Name: İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi ve dış saç hücre bütün hücreli yama kelepçe kayıt Doğum sonrası sıçanlarda (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-24T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Öğrenin işitsel beyin sapı yanıtı ve dış saç hücre bütün hücreli yama kelepçe kayıt yöntemlerini doğum sonrası sıçanlarda koklear işlev gelişimini araştırmak için. Bu teknik tek tek hücrelerin elektrofizyolojik özelliklerini değerlendirmeye olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser hibe 973 programı (2014CB943002) ve Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin (11534013, 31500841) tarafından desteklenmiştir.

Hayvan konular içeren tüm deneysel protokoller Güney Tıp Üniversitesi hayvan Etik Komitesi tarafından kabul edildi.
1. deney için çözümleri hazırlayın
<ol><li>Anestezi hazırlamak ( Tablo malzemelerigörmek): % 1.5 Fentobarbital sodyum çözünmüş GKD2' O.</li>
	<li>Diseksiyon çözüm hazırlamak ( Tablo malzemelerigörmek): bir GKD2O. ayarlama pH 7,3 için 1 L 1 M NaOH ile Leiboviz'ın L-15 toz torba geçiyoruz. OSMOLARİTE 300-330 mOsm için bir osmometer ve 10 mM HEPES kullanmadan önce kullanarak ayarlayın.</li>
	<li>2 mg/mL collagenase IV dağıtılması ( Tablo malzemelerigörmek) 1.2 adımda hazırlanan diseksiyon solüsyona.</li>
	<li>(Bkz: Malzemeler tablo) immunostaining çözümleri hazırlamak: fosfat tamponlu tuz (PBS) % 4 paraformaldehyde geçiyoruz. Dikkat: Paraformaldehyde toksik; uygun koruma giymek.</li>
	<li>PBS % 0,3 geçirgenliği Ajan sulandırmak. PBS % 10 normal keçi serum engelleme tampon olarak sulandırmak. Prestin antikor 1: 200 engelleme arabelleği sulandırmak. Alexa488 Birleşik antikor 1:600 engelleme arabelleği sulandırmak. Phalloidin-Tetramethylrhodamine B isothiocyanate 1: 200, PBS sulandırmak.</li>
	<li>Hücre dışı çözüm hazırlamak ( Tablo malzemelerigörmek): Leiboviz'ın L-15 orta (yukarıdaki adım 1.2) açıklandığı şekilde hazırlayın.</li>
	<li>Hücre içi çözüm hazırlamak ( Tablo malzemelerigörmek).</li>
</ol>2. ABR kayıt
Not: ABR kayıt daha önce ayrıntılı bizim önceki çalışma9olarak tarif edilmiştir.
<ol><li>Sprague Dawley (SD) fareler (1-14 gün eski pups ve 2 - ay yaşlı yetişkinler, her iki cinsiyette) % 1.5 sodyum Fentobarbital (22 mg/kg için yavru ve yetişkin, mayi için 30 mg/kg (IP)) tek bir enjeksiyon ile anestezi.</li>
	<li>İmzalat hayvan hayvanın vücut hareketsiz için Polietilen köpük kalıp içine yerleştirin. Hayvan ses inceltiyorum oda bir anti-titreşim tablosunda yerleştirin. Hayvanın vücut sıcaklık 37,5 ° C bir ısıtma yastığı ile tutun.</li>
	<li>% 70 (vol/vol) etanol ile baş alanı silin. İyi makas kullanarak, bir 1-2 mm kesi ventrolateral referans elektrot veya yere yerleştirmek için dış pinna için yapın. (Elektrot kayıt) bir deri altı iğne elektrot (Şekil 1A) kafatası tepe üzerinde yer alır.</li>
