></td></tr><tr><td>ProRoot MTA</td><td>Dentsply</td><td>PROROOT5W</td><td>MTA</td></tr><tr><td>Kağıt noktası</td><td>Henry schein</td><td>100-3941</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-Etch</td><td>Ultradent ürün A.Ş.</td><td></td><td>Fosforik asit aşındırıcı</td></tr><tr><td>OptiBond SoloPlus</td><td>Kerr</td><td>29669</td><td>Yapıştırıcılar</td></tr><tr><td>Coltolux LED</td><td>Coltene/whaledent Inc.</td><td>C7970100115</td><td>Kürleme ışık ünitesi</td></tr><tr><td>Karakterizasyon renk tonu</td><td>Bisco</td><td>T-14012</td><td>Akışkan kompozit</td></tr><tr><td>Skyscan</td><td>Breuker</td><td>1275</td><td>uCT tarayıcı</td></tr><tr><td>Microm</td><td>Thermo</td><td>HM355S</td><td>Mikrotom</td></tr><tr><td>Hematoksilin-1</td><td>Thermo Scientific</td><td>7221</td><td></td></tr><tr><td>Eosin-Y</td><td>Thermo Scientific</td><td>7111</td><td></td></tr><tr><td>Cytoseal 60</td><td>Thermo Scientific</td><td>8310-16</td><td>Montaj çözümü</td></tr></tbody></table>

pulpa değerlendirilmesi için doğrudan selüloz-kapatma modelinin geliştirilmesi yara İyileşmesi ve farelerde onarım dentin oluşumu

Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice

Diş pulpası, mine ve dentin tarafından tamamen korunan bir dişin hayati bir organıdır. Pulpa, karyojenik veya iyatrojenik yaralanmalar nedeniyle maruz kaldığında, pulpa yara iyileşmesini hızlandırmak için genellikle biyouyumlu materyallerle kapatılır. Nihai hedef, "biyolojik mühür" işlevi gören ve alttaki pulpa dokusunu koruyan fiziksel bir bariyer olan onarıcı dentini yeniden oluşturmaktır. Bu doğrudan pulpa kapatma prosedürü diş hekimliğinde uzun süredir kullanılmasına rağmen, pulpa yara iyileşmesi ve onarıcı dentin oluşumunun altında yatan moleküler mekanizma hala tam olarak anlaşılamamıştır. Onarıcı dentini indüklemek için, pulpa kapatma işlemi büyük hayvanlarda deneysel olarak gerçekleştirilmiştir, ancak muhtemelen küçük boyutları ve ardından gelen teknik zorluklar nedeniyle farelerde daha az gerçekleştirilmiştir. Burada, Sınıf-I benzeri bir boşluğun hazırlanması, hamur kaplama malzemelerinin yerleştirilmesi ve dental kompozit kullanılarak restorasyon prosedürü dahil olmak üzere, farelerde bir pulpa kapatma prosedürünün gerçekleştirilmesi için ayrıntılı, adım adım bir yöntem sunuyoruz. Pulpa kapaklı fare modelimiz, araştırma topluluğunda yaygın olarak bulunan transgenik veya nakavt farelerin kullanımını mümkün kılarak in vivo onarıcı dentin bağlamında pulpal yara iyileşmesinin temel moleküler mekanizmalarının araştırılmasında etkili olacaktır.

Burada, fareler dişlerde pulpa kaplama gerçekleştirmek için adım adım uygulandığını göstermiştir. Farelerde kapatma hamuru önemli yönlerinden biri uygun cihazı sahip olmaktır. Bu bağlamda, 10X güç büyütme ile mikroskop olan esas (Şekil 1A) 'dir. Diş Sınıf-I-benzeri hazırlık oluşturmak için, biz 200.000 rpm (Şekil 1B) bir elektrik yüksek hızda piyasemene bir ¼ tur çapak kullanılır. Seçenek olarak ise, basınçlı hava kullanımı da dahil olmak üzere başka her...

Bu pulpa yara iyileşmesi ve in vivo onarım dentin oluşumunun değerlendirilmesi için farenin dişler üzerinde kapatma doğrudan kağıt hamuru yapmayı bir adım adım bir yöntem açıklanmaktadır.

