Name: Serebral İskemiye Karşı Asitik Sonrası Sonrasyonun Sinir Korumasını Çalıştırmak için Deney Modelleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-31T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 13 s
Description: Öğrenin serebral iskemiye karşı asidik sonrası sonrasyonun sinir koruma etkilerini fare orta serebral arter oklüzyonu ve kortikostriatal kesit modelleri kullanarak. Bu yöntem inme tedavisi için yeni stratejiler geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81573406, 81373393, 81273506, 81221003, 81473186 ve 81402907), Zhejiang Eyalet Doğa Bilimleri Vakfı (LR15H310001) ve S &amp; T Yenilik Ekibinin Zhejiang Leading Team Programı (2011R50014) tarafından finanse edildi.

Tüm deneyler, Zhejiang Üniversitesi Hayvan Deneyleri Komitesinin etik kurallarına göre onaylanmış ve yürürlüğe girmiş ve Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Ulusal Sağlık Enstitüleri ile tam bir uyum içindedir. Herhangi bir ağrı veya rahatsızlığı en aza indirmek için çaba gösterildi ve asgari hayvan sayısı kullanıldı. 1. Corticostriatal dilimlerin OGD&#39;leri <ol><li> Çözelti hazırlığı: <ol><li> 1.000 ml r-ACSF (124 mmol / L NaCl hazırlanması, 5 mmol / L KCl, 1,25 mmol / L KH2 PO 4, 2 mmol / L MgSO 4, 26 mmol / L NaHCO 3, 2 mmol / L CaCl2, 10 mmol / L glukoz, nihai pH 7.4). Deney boyunca% 5 CO 2 ve% 95 O 2 ile kabarcık. </li><li> % 5 CO2 ve% 95 N2 ile köpürtüldü glikoz üstünde, ancak hariç tutulmasıyla 200 ml glukoz içermeyen ACSF (GF-ACSF), hazırlayın. Br uygulamadan önce gazları 30 dakika kabarcık haline getirinÇözeltideki oksijen içeriğini azaltmak için dilimler. OGD işlemi tamamlanıncaya kadar köpürmeye devam edin. </li><li> % 20 CO2 ve% 80 O2 ile 200 ml r-ACSF dengelenmesi ile asidik ACSF (a-ACSF) hazırlayın. Çözeltinin pH&#39;ını 6.8&#39;e düşürmek için beyin dilimine uygulamadan önce gazları 30 dakika kabarcık haline getirin ve APC işlemi sona erene kadar köpürmeye devam edin. </li><li> Üç doku tutucu sırasıyla r-ACSF, gf-ACSF, a-ACSF&#39;ye yerleştirin. </li></ol></li><li> Beyin dilim preparatı: Not: Bu çalışmada 8 haftalık erkek C57Bl / 6J fareleri kullanılmıştır. Hayvanlar, kontrollü bir sıcaklıkta (22 ± 2 ° C), 12 saat ışık-karanlık döngü periyoduyla barındırıldı ve pellet haline getirilmiş yiyecek ve suya erişildi. <ol><li> Bir indüksiyon odasında izofluran doz aşımı ile bir fare kurban. Fareyi kes. Küçük makas ve forseps kullanarak beyni ayırın. İnce bir spatula ile beyni çıkarın ve dikkatlice bir cam beher kabına koyuntaining buz soğukluğunda r-ACSF% 5 CO2 ve% 95 O2 ile dengelenmiştir. NOT: Bu adımlar mümkün olduğunca hızlı ancak titizlikle yapılmalıdır. </li><li> Beyni 5 dakika buz soğuk r-ACSF&#39;de tutun. Beynin hareketlerinden kaçınmak için gaz basıncını ayarlayın. </li><li> İki şerit halinde vibratome plaka üzerine kriyopresipit tutkal yerleştirin. Beyni desteklemek için yapışkan şerit üzerine bıçaktan uzakta bir parça% 3 agaroz koyun. </li><li> Buz üzerinde 10 cm&#39;lik bir Petri kabını ters çevirin ve çanağa bir filtre kağıdı koyun. Filtre kağıdını buz soğukluğundaki r-ACSF damlaları ile nemlendirin. </li><li> Forsep ile beyin filtre kağıdına aktarın. Bıçak ve forsepsle frontal direği ve serebellumu kesin. NOT: Enine kesitler mümkün olduğunca pürüzsüz olmalı ve sagital plana dik olmalıdır. </li><li> Geride kalan beyin dokusunu diğer tutkal şeridine dikey olarak yerleştirin ve beyindeki agaroza yaslanmasını sağlayın. Buz soğuğu r-ACSF&#39;yi kesme haznesine ekleyerekBeyni suya batırın ve buz tutucuya buz ekleyin. Rezervuardaki r-ACSF&#39;yi% 5 CO 2 ve% 95 O 2 ile kabarcık halde tutun. </li><li> Hazneyi kaldırın ve traş makinesini mümkün olduğunca beynin yakınında ve beynin hemen üzerinde olacak şekilde tıraş makinesinin konumunu ayarlayın. </li><li> Beyin bölümlerini kesintisiz kesmek için &quot;CONT&quot; modunu seçin. Kesme kalınlığını 400 μm, titreşim frekansı 6 - 8 ve hız 3 - 4 olarak ayarlayın. Otomatik kesmeye başlamak için &quot;start / stop&quot; düğmesine basın. </li><li> Beyin dilimlerinin boyutlarına uyan bir açılım yapmak için 3 mL Pasteur pipetinin ucunu kesin. NOT: Açılma, beyin dilimlerine ek hasar gelmesini önleyecek kadar büyük olmalıdır. </li><li> Beş Beyin dilimleri uç cutPasteur pipet ile bir bir çizme ve buz soğukluğunda, r-ACSF doku tutucu içine yerleştirin% 5 CO2 ve% 95 O2 ile fokurdatıldı. Üretilen ilk dilimini toplamayın. Gaz basıncını avoi&#39;ye ayarlayınBeyin dilimlerinin hareketleri. NOT: Beyin dilimleri birbirlerini örtmemelidir. </li><li> Sinaptik fonksiyonları kurtarmak için 30 dakika boyunca oda sıcaklığında r-ACSF ile beyin dilimleri yerleştirin ve daha sonra sinaptik fonksiyonları iyileştirmek için bir su banyosunda başka bir 10 dakika boyunca 37 ° C&#39;de tutun. </li></ol></li><li> OGD ve APC: <ol><li> Gf-ACSF ve a-ACSF&#39;yi 37 ° C&#39;lik bir su banyosuna yerleştirin ve yukarıda belirtilen 1.1.2 ve 1.1.3&#39;de belirtildiği gibi ilgili gazlarla tamponları 30 dakika boyunca kabarcıklandırın. </li><li> Kontrol olarak r-ACSF&#39;de bir dilim bırakın. Diğer dört beyin dilimini önceden ısıtılmış gf-ACSF ile doku tutucusuna dikkatlice aktarın ve 15 dakika inkübe edin. Reperfüzyonu sağlamak için dilimleri r-ACSF&#39;deki doku tutucusuna geri aktarın. </li><li> APC&#39;nin zaman penceresini incelemek için, bir dilimi doğrudan gf-ACSF&#39;den a-ACSF&#39;ye aktarın. Diğer üç parçayı ilk önce r-ACSF&#39;ye aktarın ve daha sonra reperfüzyondan 5 ve 15 dakika sonra iki tanesini a-ACSF&#39;de doku tutucusuna aktarın. </li><li> IncubatE-ACSF&#39;deki iki dilimi 3 dakika boyunca çalkalayın ve sonra onları r-ACSF&#39;ye geri gönderin. Üç parçayı r-ACSF&#39;de 1 saat daha inkübe edin. Geri kalan dilimleri r-ACSF&#39;de OGD grubu olarak ayarlayın. </li><li> Bir doz yanıtı çalışması için, OGD&#39;den sonra başlangıçta r-ACSF doku tutucusuna dört dilim aktarın ve 5 dakika inkübe edin. OGD grubu olarak r-ACSF&#39;ye bir dilim bırakın ve diğer üç dilimi a-ACSF&#39;ye aktarın. Dilimleri bir-ACSF&#39;de sırasıyla 1, 3 ve 5 dakika inkübe edin ve daha sonra r-ACSF&#39;ye aktarın. Üç parçayı r-ACSF&#39;de 1 saat daha inkübe edin. </li></ol></li><li> Dilim canlılığı belirleme: <ol><li> % 0.25 2,3,5-trifeniltetrazolyum hidroklorür (TTC) normal tuz çözeltisi hazırlayın. 