	<li>İşlev üreteci kullanarak oluştur kalibre edilmiş sesi patlamaları (1 ms yükselme/düşme, 3 ms Yaylası) çeşitli frekansları (2, 4, 8, 16, 24 ve 32 kHz) ve yoğunluklarda (5 dB adımda 10 dB SPL için 85 azalmış). Frekans ve genlik el ile farklı farklı veya bir bilgisayar kullanarak. 10 cm uzakta hayvan Başkanı doğru yer alan bir elektrostatik hoparlöründen ses uyaranlara teslim.</li>
	<li>(100-1000 Hz) filtre ve bir çok fonksiyonlu işlemci ABR'lerden almak için (256 kere) ses elicited potansiyel kullanarak ortalama yükseltmek. ABR izlemeler çevrimiçi ve çevrimdışı analiz için saklı izlenir. Bir hayvan kayıt ABR tamamlamak için yaklaşık 40 dakika sürer. Not: genellikle, üç ila yedi tepeler (dalga ben dalga VII) gecikme süreleri ile 15 ms olabilir daha az (Şekil 1B) tespit. ABR eşik hangi dalga ı ve II tespit edilebilir en düşük ses seviyesi tanımlanır.</li>
	<li>Anestezi (ile 0.3 mL % 1.5 sodyum Fentobarbital mayi bir enjeksiyon) üzerinden uyanık hayvanlar önce ötenazi.</li>
</ol>3. Organ of Corti (OC) diseksiyon
<ol><li>Fare pups anestezi. İçin rats az 6 günlük (< P6), hayvan bir 100 mm Kültür çanak tutmak ve 10 min için buz ile çanak kapağı. Fareler için > P6, % 1.5 sodyum Fentobarbital (22 mg/kg, IP) tek bir enjeksiyon hayvanla anestezi. Fare pups anestezi sonra başını kesmek.</li>
	<li>Baş % 70 (vol/vol) etanol ile püskürtülerek sterilize.</li>
	<li>Kafatası sagittal orta çizgi boyunca makasla açın; beyin iç kulak ortaya çıkarmak için kaldırın.</li>
	<li>İç kulak içine buz gibi L-15 (Şekil 2A) 3 mL ile dolu 35-mm Petri kabına aktarın.</li>
	<li>Diseksiyon mikroskop altında iyi forseps koklea (Şekil 2B) kemikli kapsül kaldırmak için kullanın.</li>
	<li>OC paketini açmak ve çizikleri vascularis (SV) modiolus üzerinden ilişkili.</li>
	<li>Tutarak SV ile forseps, bazal bölümünü ayrı OC SV tamamen tarafından yavaş yavaş gevşemek Bankası-için-apex (Şekil 2C).</li>
	<li>OC eşit iyi makas (Şekil 2B) kullanarak üç parçalar halinde kesin.</li>
</ol>4. ayirt boyama
<ol><li>200 µL pipet ucu kullanarak, OC (adım 3.8) kesimleri bir cam slayt üzerine transfer ve % 4 paraformaldehyde için en az 4 h 4 ° C'de 100 µL ile saptamak Dikkat: Paraformaldehyde toksik; uygun koruma giymek.</li>
	<li>Doku paraformaldehyde ile taze PBS 100 µL yerinden tarafından yıkayın. Doku 10 min için üç kez yıkayın.</li>
	<li>Oda sıcaklığında 30 dk için PBS içinde % 0,3 geçirgenliği Ajan dokuyla kuluçkaya.</li>
	<li>PBS geçirgenliği Ajan atın ve doku üç kez PBS ile yıkayın.</li>
	<li>Oda sıcaklığında 1 h için PBS içinde % 10 normal keçi serum ile engelleyin.</li>