Pulpa Değerlendirilmesi için Doğrudan Selüloz-kapatma Modelinin Geliştirilmesi Yara İyileşmesi ve Farelerde Onarım dentin oluşumu

Dental pulp is a vital organ of a tooth fully protected by enamel and dentin. When the pulp is exposed due to cariogenic or iatrogenic injuries, it is ...

Bu protokolün genel amacı, farelerde doğrudan pulpa kapatma prosedürünü sunmaktır. Bu yöntem, pulpanın nasıl iyileştiği veya açıkta kalan pulpa üzerine sıkışmış pulpa kaplama materyalleri yerleştirdiğinizde pulpanın nasıl oluştuğu gibi pulpa biyolojisindeki temel soruları yanıtlamanıza yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, insanlarda gerçekleştirilen gerçek doğrudan pulpa kapatma prosedürünün farelerde de aynı şekilde yapılabilmesidir.Bu tekniğin sonuçları, aksi takdirde kanal tedavisi gibi daha invaziv tedavilere mahkum olan dişleri kurtarmak için malzeme özelliklerinin iyileştirilmesine kadar uzanır. Prosedür için fareyi uygun şekilde uyuşturduktan sonra, ağız tutucuyu ağzına yerleştirin ve diğer ucunu baş yukarı bakacak şekilde masaya sabitleyin. İyi bir aydınlatma ve stereoskop kullanarak ilk maksiller azı dişini gözlemleyin.Daha sonra, 200.000 rpm'de yüksek hızlı bir el aletinde çeyrek yuvarlak frez kullanarak, pulpa şeffaf dentinden görünene kadar diş minesinin merkezi bölgesini çıkarın. Hamurun içine girmemesine dikkat edin. Ardından, hayır kullanarak.15 Endodontik K-eğesi, dentinden delinir ve pulpayı açığa çıkarır. Hamurun içine herhangi bir kalıntı itmeyin; Bu, K dosyasını üç ayda bir döndürerek ve ardından K dosyasını dışarı çekerek önlenebilir. Şimdi, MTA'yı hazırlayın ve kaşifi kullanarak MTA'yı teslim edin, ardından kağıt ucunun arka tarafını ve hafifçe vurarak açıkta kalan bölgeye paketleyin.Daha sonra,% 35 fosforik asit aşındırıcı yüklü bir şırınga kullanarak, dişeti dokularından kaçınarak dişi aşındırıcı ile örtün ve aşındırıcının 15 saniye çalışmasına izin verin. 15 saniye sonra, dişten aşındırıcıyı emdirin ve kalan aşındırıcıyı silmek için suyla nemlendirilmiş bir pamuklu aplikatör kullanın. Tüm aşındırıcılar çıkarılana kadar emdirin ve silin.Ardından, kağıt ucunun arka tarafını kullanarak diş yapıştırıcılarını uygulayın. Yapışkan tabakayı birkaç saniye basınçlı hava ile üfleyerek ince hale getirin. Daha sonra yapıştırıcıyı uygun ışıkla 30 saniye kürleyin.Şimdi, kompoziti diş oluklarına akıtmak için kaşifin ucunu kullanarak dişin üzerine küçük miktarlarda kompozit yerleştirin. Uygulandıktan sonra, kompoziti 30 saniye boyunca sertleştirin. Fareyi ötenazi yaptıktan ve tüm maksillayı çıkardıktan sonra, çeneyi pH 7.4'te PBS'de% 4 paraformaldehite yerleştirin.Dokuyu gece boyunca 4 santigrat derecede tutun ve ertesi sabah, işlenene kadar saklamak için% 70 etanole aktarın. Maksillanın mikro BT taramasını yapmak için önce %70 etanol ile ıslatılmış gazlı beze sabitleyin, ardından 15 mililitrelik bir hücre kültürü tüpüne koyun. Ardından tüpü mikro CT tarama aşamasına monte edin.Ardından, x-ışını kaynağını 145 milisaniye boyunca 55 tepe kilovolt ile 200 mikroamper akım sağlayacak şekilde ayarlayın. 0,5 milimetre alüminyum filtre kullanarak 20 mikron çözünürlükte görüntüler elde edin. Taramalar tamamlandıktan sonra, PBS'de %5 EDTA ve %4 sükroz ile maksillayı 7.4 pH değerinde kireçten arındırmaya başlayın.Bu reaksiyonun 4 santigrat derecede iki hafta sürmesine izin verin. Maksillayı gömdükten sonra beş mikron kalınlığında dilimler yapın. Pulpa kaplama alanları genellikle bir dönüm noktası olarak kullanılabilen distal damak kökü ile çakışır.Işık mikroskobu altında histolojiyi inceleyerek ve sonuçları mikro BT taramalarıyla karşılaştırarak kesin ilgi alanını belirleyin. H & E boyama için, parafini çıkarın ve slaytları her biri birkaç dakika boyunca ksilen içinde iki banyo ile yeniden sulandırın. Daha sonra bunları bir dizi seri olarak seyreltilmiş etanolden geçirin.Her banyo sadece bir dakika boyunca uygulanmalıdır. Rehidrasyonu bir durulama ile takip edin. Ve sonra hemotoksilin çözeltisini iki buçuk dakika boyunca uygulayın.Boyayı durulama ile çıkarın ve ardından slaytları bir dakika boyunca% 95 etanol içine koyun. Daha sonra, slaytları bir dakika boyunca eozin çözeltisiyle boyayın ve ardından durulayın. Etanol ile başlayarak lekeli dokuları kurutmak için hidrasyon adımlarını tersine çevirin.Ardından, onlara ksilen ile muamele edin. Slaytlar daha sonra monte edilebilir ve görüntülenebilir. Açıklanan prosedürler kullanılarak, 8 haftalık farelerde pulpa kapatma işlemi yapıldı.Altı hafta sonra maksillaları alındı ve incelendi. İlginç bir şekilde, H&E boyaması, pulpa odası ve kök kanalları boyunca dentin oluşumunu ortaya çıkardı. Karşılaştırmalı olarak, kapaksız azı dişi aynı dentin oluşumunu göstermedi.Kapaklı azı dişinde, hem dentin tübülleri hem de onarıcı dentinde osteositler bulunduğundan, hem dentin benzeri hem de kemik benzeri oluşum özellikleri vardı, bu da yaralı pulpanın hem yerleşik odontoblastlar hem de göç etmiş osteoblastlar tarafından mineralize edilebileceğini düşündürdü. DMP1 immünohistokimyasal boyamanın kullanılması, onarıcı dentin oluşturan hücrelerin aktivitelerinin arttığını daha da doğruladı. Tıpkı gerçek diş kliniği uygulamalarında olduğu gibi, bir asistana sahip olmak son derece faydalıdır.Örneğin, bir asistanla, bu teknik, ustalaştıktan sonra sadece on dakika içinde yapılabilir. Daha da önemlisi, posayı açığa çıkarırken, frez değil endofile kullanmayı unutmayın. Ve MTA'yı teslim ederken dikkatli olun.Paraformaldehit gibi fiksatiflerle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın. Kişisel koruyucu ekipman giymek gibi önlemler her zaman alınmalıdır.