1.25 g TTC tozu 500 mL normal salin solüsyonuna ilave edin. NOT: Toz tamamen çözündükten sonra, çözeltiyi folyo ile kaplanmış 24 delikli bir plaka (oyuk başına 500 uL) içine aktarın ve 4 ° C&#39;de saklayın. TTC ve doku dokusu TTC ile boyandığında ışık sensitive. </li><li> Dilimleri, TTC çözeltisi içeren 24 delikli bir tabağa (oyuk başına bir dilim) aktarın ve çözeltideki dilimi uzatın. Dilimleri TTC çözeltisi içinde 37 ° C&#39;de sığ bir su banyosunda 30 dakika inkübe edin. </li><li> Dilimleri folyo ile kaplanmış temiz 1.5 mL santrifüj tüplerine aktarın ve dilimlerin kuru ağırlığını ölçün. </li><li> Formazan çıkarmak için santrifüj tüplerine (v: w = 10: 1) etanol / dimetil sülfoksit (1: 1) ekleyin. Dilimleri etanol / dimetil sülfoksit içinde oda sıcaklığında 24 saat boyunca ışığa bırakın. </li><li> Tüplerdeki tüm etanol / dimetil sülfoksitleri 96 oyuklu bir plaka içine ilave edin ve bir plaka okuyucu tarafından 490 nm&#39;de absorbansı ölçün. </li><li> Emiciliği dilimin kuru ağırlığına göre normalleştirin ve canlılık oranını kontrol dilimi yüzdesi olarak ifade edin. </li></ol></li></ol> 2. MCAO <ol><li> Hazırlık: <ol><li> Tezgah, Lazer Doppler Flowmetr yüzeyini dezenfekte edinY (LDF) aletinin ve aksesuarlarının% 70 etil alkol ile kullanılması. </li><li> Otoklavlı aletleri hazırlayın: iki makas, 10 cm; Iki forseps, 10 cm; Bir oftalmik forseps, 11 cm; Bir mikro oftalmik makas, 9 cm; Bir mikro damar kelepçesi, 1,8 cm; Oneneedle tahrik, r 12.5 cm; Çeşitli cerrahi sütürler (△ 1/2 4 × 10); Pamuklu çubuklar. </li><li> Sulu bir çalışma alanı korumak için salin solüsyonu ile bir şırınga (iğne olmadan) hazırlayın. </li><li> Anestezi gazı hazırlayın (% 100 O 2 + izofluran). </li></ol></li><li> Beyin kan akışının saptanması: <ol><li> LDF aletini kurun. </li><li> Analjezikler intraperitoneal fare içine enjekte edilir: metamizol 200 mg / kg, karprofen 4 mg / kg ve buprenorfin 0.1 mg / kg. </li><li> Vücudun spontan hareketi ve vibrissae durana kadar anestezi için oksijen% 4 izofluran ile bir indüksiyon odasına fare yerleştirin. </li><li> Fareyi, yüzeye takılı olan burnunu eğilimli bir konuma getirin.Burun konisi ve takip prosedürü için izofluran&#39;ı% 1.5&#39;de tutun. </li><li> Her iki gözde dexpanthenol göz merhemi uygulayın. </li><li> Kafayı% 70 etil alkol ile dezenfekte edin. </li><li> Bregma&#39;yı ortaya çıkarmak için bir bistül kullanarak gözler ve kulaklar arasında doğru bir paramedian cilt insizyonu yapın. </li><li> Kafatasını steril pamukla ovun. </li><li> Kafatasının yüzeyine bir ila iki damla cerrahi tutkal uygulayın. </li><li> Fiber optik ucun ucunu bregma&#39;ya kaudal 5 mm ve orta hattın 6 mm yanına yerleştirin. </li><li> Bilgisayar yazılımında kan akışını kaydetmeye başlayın. Kararlı bir kan akımı taban çizgisi oluşana kadar bekleyin ve sonra probu sabitlemek için tutkalın üzerine 20 mcL bir katalizör uygulayın. NOT: İdeal bir taban çizgisi 500&#39;den fazla akış olmalıdır. </li><li> Taban çizgisi 200 akışın altında ise, uygun bir taban çizgisi elde etmek için konumu iyice ayarlayın. Deney süresince probu kafatasına tutun. </li><li> Başınızı iyodofor af ile dezenfekte edinBağlı fiber optik prob. </li></ol></li><li> MCAO: <ol><li> Anestezi uygulanmış fareyi (LDF probu kafatasına takılı haldeyken) yatırarak yerleştirin ve ameliyat boyunca bir ısı lambası kullanarak vücut sıcaklığını koruyun. Boynu% 70 etil alkol ile dezenfekte edin. </li><li> Bir neşter kullanarak boynunda paramedian cilt insizyonu yapın; Kapları açığa çıkarmak için yumuşak dokuları forsepsle inceleyin. Onların susuz kalması için maruz kalan dokulara bir damla tuz bırakın. </li><li> Oftalmik forseps kullanarak ortak karotis atardamarını çevresindeki doku ve vagus sinirinden ayırın. Vagus sinirine zarar vermemek için dikkatli olun. Genel karotid arter maruz kaldıktan sonra boyun derisini tekrar iyodofor ile dezenfekte edin. </li><li> Genel karotid arterin distal ucuna bir mikrodamar kelepçesi yerleştirin ve sonra proksimal ucunda ölü bir düğümü 6-0 ipek dikişlerle bağlayın. Müteakip işlemler için kelepçeyi mümkün olduğunca proksimal yapın. Emin olun kiKelepçe ile ölü düğüm arasındaki gemi daha sonraki işlemler için mümkün olduğunca uzun sürebilir. </li><li> Gevşek bir düğüm bağlayarak kelepçenin yakınından geçici bir sütür yapın. Monofilament yerleştirilmesi için iki düğüm arasında yeterli boşluk bulunduğundan emin olun. </li><li> Mikro oftalmik makas ile iki düğüm arasındaki küçük boyuna bir insizyon yapın. Müteakip işlemler için kesi mümkün olduğunca ölü düğümün yakınında olduğundan emin olun. Gemiyi kesmemeye dikkat edin. </li><li> Arter lümenini girmek için insizyona 12 mm&#39;lik uç-köreltilmiş bir monofilament yerleştirin ve birkaç mm ilerletin. Monofilamanın ucundaki gevşek düğüm sıkıştırın ve kelepçeyi çıkarın. </li><li> LDF yazılımı, kan akışında keskin bir düşüş (başlangıçtaki kan akışından% 80&#39;lik bir düşüş) gösterecek şekilde filamenti oftalmik forseps ile iç karotid artere (orta serebral arteri tıkamak için 10 mm&#39;ye) ilerletin. Oklüzyonun başlama zamanını kaydedin. NOT: LDF cihazı kurulumuBölüm 2.2&#39;de açıklanmıştır. </li><li> Orta serebral arteri 1 saat tıkayın. LDF probunu kesin ve oklüzyon süresince fareleri 30 ° C inkübatörde bırakın. </li></ol></li><li> Reperfüzyon ve APC: <ol><li> Oklüzyonun başlamasından 55 dakika sonra izofluran ile hayvanlara tekrar tekrar anestezi uygulayın. Fareleri sırtüpe yatırın ve sabitleyin. Boyun kesiğini açın ve genel karotid arteri tekrar açın. </li><li> Reperfüzyon elde etmek için oklüzyon periyodundan sonra oftalmik forseps ile hafifçe filaman çekin ve düğümü sıkarak geçici bir dikiş yerleştirin. </li><li> Asidoz tedavisi için, reperfüzyondan sonra 5, 50 ya da 100 dakika ile 20% 5 dakika için CO2,% 20 O2 ve% 60 N2 içeren bir karışım gazlara burun konisi ile inhale gaz değiştirin. Kesiyi kesilmiş bir cerrahi dikişle kapatın. </li><li> Fareler, bilinçliliğini kurtarana kadar 30 ° C&#39;lik bir ısı kafesine yerleştirinVe sonra fareleri temizlemek için tek tek kafeslerine geri verin. Farelere bir Petri tabağı ve nemli yiyecek koyun. Ameliyattan sonra aşırı ağrı ve ölüm için fareleri yakından izleyin. </li></ol></li><li> Beyin Enfarktüsü hacim ölçümü: <ol><li> Reperfüzyondan 24 saat sonraTTC boyaması ile beyin enfarktüsü hacmini ölçün. </li><li> Belirtilen fedakarlık zamanından önce 1.4.1. Adımda belirtildiği gibi% 0.25 TTC solüsyonu hazırlayın. Çözümü, folyo ile kaplanmış 24 oyuklu bir plakaya (oyuk başına 1 mL) aktarın ve 4 ° C&#39;de saklayın. NOT: TTC ile boyanmış TTC ve doku ışığa duyarlıdır. </li><li> Reperfüzyondan 24 saat sonra, bir indüksiyon odasında bir isofluran aşırı dozuyla hayvanı feda edin. Fareleri keselim. Küçük makas ve forseps kullanarak beyinleri ayırın. Willis Çemberi&#39;nde subaraknoid kanama geçirmiş farelerin hariç tutulması için beyinlerin bloğundaki noktaları inceleyin. </li><li> Beyni, -20 ° &#39;de temiz bir cam slayt üzerine yerleştirin<html> ; Buzlu paket. Beyni daha kolay hale getirmek için beyni ve cam sürgüsünü -20 ° C buzdolabında 5 dakika bekletin. </li><li> Beyni ve cam sürgüsünü -20 ° C&#39;den çıkarın ve -20 ° C buz torbasına geri koyun. Frontal direği ve serebellumu bıçak ve forseps ile parçalara ayırın. </li><li> 5 dilim üretmek için beyin bölümlerini bir bıçakla 1 mm kalınlığa yatay olarak dilimleyin. Dilimleri, forseps ile TTC çözeltisi (oyuk başına 1 dilim) içeren 24 yuvalı plakaya aktarın ve çözeltideki dilimleri uzatın. Dilimleri TTC çözeltisi içinde 37 ° C&#39;de sığ bir su banyosunda 30 dakika inkübe edin. </li><li> TTC çözümünü aspire. % 10 formaldehit (oyuk başına 1 mL) ilave edin ve 30 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edin. Dilimleri, bir selofan levha üzerine kesildikleri sırada yerleştirin ve parçaları fotoğrafik plaka görüntüleyiciye tarayın. </li><li> ImageJ analiz yazılımını kullanarak infarkt boyutunu tüm beyin diliminin bir yüzdesi olarak analiz edinLass = &quot;xref&quot;&gt; 8 görsel tanıma dayalı; Bkz. Şekil 2 (sol). </li></ol></li></ol>