	<li>Oda sıcaklığında veya 4 ° C'de 2 h için çözüm gecede kapatmaktır anti-prestin-C-terminus antikor (1: 200) ile kuluçkaya.</li>
	<li>Üç kez PBS ile 5 dakika yıkayın.</li>
	<li>Alexa488-Birleşik ikincil antikorlar ile (1:600) içinde belgili tanımlık karanlık oda sıcaklığında 1 h için engelleme çözümde kuluçkaya.</li>
	<li>Üç kez karanlıkta 5 min için PBS ile yıkayın.</li>
	<li>Rodamine-phalloidin (1: 200) ile karanlık oda sıcaklığında 10 dakika için kuluçkaya.</li>
	<li>Üç kez karanlıkta 5 min için PBS ile yıkayın.</li>
	<li>Bir cam slayt üzerinde (DAPI içeren) montaj orta ile bağlayın. 405 kullanarak confocal mikroskobu ile görüntü nm, 488 nm ve 594 nm lazerler. Lazer güç 0.1-0,5 ayarla mW ve tarama hızı 0.5 kare/s.</li>
</ol>5. yama kelepçe izole OHCs kayıt
<ol><li>Yama yapmak için mikro-kalpazan uç çapı ile pipettes 2-3 µm. geri dolgu ile hücre içi çözüm Pipetler ve pipet çektirmenin kullanın. Genellikle, yama pipet ilk direnç 2.5-3.5 MΩ banyo çözüm oldu.</li>
	<li>200 µL pipet ucu kullanarak, OC (Kimden adım 3.8) bir parça bir 35 mm Petri kabına aktarın. Enzimatik sindirim orta 100 µL dokuyla sindirmek (collagenase IV, bkz: Malzemeler tablo) Oda sıcaklığında 5 min için.</li>
	<li>L-15 100 µL ile enzimatik sindirim orta yerinden. Doku saç hücreleri izole etmek için mikro neşter kullanarak küçük parçalar halinde kesin.</li>
	<li>Nazik pipetting sonra hücreleri bir ev yapımı küçük plastik odasına aktar (çapı ~ 1,5 cm) enzimi içermeyen banyo çözüm ile dolu (~ 1,5 mL, Tablo malzemelerigörmek).</li>
	<li>Odası ters bir mikroskop sahnesinde yerini. Sağlıklı görünen yalnız OHCs bulmak.</li>
	<li>Yama pipet 700B amplifikatör baş sahne içine yükleyin. Yama pipet dikkatli bir micromanipulator tarafından hareket ve dış saç hücresi (Şekil 3A) alt konumlandırın.</li>
	<li>Bütün hücre yama kelepçe hücre vücut lateral duvarına mühürleyerek OHC. Hücre zarı yırtıldı kadar ışık emici uygulamak. Holding-70 potansiyel ayarla mV. Hücreleri için 17 MΩ 10 değişiyordu erişim direnç ve membran direnç için 500 MΩ 100 değişiyordu ve başarılı bir bütün-hücre yapılandırma olarak kabul edilir.</li>
	<li>Bilgisayar kontrolü, kullanarak uygulama hyperpolarizing ve gerilim depolarize (250 ms süresi ve −140 + 94 için değişen 13 mV adımda mV) bütün hücreli akımları temin için hücreye.</li>
	<li>Bütün hücre akımları yükseltmek, 700B amplifikatör tarafından (5 kHz Frekans köşe) filtre. 1440A converter ve çevrimdışı analiz için mağaza tarafından verileri dönüştürmek.</li>
	<li>Bir yama kelepçe yazılım tarafından kontrollü bir iki sinüs dalga gerilim uyarıcı iletişim kuralı kullanılarak OHCs membran kapasitans ölçmek. Stimulate voltajı 110 -140 ayarla mV. Çevrimdışı analizleri için veri depolar.</li>
</ol>