development-direct-pulp-capping-model-for-evaluation-pulpal-wound

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu videoda, bir transwell filtresi kullanarak trigeminal nöronların ve birincil diş pulpası hücrelerinin ko-kültürünü oluşturmak için bir teknik gösterilmektedir. Fiziksel olarak ayrılmış bu durumda, diş pulpası dokusundan elde edilen mezenkimal hücreler, gözeneklerden geçen parakrin sinyal molekülleri salgılar ve nöronların mezenkimal hücrelere doğru farklılaşmasını ve göçünü teşvik ederek bir ko-kültür sistemi oluşturur.

Çapraz iletişim için dental pulpa hücreleri ve trigeminal nöronların ortak kültürünün oluşturulması

Fizyolojik ve patofizyolojik ortamlarda terapötik bileşiklerini değerlendirmek için de kullanılabilir deri yara iyileşmesinin Bir murin modeli.

Yara Şifa murin Modeli

Burada, yerel olarak farelerde apikal periodontitis teşvik etmek için bir protokol sunuyoruz. Biz nasıl fare diş bir delik matkap ve onun hamuru maruz göstermek, amacıyla lokal inflamasyon neden. Mikro-CT ve histoloji gibi bu inflamasyonun doğasını araştırmak için analiz yöntemleri de gösterilmiştir.