<ol><li>Zhao, H., Sapolsky, R. M., Steinberg, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interrupting+reperfusion+as+a+stroke+therapy%3A+ischemic+postconditioning+reduces+infarct+size+after+focal+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Interrupting reperfusion as a stroke therapy: ischemic postconditioning reduces infarct size after focal ischemia in rats.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 26 (9), 1114-1121 (2006).</li>
<li>Leconte, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+hypoxic+postconditioning+protects+against+cerebral+ischemia+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Delayed hypoxic postconditioning protects against cerebral ischemia in the mouse.</a> Stroke. 40 (10), 3349-3355 (2009).</li>
<li>Fan, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+lack+of+glucose+but+not+O2+is+involved+in+ischemic+postconditioning-induced+neuroprotection%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Neurosci+Ther%22%5BJournal%5D)">Transient lack of glucose but not O2 is involved in ischemic postconditioning-induced neuroprotection.</a> CNS Neurosci Ther. 19 (1), 30-37 (2013).</li>
<li>Hess, D. C., Hoda, M. N., Bhatia, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remote+limb+perconditioning+%5Bcorrected%5D+and+postconditioning%3A+will+it+translate+into+a+promising+treatment+for+acute+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Remote limb perconditioning [corrected] and postconditioning: will it translate into a promising treatment for acute stroke.</a> Stroke. 44 (4), 1191-1197 (2013).</li>
<li>Ren, C., Yan, Z., Wei, D., Gao, X., Chen, X., Zhao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limb+remote+ischemic+postconditioning+protects+against+focal+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Limb remote ischemic postconditioning protects against focal ischemia in rats.</a> Brain Res. 1288, 88-94 (2009).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+delayed+remote+limb+ischemic+postconditioning%3A+role+of+mitochondrial+K%28ATP%29+channels+in+a+rat+model+of+focal+cerebral+ischemic+reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Protective effect of delayed remote limb ischemic postconditioning: role of mitochondrial K(ATP) channels in a rat model of focal cerebral ischemic reperfusion injury.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 32 (5), 851-859 (2012).</li>
<li>Li, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remote+limb+ischemic+postconditioning+protects+mouse+brain+against+cerebral+ischemia%2Freperfusion+injury+via+upregulating+expression+of+Nrf2%2C+HO-1+and+NQO-1+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Remote limb ischemic postconditioning protects mouse brain against cerebral ischemia/reperfusion injury via upregulating expression of Nrf2, HO-1 and NQO-1 in mice.</a> Int J Neurosci. , 1-8 (2015).</li>
<li>Fan, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+neuroprotective+strategy+for+ischemic+stroke%3A+transient+mild+acidosis+treatment+by+CO2+inhalation+at+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">A novel neuroprotective strategy for ischemic stroke: transient mild acidosis treatment by CO2 inhalation at reperfusion.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 34 (2), 275-283 (2014).</li>
<li>Shen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PARK2-dependent+mitophagy+induced+by+acidic+postconditioning+protects+against+focal+cerebral+ischemia+and+extends+the+reperfusion+window%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">PARK2-dependent mitophagy induced by acidic postconditioning protects against focal cerebral ischemia and extends the reperfusion window.</a> Autophagy. 0, (2017).</li>
<li>Skolnik, J., Takacs, L., Szende, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+oxygen+consumption+of+slices+from+kidney%2C+brain%2C+cortex+and+liver+in+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">In vitro oxygen consumption of slices from kidney, brain, cortex and liver in hypoxia.</a> Nature. 209 (5020), 305(1966).</li>
<li>Lynch, G., Schubert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+in+vitro.+brain+slices+for+multidisciplinary+studies+of+synaptic+function%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The use of in vitro. brain slices for multidisciplinary studies of synaptic function.</a> Annu Rev Neurosci. 3, 1-22 (1980).</li>
<li>Zheng, S., Zuo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+preconditioning+reduces+purkinje+cell+death+in+an+in+vitro+model+of+rat+cerebellar+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Isoflurane preconditioning reduces purkinje cell death in an in vitro model of rat cerebellar ischemia.</a> Neuroscience. 118 (1), 99-106 (2003).</li>
<li>Yin, B., Barrionuevo, G., Weber, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+real-time+monitoring+of+glutathione+redox+status+in+single+pyramidal+neurons+in+organotypic+hippocampal+slices+during+oxygen-glucose+deprivation+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Optimized real-time monitoring of glutathione redox status in single pyramidal neurons in organotypic hippocampal slices during oxygen-glucose deprivation and reperfusion.</a> ACS Chem Neurosci. 6 (11), 1838-1848 (2015).</li>
<li>Medvedeva, Y. V., Ji, S., Yin, H. Z., Weiss, J. H. <a target="_blank" href="http://www.jneurosci.org/content/early/2016/12/09/JNEUROSCI.3270-16.2016">Differential vulnerability of CA1 vs CA3 pyramidal neurons after ischemia: possible relationship to sources of Zn2+ accumulation and its entry into and prolonged effects on mitochondria.</a> J Neurosci. , (2016).</li>
<li>Pignataro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+and+in+vitro+characterization+of+a+novel+neuroprotective+strategy+for+stroke%3A+ischemic+postconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">In vivo and in vitro characterization of a novel neuroprotective strategy for stroke: ischemic postconditioning.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 28 (2), 232-241 (2008).</li>
<li>Zhang, X., Ding, H. Z., Jiang, S., Zeng, Y. M., Tang, Q. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+study+of+the+neuroprotective+effect+of+propofol+on+hypoxic+hippocampal+slice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Inj%22%5BJournal%5D)">An in vitro study of the neuroprotective effect of propofol on hypoxic hippocampal slice.</a> Brain Inj. 28 (13-14), 1758-1765 (2014).</li>
<li>Niu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+profiling+with+HPLC-FTMS+of+exogenous+and+endogenous+chemicals+susceptible+to+the+administration+of+chotosan+in+an+animal+model+of+type+2+diabetes-induced+dementia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Biomed+Anal%22%5BJournal%5D)">Chemical profiling with HPLC-FTMS of exogenous and endogenous chemicals susceptible to the administration of chotosan in an animal model of type 2 diabetes-induced dementia.</a> J Pharm Biomed Anal. 104, 21-30 (2015).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Burada serebral iskemiye karşı APC&#39;nin nöroproteksiyonunu incelemek için iki deneysel model sunmaktayız. Beyin dilimlerinde APC, reperfüzyon başlangıcından sonra fare kortikostriyat dilimlerini% 20 CO 2 ile kabarcıklar halinde asidik tampon içinde kuluçkaya yatırarak elde edilirken, MCAO modelinde reperfüzyon sonrası farelere% 20 CO 2 soluk aldırarak APC elde edilir. Her iki model de serebral iskemiye karşı APC&#39;nin nörokoruyorumunu yansıtmaktadır. Koruma, iskemik sonrası kondisyon ile elde ...