<ol><li>He, D. Z., Zheng, J., Kalinec, F., Sacchi Kakehata, S. S. antos-, J, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+in+to+the+amazing+outer+hair+cell%3A+membrane+wizardry+with+a+twist+and+shout%5BTitle%5D)+AND+%22J+Membr+Biol%22%5BJournal%5D)">Tuning in to the amazing outer hair cell: membrane wizardry with a twist and shout.</a> J Membr Biol. 209, 119-134 (2006).</li>
<li>Dallos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cochlear+amplification%2C+outer+hair+cells+and+prestin%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Cochlear amplification, outer hair cells and prestin.</a> Curr Opin Neurobiol. 18, 370-376 (2008).</li>
<li>Zheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prestin+is+the+motor+protein+of+cochlear+outer+hair+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Prestin is the motor protein of cochlear outer hair cells.</a> Nature. 405, 149-155 (2000).</li>
<li>Abe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+expression+of+the+outer+hair+cell+motor+prestin+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Membr+Biol%22%5BJournal%5D)">Developmental expression of the outer hair cell motor prestin in the mouse.</a> J Membr Biol. 215, 49-56 (2007).</li>
<li>Waguespack, J., Salles, F. T., Kachar, B., Ricci, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stepwise+morphological+and+functional+maturation+of+mechanotransduction+in+rat+outer+hair+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Stepwise morphological and functional maturation of mechanotransduction in rat outer hair cells.</a> J Neurosci. 27, 13890-13902 (2007).</li>
<li>Zhang, L. I., Bao, S., Merzenich, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+and+specific+influences+of+early+acoustic+environments+on+primary+auditory+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Persistent and specific influences of early acoustic environments on primary auditory cortex.</a> Nat Neurosci. 4, 1123(2001).</li>
<li>De, V. -S. E., Chang, E. F., Bao, S., Merzenich, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+period+window+for+spectral+tuning+defined+in+the+primary+auditory+cortex+%28A1%29+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Critical period window for spectral tuning defined in the primary auditory cortex (A1) in the rat.</a> J Neurosci. 27, 180-189 (2007).</li>
<li>He, D. Z., Evans, B. N., Dallos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+appearance+and+development+of+electromotility+in+neonatal+gerbil+outer+hair+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Res%22%5BJournal%5D)">First appearance and development of electromotility in neonatal gerbil outer hair cells.</a> Hearing Res. 78, 77-90 (1994).</li>
<li>Hang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synchronized+Progression+of+Prestin+Expression+and+Auditory+Brainstem+Response+during+Postnatal+Development+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Plast%22%5BJournal%5D)">Synchronized Progression of Prestin Expression and Auditory Brainstem Response during Postnatal Development in Rats.</a> Neural Plast. , 4545826(2016).</li>
<li>Ehret, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+absolute+auditory+thresholds+in+the+house+mouse+%28Mus+musculus%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Audiol+Soc%22%5BJournal%5D)">Development of absolute auditory thresholds in the house mouse (Mus musculus).</a> J Am Audiol Soc. 1, 179-184 (1976).</li>
<li>Møller, A. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aM%C3%B8ller%2C+AR+%22Hearing%3Aanatomy%2C+physiology%2C+and+disorders+of+the+auditory+system%22">Hearing:anatomy, physiology, and disorders of the auditory system</a>. , Academic Press. Dallas. (2006).</li>
<li>He, D. Z., Zheng, J., Edge, R., Dallos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+cochlear+inner+hair+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Res%22%5BJournal%5D)">Isolation of cochlear inner hair cells.</a> Hearing Res. 145, 156-160 (2000).</li>
<li>Tang, J., Pecka, J. L., Tan, X., Beisel, K. W., He, D. Z. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+Pendrin+Protein%2C+an+Anion+Transporter+and+Molecular+Motor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biological+Chem%22%5BJournal%5D)">Engineered Pendrin Protein, an Anion Transporter and Molecular Motor.</a> J Biological Chem. 286, 31014-31021 (2011).</li>
<li>Fu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effects+of+Urethane+on+Rat+Outer+Hair+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Plast%22%5BJournal%5D)">The Effects of Urethane on Rat Outer Hair Cells.</a> Neural Plast. 2016, 1-11 (2016).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Rat 11 gün genç, yanıt olarak ses stimülasyon yok Aksiyon potansiyeli işitsel korteks6,7' gözlenen. Bu nedenle, postnatal gün 11 "işitme başlangıçlı"10tanımlanır. İşitme başlangıçlı henüz de incelenmiştir değil önce işitme fonksiyonu geliştirilmesi. Benzer yöntem yetişkin ABR kaydı için kullanarak, biz saf ton veri bloğu fare pups P11 genç dan tarafından ABR'ler elde edildi göstermek (Şekil 1). Ancak, fare pup...