Fareler içinde Apical periodontitis İndükleme

Burada, biri hücresel ve sitokin yara iyileştirici yanıtlarını değerlendirmek, diğeri ise yara kapatma oranını ölçmek için tasarlanmış iki murine yara iyileşmesi modeli tanımlanmıştır. Bu yöntemler, kötü yara iyileşmesiçeşitli yönlerini mekanizmaları belirlemek için diyabet gibi karmaşık hastalık modelleri ile kullanılabilir.

Dorsal Subkutan Polivinil Alkol Sünger İmplantasyonu ve Eksizyonal Kuyruk Deri Yara Modelleri kullanılarak Akut Yara İyileşmesinin Değerlendirilmesi.

Bu protokol, faredeki mandibular ilk azı dişinin nasıl çıkarılacağına dair adım adım ayrıntıları gösterir. Çene kemiği iyileşmesi ve yenilenmesine odaklanan araştırmacılar için alternatif bir yöntem sunar.

Murin Mandibuler Molar Ekstraksiyon Soket İyileştirme Modelinin Kurulması

Bu makale, yenilikçi bir ağız tıkaç kullanarak farelerde bir pulpitis modeli oluşturmak için kolaylaştırılmış bir protokol ve ardından müteakip histolojik analiz sunmaktadır.

Pulpitis Araştırmaları için Yeni Bir Ağız Tıkaç ile Murin Pulpa Maruziyet Modelinin Kurulması

Bu çalışma iki önemli deneysel teknik sunmaktadır: yara kapanmasını değerlendirmek için bir murin yara modelinin oluşturulması ve hücresel canlılığı korumak için murin derisinden tek hücreli süspansiyonların hazırlanması.

Fare Yara Modelleri ve Tek Hücre Süspansiyonlarının Hazırlanması

Mikrosertlik, mekanik bir özelliktir ve sert doku patofizyolojisini değerlendirmek için bilgilendirici bir parametredir. Burada, kemirgen ağız hastalığı modellerinde diş ve alveol kemiğinde mikrosertlik analizi, yani dental florozis ve ligatür kaynaklı periodontal kemik rezorpsiyonu için standart bir protokol (numune hazırlama, parlatma, düz yüzey ve girinti bölgeleri) gösteriyoruz.

Kemirgen Ağız Hastalığı Modellerinde Diş ve Alveol Kemiği Üzerinde Mikrosertlik Ölçümleri

Yaralar küresel bir sağlık sorununu temsil eder. Bu çalışma, yara ölçümü değişkenliğini en aza indirmek için dijital planimetri kullanan standart bir fotoğraf kabini geliştirdi. Farelerde yaraların 14 gün boyunca izlenmesi, yara alanı ve çevresinde başlangıçta bir artış olduğunu ve ardından kademeli olarak kapandığını ortaya koydu. Bu metodoloji, klinik öncesi modellerde yara kapatma kinetiğinin değerlendirilmesine yardımcı olabilir.

Bir Fare Modelinde Yara Kapanma Kinetiğini Değerlendirmek için Dijital Planimetri

Kombine katı organ ve vaskülarize kompozit allotransplantasyonu incelemek için, servikal dikişsiz manşet tekniği kullanarak farelerde yeni bir heterotopik en blok göğüs duvarı, timus ve kalp nakli modelini açıklıyoruz.

Farelerde A Novel Mikrocerrahi Heterotopik Modeli, En Bloku Göğüs Duvarı, Thymus ve Kalp Nakli

Öğrenin farelerde doğrudan pulpa kapama prosedürünü; bu yöntem pulpa iyileşmesi ve onarıcı dentin oluşumunu in vivo çalışmak için güvenilir bir model sunar. Diş hekimliği ve rejeneratif tıpta malzeme geliştirme çalışmalarına katkı sağlar.

Pulpa Değerlendirilmesi için Doğrudan Selüloz-kapatma Modelinin Geliştirilmesi Yara İyileşmesi ve Farelerde Onarım dentin oluşumu (Video) | JoVE Journal

Pulpa Değerlendirilmesi için Doğrudan Selüloz-kapatma Modelinin Geliştirilmesi Yara İyileşmesi ve Farelerde Onarım dentin oluşumu

Daha fazla video keşfet