İnme, dünya çapındaki mortalite ve engelliliğin önde gelen nedenlerinden biridir. Son on yılda inme için etkili tedavileri bulmak için büyük çabalar gösterildi, ancak başarı oldukça yetersiz. Sonradan şartlandırma, iskemik bir aşamayı takiben alttoksik stresler tarafından manipüle edilen bir işlemdir. İskemik, hipoksik, düşük glukoz ve uzak iskemik postkondisyon dahil olmak üzere kondisyon düzeltme, endojen uyarlamalı mekanizmaları tetiklemektedir ve serebral iskemiye karşı umut verici tedaviler olduğu kanıtlanmıştır 1 , 2 , 3 , 4 . Bununla birlikte, iskemik son şartlandırma ek yaralanmaya neden olabilir. Ekstremitenin uzak iskemik son kondisyonu genellikle ipsilateral veya bilateral arka bacaklarda 5 , 6 , 7&#39;de 5-20 dakika oklüzyon ve reperfüzyona ihtiyaç duyar. thBu nedenle, bu kondüsyon sonrası manipülasyonlar klinik uygulamada tehlikeli veya pratik değildir. Bu dezavantajları aşmak için, fareler 8 fokal serebral iskemi için bir tedavi olarak APC geliştirdik. Sadece% 20 CO 2&#39;yi teneffüs ederek indüklenen APC, iskemik beyin hasarını daha uygulanabilir ve daha güvenli bir şekilde önemli ölçüde azaltır. Yakın zamanda APC felç tedavi 9 için APC önemini vurgulayarak, reperfüzyon penceresini genişletir kanıtlamıştır. Burada serebral iskemiye karşı APC&#39;nin nöroproteksiyonunu incelemek için iki deneysel model sunmaktayız. Bunlardan ilki, kortikostriatal dilimdeki oksijen glukoz yoksunluğu (OGD) modelidir. Yapay ortam içine hızlı hazırlanması ve beyin kesitleri devri, genellikle yapay serebrospinal akışkan (ASCF), mümkün in vitro 10 &lt;beyin fonksiyonu çalışma yapar, hücre canlılığı ve nöronal devre korumakSup&gt;, 11 . ASCF&#39;deki OGD, serebral iskemi taklit eder ve iskemik hasar oluşturur 12 , 13 , 14 . OGD&#39;den sonra, beyin dilimleri reperfüzyon sağlamak için düzenli ASCF (r-ASCF) içinde yenilenir ve daha sonra% 20 CO 2 ile kabarmış asidik ASCF kullanılarak APC ile muamele edilir. Kortikostriatal dilim, birincil kültürlenmiş hücrelere kıyasla sağlam histolojik karakterizasyonunu korur. İn vivo olarak beyin fonksiyonunu incelemek için fare orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli kullanılmıştır. Orta serebral arter, ortak karotis atardamarından alevle köreltilmiş bir monofilament yerleştirilerek engellenir. En yaygın vuruş modellerinden biri olan MCAO modeli klinik önemi göstermektedir ve bir monofilamanın uygulanması reperfüzyonu kolaylaştırmaktadır. Reperfüzyon başladıktan sonra% 20 CO 2 içeren normoksik karıĢık gaz teneffüs edilerekN, APC azalmış beyin enfarktüsü hacimleri ile gösterilen serebral iskemiye karşı önemli koruyucu etkiler gösterdi.