Koklear duyu saç hücreleri iki farklı işlevi memeli işitme için önemlidir: mechanoelectric iletim (MET) ve electromotility1,2. Saç demeti, IHCs (IHCs) ve OHCs dönüştürmek ses titreşim membran olası değişiklikleri içine yanı sıra içinde elektrik sinyallerini innervated sarmal ganglion nöronların bulunan MET kanalları tarafından. OHCs onların hücre membran potansiyeli ile değiştirmek ve düşük seviyeli Ses titreşimi yükseltmek. Electromotility olarak adlandırdığı bu faaliyet OHCs3lateral duvarında bulunan motor protein prestin tarafından türetilmiştir.
Kemirgenler de dahil olmak üzere birçok tür, işitme fonksiyonu erken postnatal dönem4,5' te olgunlaşmamış. Hiç aksiyon potansiyeli seda cevaben önce işitme başlangıçlı6,7işitsel korteks tespit edilemedi. Morfoloji gelişimi ve koklea fonksiyonu, yaygın olarak fare, fare ve sıçan4,5,8çalışılmıştır. Mechanotransduction ve electromotility saç hücrelerinin de erken gelişmiştir hayat dönemi5.
Fareler işitme duyarlılığını farklı postnatal yaş değerlendirmek için fare pups içinde kayıt İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi (ABR) için bir yöntem geliştirdi. Bütün hücre yama kelepçe OHCs electrophysiologically araştırmak için ideal bir teknolojidir. Ancak, sinir hücreleri ve diğer epitelyal hücreler yıllarındaki yama kelepçe ile karşılaştırıldığında, tüm hücreli sızdırmazlık oranı düşük izole OHCs electromotility incelenmesi sınırlı.
Burada OHCs morfolojik ve electrophysiologically Doğum sonrası fareler gelen akut Disosiye koklea içinde araştırmak için bir yordam açıklanmaktadır. Bu yöntem iç saç hücre gelişimi ve işlev düzenleyen moleküler mekanizmaları incelemek için değiştirilebilir.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Anestezik< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital sodyum</td><td>Sigma</td><td>P3761</td><td>suda% 1.5</td></tr> <tr><td>< güçlü > İsim< / güçlü > <</td> <td>güçlü > Şirket< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Katalog Numarası< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Yorumlar< / güçlü</td></tr> <tr><td>> < güçlü >Diseksiyon çözeltisi< / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leiboviz'in L-15 Orta Yaşam</td><td>Teknolojileri</td><td>41300-039</td><td>1 L suda 1 paket</td></tr><tr><td>Kollajenaz IV</td><td>Sigma</td><td>C5138</td><td>L-15 HEPES</td></tr><tr><td></td><td>Sigma</td><td>7365-45-9</td> içinde 2 mg / mL <td>10 mM</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Yorumlar</ güçlü></td></tr><tr><td><güçlü>İmmün boyama solüsyonları</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010023</td><td>PH 7.3</td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma</td><td></td><td>PBS'de 158127 %</td></tr><tr><td>4 Triton X-100</td><td>Amresco</td><td>ZS-0694</td><td>PBS'de %0.3</td></tr><tr><td>Normal keçi serumu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10000C</td><td>PBS'de %10</td></tr><tr><td>prestin antikoru</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-22694</td><td>dil 1:200</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488-konjuge antikor</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11055</td><td>dil 1:600</td></tr><tr><td>Phalloidin-Tetrametilrodamin B izotiyosiyanat</td><td></td><td>Sigma P1951</td><td>dil 1:200</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Solarbio</td><td>C0060</td><td>dil 1:20</td></tr><tr><td>Name</td><td> Şirket</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Extracellular solution</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leiboviz's L-15 Orta Yaşam Teknolojileri</td><td></td><td>41300-039</td><td>1 paket in 1 L su</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>7365-45-9</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company<</td><td>strong>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Hücre içi çözüm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CsCl</td><td>Sigma</td><td>7647-17-8</td><td>140</td></tr><tr><td>mM MgCl2</td><td>Sigma</td><td>7791-18-6</td><td>2 mM</td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma</td><td>67-42-5</td><td>10 milyon</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>7365-45-9</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</strong</td></tr><tr><td>>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Osmometer</td><td>Gonotec</td><td>OSMOMAT 3000 basic</td><td></td></tr><tr><td>Forcep</td><td>WPI</td><td>14095</td><td>Cımbız dumont</td></tr><tr><td>Mikropipet çektirme</td><td>Sutter Aleti</td><td>MODLE-P97</td><td></td></tr><tr><td>Micro Forge</td><td>Narishigen</td><td>MF-830</td><td></td></tr><tr><td>Mini İşletim Sistemi</td><td>Sutter Aleti</td><td>MP-285</td><td></td></tr><tr><td>MultiClamp</td><td>Axon</td><td>700B</td><td></td></tr><tr><td>Düşük Gürültülü Veri Toplama Sistemi</td><td>Axon</td><td>1440A</td><td></td></tr><tr><td>ES1 konuşmacı</td><td>Tucker-Davis Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TDT sistemi 3</td><td>Tucker-Davis Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</strong</td></tr><tr><td>>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>SigGenRP yazılımı</td><td>Tucker-Davis Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BioSigRP yazılımı</td><td>Tucker-Davis Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>jClamp</td><td>Scientific Solutions</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Yorumlar</strong</td></tr><tr><td>>Hayvan</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>SD rat</td><td>Güney Tıp Üniversitesi</td><td></td><td></td> Deney Hayvanları Merkezi</tr></tbody></table>