<table><tbody><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Sigma</td><td>S5886</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>Sigma</td><td>P5405</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum fosfat monobazik</td><td>Sigma</td><td>P9791</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum sülfat</td><td>Sigma</td><td>M2643</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat</td><td>Sigma</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür dihidrat</td><td>Sigma</td><td>C5080</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glikoz</td><td>Sigma</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>Vibratom</td><td>Leica</td><td>VT1000 S</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-trifeniltetrazolyum hidroklorür</td><td>Sigma</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>Mutlak Etanol</td><td>Aladdin Industrial Corporation</td><td>E111993</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit</td><td>Sigma</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>Lazer Doppler Akış Ölçer</td><td>Bataklık Instruments Ltd</td><td>Model Moor VMS-LDF2</td><td></td></tr><tr><td>Dietil eter susuz</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif Şirketi</td><td>80059618</td><td></td></tr><tr><td>Trikloroasetaldehit hidrat</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif Şirketi</td><td>30037517</td><td></td></tr><tr><td>10% Formalin</td><td>Aladdin Industrial Corporation</td><td>F111936</td><td></td></tr><tr><td>24 kuyulu plakalar</td><td>Jet Biofil</td><td>TCP-010-024</td><td></td></tr></tbody></table>

serebral İskemiye karşı asitik sonrası sonrasyonun sinir korumasını Çalıştırmak için deney modelleri