İşitsel beyin sapı davranım odyometrisi ve dış saç hücre bütün hücreli yama kelepçe kayıt doğum sonrası sıçanlarda

Auditory Brainstem Response and Outer Hair Cell Whole-cell Patch Clamp Recording in Postnatal Rats

Dış saç hücre duyu saç hücreleri memeli koklea içinde iki tür biridir. Onlar kendi cep uzunluğu reseptör alt düzey ses sinyalinin zayıf titreşim yükseltmek için potansiyel ile değiştirin. Morfoloji ve dış saç hücrelerinin (OHCs) elektrofizyolojik özelliği erken postnatal yaşlarda geliştirmek. Dış saç hücre olgunlaşma işitme sisteminin gelişimine katkıda bulunabilir. Ancak, OHCs geliştirme sürecinin de incelenmiştir değil. Bunun nedeni kısmen zorluk işlevlerine elektrofizyolojik bir yaklaşım tarafından ölçmek için olmasıdır. Yukarıdaki sorunu gidermek için basit bir yöntem geliştirmek amacı ile burada biz OHCs işlevinde akut Disosiye koklea postnatal fareler üzerinden çalışmak için adım adım bir protokol tanımlamak. Bu yöntemle, saf ton uyaranlara koklear yanıtı değerlendirmek ve ifade düzey ve OHCs motor protein prestin işlevini inceleyin. Bu yöntem aynı zamanda iç saç hücreleri (IHCs) araştırmak için kullanılabilir.

ABR saf ton patlamaları (Şekil 1A) kullanarak imzalat fare pups postnatal gün 7 büyük (P7) elde edildi. Şekil 1B, sadece üç-dört ayrı dalgalar küçük genlik ile gösterdi fare pups elde edilen ABR dalga biçimleri gösterildiği gibi. Genellikle, en fazla yedi tepeler Yetişkin hayvanlar (Şekil 1B) ABR dalga biçimleri gözlendi.
Aşağıdaki immunost...