Experimental Models to Study the Neuroprotection of Acidic Postconditioning Against Cerebral Ischemia

İnme, sınırlı terapötik yaklaşımlarla dünyadaki mortalite ve sakatlığın önde gelen nedenlerinden biridir. Nöroproteksiyon için endojen bir strateji olarak, kondisyon sonrası tedavilerin serebral iskemiye karşı umut verici tedaviler olduğu kanıtlanmıştır. Bununla birlikte, karmaşık prosedürler ve olası güvenlik sorunları, klinik uygulamalarını sınırlar. Bu dezavantajların üstesinden gelmek için deneysel fokal serebral iskemi için bir terapi olarak asidik sonrası düzeltme (APC) geliştirdik. APC iskemi sonrası reperfüzyon esnasında CO2 solunması ile hafif asidoz tedavisi anlamına gelmektedir. Burada APC&#39;yi in vitro ve in vivo olarak yürütmek için sırasıyla iki model sunuyoruz. Farelerin oksijen-glikoz yoksunluğu (OGD) tedavisi ve farelerin kortikostriatal oklüzyonu ve orta serebral arter oklüzyonu (MCAO) serebral iskemiyi taklit etmek için kullanıldı. APC, beyin dilimlerini,% 20 CO 2 ile kabarmış olan asidik tampona aktararak basitçe elde edilebilir;% 20 CO 2 teneffüs fareler tarafından r. APC, doku canlılığı ve beyin enfarktüsü hacmi tarafından yansıtıldığı gibi serebral iskemiye karşı önemli koruyucu etkiler gösterdi.

Yukarıda tarif edilen kortikostriatal dilim modelinde, reperfüzyondan 1 saat sonra, kortikostriatal dilim canlılığı, TTC analizi ile nicelleştirildi. TTC dönüşümü, 490 nm&#39;deki absorpsiyonu kontrol dilimine normalleştirerek hesaplandı. TTC dönüşümüne göre, APC, başlangıç ​​zamanı ve süreye bağlı olarak OGD kaynaklı reperfüzyon hasarına karşı korunmuştur. Ayrıntılı olarak, hem 1 ve 3 dakika asidoz tedavisi, 15 dakika OGD&#39;den sonra 5 dakika içinde yaşama kabiliyetini önemli ölçüde g...

Asitik sonrası kondisyonlama serebral işemiye karşı korur. Burada, APC&#39;yi yürütmek için iki model sunuyoruz. Bu in vitro olarak oksijen glikoz yoksunluğu sonra asidik tampon Kortikostriatal dilimleri aktarılarak ve in vivo olarak orta serebral arter oklüzyonundan sonra% 20 CO2 solunması ile sırasıyla gerçekleştirilir.

Serebral İskemiye Karşı Asitik Sonrası Sonrasyonun Sinir Korumasını Çalıştırmak için Deney Modelleri

Stroke is one of the leading causes of mortality and disability worldwide, with limited therapeutic approaches. As an endogenous strategy for ...

Orta serebral arter oklüzyon modeli içerisindeki bir kortikostriatal kesit modelinde asidoz tedavisinin genel amacı, asidik son koşullamanın serebral iskemiye karşı nöroprotektif etkisini incelemektir. Bu yöntem, asidoz son koşullamanın iskemik beyin hasarını nasıl koruyabileceğine dair temel soruların yanıtlanmasına ve inme tedavisi için yeni stratejiler geliştirilmesine yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, asidoz son koşullamanın nöroproteksiyonunu çalışmak için yaygın olarak mevcut olan deney modellerini kullanabilmektir.Prosedürü, laboratuvarımdan lisansüstü öğrencisi Yarong Zheng uygulamalı olarak gösterecektir. İşleme, başı kesilmiş bir farenin beynini ince bir spatula ile kafatasından çıkararak, yüzde beş karbondioksit ve %95 oksijen ile dengelenmiş, buz soğukluğunda standart ACSF içeren bir behere dikkatlice yerleştirerek başlayın. Vibratome tablasına iki şerit halinde kriyopresipitat yapıştırıcı uygulayın.Beyni desteklemek için, bıçağa en uzak olan yapıştırıcı şeridin üzerine %3'lük agaroz parçası yerleştirin. Ardından, beyni filtre kağıdına aktarmak için pens kullanın. Frontal polü ve serebellumu bir bıçakla kesin.Beyin dokusunu, beyin agarozaya yaslanacak şekilde, boş yapıştırıcı şeridinin üzerine dikey olarak yerleştirin. Beyni tamamen batırmak için kesme haznesine buz gibi soğuk ACSF ekleyin ve buz tutucu alana buz ekleyin. Haznedeki ACSF'nin yüzde beş karbondioksit ve %95 oksijen ile kabarcıklandırılmasını sağlayın.Vibratom kesim kalınlığı 400 mikron olarak ayarlanıp beyin kesme bıçağına göre doğru şekilde konumlandırıldıktan sonra, otomatik kesimi başlatmak için başlat-durdur düğmesine basın. Beş beyin kesitini tek tek aktarmak için ucu kesilmiş bir Pasteur pipeti kullanın ve kesitleri, yüzde beş karbondioksit ve 95% oksijen ile havalandırılmış, buz gibi soğuk standart ACSF içeren doku tutucuya yerleştirin. Oda sıcaklığında 30 dakika bekledikten sonra, sinaptik fonksiyonu geri kazanmaları için beyin kesitlerini 37 °C sıcaklıktaki bir su banyosunda on dakika tutun.Glikozsuz ACSF ve asidik ACSF'yi 37 °C'lik su banyosuna yerleştirin ve çözeltileri sırasıyla %5 karbondioksit ile %95 nitrojen ve %20 karbondioksit ile %80 oksijen ile 30 dakika boyunca köpürtün. Beş beyin kesitinden dördünü dikkatlice önceden ısıtılmış 37 °C'lik glikozsuz ACSF'ye aktarın ve 15 dakika boyunca inkübe edin. Asidik ön koşullandırma için zaman penceresini incelemek amacıyla, bir kesiti doğrudan glikozsuz ACSF'den asidik ACSF'ye aktarın ve diğer üç kesiti reperfüzyon için normal ACSF'ye aktarın.Üç dakika sonra, asidik ACSF içindeki kesiti normal ACSF'ye aktarın. Ardından normal ACSF'de beş dakika beklettikten sonra, normal ACSF'deki kesitlerden birini üç dakika boyunca asidik ACSF içeren doku tutucuya aktarın. Reperfüzyondan 15 dakika sonra bir başka kesiti aynı şekilde aktarın.Glukozsuz ACSF'ye konulan ancak asidik ACSF'ye konulmayan geri kalan kesit, oksijen ve glukoz yoksunluğu grubu olarak belirlenir. Kesitleri ACSF'den, TTC çözeltisi içeren 24 kuyucuklu bir plağın kuyucuklarına aktarın. Kesiti çözelti içerisinde yayın.Ardından, sığ bir su banyosunda 30 dakika boyunca 37 °C'de inkübe edin. Daha sonra dilimleri, folyo ile kaplanmış, temiz ve tartılmış 1,5 mL'lik santrifüj tüplerine aktarın ve dilimlerin kuru ağırlığını ölçün. Tartımdan sonra, tüplere 10:1 hacim-ağırlık oranında, etanol ve dimetil sülfoksit bir bir çözeltisi ekleyerek formazanı ekstrakte edin.Işıktan uzakta 24 saat boyunca inkübe edin. Ertesi gün, etanol dimetil sülfoksit çözeltisini tüplerden 96 kuyucuklu bir plakaya aktarın ve bir plaka okuyucu kullanarak 490 nanometrede absorbansı ölçün. Öncelikle, ayak parmağı sıkıştırma refleksinin yokluğu ile anestezinin uygun şekilde sağlandığını doğrulayın.Ardından, kafatasına LDF probu takılı olan anestezi altındaki fareyi sırt üstü pozisyona getirin ve steril pamuklu iplikler kullanarak sabitleyin. Boynun tıraşlanmış cildini %75 etil alkol ile dezenfekte edin. Daha sonra boyun bölgesinde peri median bir cilt insizyonu yaptıktan sonra, kan damarlarını açığa çıkarmak için yumuşak dokuları pens yardımıyla künt diseksiyona tabi tutun.Açığa çıkarılan dokuların nemli kalması için üzerlerine bir damla salin ekleyin. Ardından, ortak karotis arterini çevre dokulardan ve vagus sinirinden ayırmak için oftalmik pens kullanın. Vagus sinirine zarar vermemeye dikkat edin.Ortak karotid arterin distal ucuna bir mikro damar klempi yerleştirin. Proksimal uca 6-0 ipek sütürle kör düğüm atın. Ardından, geçici bir sütür olarak klembin proksimaline gevşek bir düğüm atın.Ardından, mikro oftalmik makas kullanarak iki düğüm arasında, ölü düğüme mümkün olduğunca yakın küçük bir boylamsal insizyon yapın. Şimdi, 12 mm'lik, ucu küt bir monofilamenti insizyon üzerinden arter lümenine yerleştirin ve birkaç milimetre ilerletin. Gevşek düğümü monofilamentin ucuna doğru sıkın ve ardından klempi çıkarın.Ardından, LDF yazılımı kan akışında keskin bir düşüş gösterene kadar filamanı internal karotis arterine ilerletmek için oftalmik pens kullanın. Oklüzyonun başlangıç zamanını kaydedin. Sonra LDF probunu kesin ve fareyi bir saatlik oklüzyon süresi boyunca 30 derece Celsius sıcaklıktaki bir inkübatöre yerleştirin.Oklüzyon başlangıcından 55 dakika sonra hayvanı isofluran ile tekrar anestezi altına alın ve hayvanı önceki gibi konumlandırın. Ardından boyun insizyonunu açın ve common carotid arteri yeniden açığa çıkarın. Oklüzyon süresinden sonra, reperfüzyonu sağlamak için filamenti oftalmik pens yardımıyla nazikçe çekerek çıkarın.Ardından, düğümü sıkarak geçici dikişi kalıcı dikişe dönüştürün. Asidoz tedavisi için burun konisiyle solunan gazı beş dakika boyunca %20 karbon dioksit, %20 oksijen ve %60 azot olarak değiştirin. Kesi hattını kesintili cerrahi dikişle kapattıktan sonra, fare yeniden bilinci yerine gelene kadar fareyi 30 °C ısıtılmış bir kafese yerleştirin.Bu histogram, bu videoda gösterilen oksijen glikoz yoksunluğu ve asidik postkondisyonlama sonrası kortikal dilimler üzerinde gerçekleştirilen TTC analizinin sonuçlarını göstermektedir. Üç dakikalık asidoz tedavisi, tedavi oksijen glikoz yoksunluğundan hemen sonra veya beş dakika sonra başlatıldığında nöroprotektif etki göstermiş, ancak dilimler 15 dakika boyunca reperfüze edildikten sonra bu etki görülmemiştir. Farelere 60 dakika boyunca orta serebral arter oklüzyonu uygulanmış ve reperfüzyondan sonra beş, 50 veya 100. dakikalarda beş dakika boyunca %20 karbon dioksit solutularak tedavi uygulanmıştır.Enfarkt hacmi, reperfüzyondan 24 saat sonra, siyah noktalı çizgilerle belirtildiği üzere, iki, üç ve beş triphenyltetrazolium hydrochloride boyamasıyla nicelendirilmiştir. Bu histogram, her bir durum için enfarkt hacmi yüzdesini göstermektedir. Asidik son koşullandırmanın sağladığı nöroproteksiyon, başlangıç süresi reperfüzyondan 50 dakika sonraya ertelendiğinde bile güçlü kalmıştır.Buna karşın, 100. dakikada başlatılan asidoz tedavisi iskemik hasarı engellememiştir. Videoyu izledikten sonra, beyin kesitlerinin OGD modelinde ve farelerin MSO modelinde asidoz son koşullandırmasının nörokoruyucu etkilerinin nasıl inceleneceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Prosedürleri uygularken, koruyucu etkilerin tekrarlanabilmesi için asidozun kapsamı ve süresinin çok önemli olduğunu unutmamak gerekir.

experimental-models-to-study-neuroprotection-acidic-postconditioning

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Biz yaralanma başlamasından önce beyni korumak için terapötikler geliştirilmesi için yeni hedefler belirlemeye gelir gibi soğuk önkoşullamanın sorumlu sinir bağışıklık sinyal tanımlamak için arıyorlar. Biz, bu tür çalışma gerektiren, biyolojik sistemler, deneysel manipülasyonlar artı teknik kapasiteleri yüksek tekrarlanabilir ve hassas için stratejiler sunuyoruz.