Bu iletişim kuralı İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi postnatal fare pups üzerinden kaydetmek için yöntemler açıklanır. Dış saç hücreleri fonksiyonel gelişimi incelemek için tüm hücreli yama kelepçe dış saç hücreleri izole kayıt deneysel işlemin adım adım açıklanmıştır.

İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi ve dış saç hücre bütün hücreli yama kelepçe kayıt Doğum sonrası sıçanlarda

The outer hair cell is one of the two types of sensory hair cells in the mammalian cochlea. They alter their cell length with the receptor potential to ...

Bu elektrofizyolojik testin genel amacı, doğum sonrası gelişim sırasında koklear saç hücrelerinin morfolojik ve fonksiyonel değişikliklerini araştırmaktır. Bu yöntem, işitsel asistan departmanı alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir: İşitmenin başlangıcında saç hücrelerimiz işlevlerini ne zaman kazanır? Bu tekniğin ana avantajı, doğum sonrası sıçan yavrularından izole edilen bireysel saç hücrelerinin işlevini değerlendirebilmemizdir.Prosedürü gösterenler, laboratuvarımızdan öğrenciler olan Wenlu Pan, Shasha Guo ve Nana Xu olacak. Bu işleme başlamak için, uyuşturulmuş hayvanı, hayvanın vücudunu hareketsiz hale getirmek için bir polietilen köpük kalıba yerleştirin. Ardından, hayvanı ses azaltıcı bir odada titreşim önleyici bir masaya yerleştirin.Bir ısıtma yastığı ile hayvanın vücut ısısını 37,5 santigrat derecede tutun. Ardından, baş bölgesini %70 etanol ile silin. Referans elektrodu veya toprak elektrodunu yerleştirmek için dış kulak kepçesine ventral lateral olarak bir ila iki milimetrelik bir kesi yapın.Ardından, kafatasının tepe noktasına bir subdermal kayıt elektrodu yerleştirin. Fonksiyon üretecini kullanarak, çeşitli frekans ve yoğunluklarda kalibre edilm

auditory-brainstem-response-outer-hair-cell-whole-cell-patch-clamp

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Memeli koklea iç saç hücresi şerit sinaps işitsel sinir lifi dendritler Tüm hücre yama klemp kayıtları.

Koklear İç Saç Hücreleri Ulaşın Afferent Dendritler postsinaptik Kayıtlar: Şerit Synapse Multivesicular Yayın İzleme

Electromotility, yavaş motilite ve eğilme gibi dış tüy hücresi (OHC) hareketli yanıtları, araştırmak için güvenilir bir yöntem açıklanmıştır. OHC motilite harici bir alternatif elektrik alan stimülasyonu ile ve yöntemi, yüksek hızlı görüntü kaydı, LED tabanlı aydınlatma, ve son nesil görüntü analiz yazılımı yararlanır.

Harici Alternatif Elektrik Alan Uyarılma ve Görüntü Analizi Yüksek hızlı bir kombinasyonu ile Dış Saç Hücre Motilite incelenmesi

Bu videonun amacı yetişkin zebrafish iç kulak organları sağlıklı, bozulmamış saç hücreleri elde etmek ve daha sonra kendi voltaj kapılı kanallar biyofiziksel özelliklerini karakterize yönelik yama klemp çalışmaları için bunları kullanarak prosedürleri göstermektir.

İç Kulak Saç Hücreleri Patch Clamp Kayıtlar İzole Zebrafish gelen

Bu video, sıçan yavrularından işitsel beyin sapı tepkilerini (ABR'ler) kaydetmek için bir yöntem göstermektedir. Nöral tepkileri değerlendirmek için beyin sapında elektrot yerleştirme, ses uyaran uygulaması ve sinyal işleme analizi adımlarını ana hatlarıyla belirtir.