Soğuk önkoşullamanın nöro-Çalışması için Stratejiler

Orta serebral arter (MCA) ligasyonu, hayvan modellerinde fokal serebral iskemi çalışma bir tekniktir. Bu yöntemde, orta serebral arter kraniotomi maruz kalmaktadır ve koterizasyon tarafından bağlandı. Bu yöntem son derece tekrarlanabilir infarkt hacimleri ve mevcut diğer yöntemlere göre artış post-operatif sağkalım oranları verir.

Fare Daimi Orta Serebral Arter ligasyon Of Uygulama

Kanıt yoktur birikmektedir, bu iskemik ön (PC) - beyne olmayan bir zarar iskemik meydan okuma - bir sonraki zarar iskemik hasara geçici bir koruma bahşeder. Biz C57Bl6 / J farelerde geçici fokal serebral iskemi (orta serebral arter tıkanıklığı, MCAO neden olduğu) için erken iskemik tolerans (IT) ikna etmek için bir ön hazırlık uyarıcı olarak ikili karotis arter tıkanıklığı (BCCAO) kurdu.

Odak Serebral İskemi Erken İskemik Tolerans tetikleyebilecek bir Yeterli Önkoşullama Uyarıcı olarak bilateral Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı

Kaynak: Zheng, Y., et al. Serebral iskemiye karşı asidik son koşullandırmanın nöroproteksiyonunu incelemek için deneysel modeller. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, orta serebral arter tıkanıklığının (MCAO) bir fare modelinde iskemik hasara karşı nöroprotektif etkilerini değerlendirmek için asidik son koşullandırma (APC) uygulamasını göstermektedir. MCAO modelinde reperfüzyonda yer alan adımları ve eksitotoksisite, oksidatif stres ve nöronal ölümü azaltmak için reperfüzyon sırasında APC uygulamasını...

 Serebral İskeminin Bir Fare Modelinde Asidik Postkoşullandırmanın Nöroprotektif Etkilerinin Değerlendirilmesi

Kaynak: Brandli, A. Uzaktan Ekstremite İskemik Ön Koşullandırma: Kemirgenlerde Nöroprotektif Bir Teknik. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, sistemik nöroproteksiyonu indüklemek için sıçanlarda non-invaziv bir ekstremite iskemik ön koşullandırma protokolünü göstermektedir. Prosedür, koruyucu faktörleri serbest bırakan hücresel stres yollarını tetikleyen kontrollü arteriyel oklüzyon ve reperfüzyonu içerir. Bu faktörler beyin ve retina gibi uzak organlarda iskemik ve metabolik yaralanmalara karşı...

Nöroproteksiyon için Bir Sıçan Modelinde Non-İnvaziv Ekstremite İskemik Ön Koşullandırma

Biz eksitotoksisite kaynaklı beyin hasarı dahil moleküler mekanizmaları incelemek için kullanılabilecek bir beyin kesit modeli geliştirdik. Bu teknik açıdan olgun beyin dokusunu oluşturur ve kısmen sağlam nöronal devreleri, hücresel etkileşimleri ve postsinaptik bölmeleri korurken, deney için gerekli olan hayvan sayısı azalır.

Bir olarak Beyin Microslices arasında excitotoxic uyarılması<em&gt; In vitro</em&gt; İnme Model

Bu protokol, farelerde geçici orta serebral arter tıkanıklığını takiben enfarktüs hacimlerini ve kan-beyin bariyeri bozulmasını azaltan tekrarlayan hipoksik ön koşullandırmayı veya sistemik hipoksiye kısa süreli maruziyetleri tanımlar. Ayrıca, nörovasküler korumanın etkinliğini değerlendirmek için inme sonrası enfarktüs hacminin ve kan-beyin bariyeri bozulmasının ikili miktar tayinini detaylandırır.

Farelerde Tekrarlanan Hipoksik Önkoşullanma ve Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ardından Nörovasküler Koruma Kantitasyonu

Burada iç karotis arter üzerinden orta serebral arter yuvasını kapatıp tarafından fareler sonrası felç depresyon teşvik etmek için bir protokol sunuyoruz. İndüklenen depresif ruh hali onaylamak ve değerlendirmek için Porsolt zorla yüzme testi ve sakaroz tercih testi kullanıyoruz.

Farelerde inme sonrası depresyon Inducing için orta serebral arter tıkanıklığı tekniği

Bu çalışmanın amacı, 1-90 sonrası orta serebral arter oklüzyonu/reperfüzyonu (MCAO/R) sonrası beyin enfarktüsü ve sensorimotor fonksiyonunu test ederek beyin iskemisinin iyileşme ve sekel evrelerinde araştırma için bir hayvan modeli oluşturmak ve doğrulamaktır. farelerde gün.

Sıçanlarda Akut İnme Sonrası Beyin İyileşmesini Değerlendiren Bir Preklinik Model

Bu protokol, modifiye edilmiş dört damar oklüzyon yöntemi kullanılarak bir serebral iskemik koma modelini indükleme sürecini açıklar.

Modifiye Dört Damar Oklüzyonu ile İndüklenen Serebral İskemik Koma Modeli

Öğrenin serebral iskemiye karşı asidik sonrası sonrasyonun sinir koruma etkilerini fare orta serebral arter oklüzyonu ve kortikostriatal kesit modelleri kullanarak. Bu yöntem inme tedavisi için yeni stratejiler geliştirmeye yardımcı olur.

Serebral İskemiye Karşı Asitik Sonrası Sonrasyonun Sinir Korumasını Çalıştırmak için Deney Modelleri

Daha fazla video keşfet