Bir Sıçan Yavrusunda İşitsel Beyin Sapı Tepkilerinin Kaydedilmesi

Bu video, işitme engelli bir fareye koklear cihaz yerleştirme ve işitsel beyin sapı tepkilerini kaydetmek için elektriksel uyaranlar uygulama prosedürünü göstermektedir. Bu prosedür, elektriksel işitmenin temel mekanizmalarının anlaşılmasını sağlar ve koklear implant teknolojisi ve işitsel sinirbilimdeki ilerlemelere katkıda bulunabilir.

Sağır Olmuş Bir Farede Elektrikle Uyarılmış İşitsel Beyin Sapı Tepkilerinin Kaydedilmesi

Bu video, iç kulak duyusal nöron hücre gövdelerindeki iyonik akımları ölçmek için yama-kelepçe tekniğini göstermektedir. Hücre içi koşulları korurken iyon hareketine izin vermek için zarı delen amfoterisin B içeren dahili bir çözelti ile doldurulmuş cilalı bir yama kelepçeli pipetin hazırlanmasını ve kullanımını detaylandırır. Voltaj darbeleri, iyon kanalı aktivitesini tetiklemek ve kaydetmek için uygulanır ve özellikleri ve davranışları hakkında bilgi sağlar.

İç Kulak Duyusal Nöron Hücre Gövdelerinin Delikli Yama-Klemp Kayıtları

Bu video, reobaz ve membran potansiyelini ölçmek için yama kelepçesi tekniği kullanılarak dorsal kök gangliyonlarındaki duyusal nöron uyarılabilirliğinin incelenmesini ve nöronların artımlı akım enjeksiyonlarına tepkilerini analiz etmeyi göstermektedir.

Sağlam Sıçan Dorsal Kök Gangliyonlarında Tüm Hücre Yama Kelepçesi Kayıtları

Bu el yazması, yama kelepçesi kayıtları için sağlam dorsal kök gangliyonlarının nasıl hazırlanacağını açıklar. Bu hazırlık, nöronlar ve uydu glial hücreler için mikro çevreyi korur, böylece ayrışmış DRG nöronları kullanılarak görülen fenotipik ve fonksiyonel değişikliklerden kaçınır.

Yetişkin Rats gelen bozulmamış Dorsal Kök Ganglia üzerinde Patch Kelepçe Kayıtlar

Biz bir teknik trans-tympanic rota üzerinden uyuşturucu yerelleştirilmiş yönetim koklea içine için mevcut. Bu rota üzerinden ilaç dağıtım gibi sisplatin kemoterapi ilaçların anti-kanser etkinliği ile müdahale olmaz.

Trans-Tympanic ilaç dağıtım ototoksisite tedavisi için

Beyin sapı uyarılmış reaksiyon odyometrisi klinik nörofizyolojide önemli bir araçtır. Günümüzde hem farmakolojik hem de genetik hayvan modellerini içeren temel bilim ve preklinik çalışmalarda beyin sapı uyarılmış yanıt Odyometri de uygulanır. Burada işitme beyin tepkileri yanıtlarının farelerde nasıl başarıyla kaydedilip analiz edileceğini ayrıntılı bir şekilde tarif ediyoruz.

Farelerde beyin sapı uyarılmış yanıt odyometrisi veri edinme ve Analizi

Burada, iç kulağın vestibüler ganglion ve spiral ganglion nöronlarından diseksiyon, ayrıştırma, kültürleme ve yama-klemp kaydı için ayrıntılı talimatlar sağlayan yöntemler sunulmaktadır.

Patch-Clamp Kayıtları için Yenidoğan Kemirgenlerinden Vestibüler ve Spiral Ganglion Somata'nın İzole Edilmesi ve Kültürlenmesi

Öğrenin işitsel beyin sapı yanıtı ve dış saç hücre bütün hücreli yama kelepçe kayıt yöntemlerini doğum sonrası sıçanlarda koklear işlev gelişimini araştırmak için. Bu teknik tek tek hücrelerin elektrofizyolojik özelliklerini değerlendirmeye olanak tanır.

İşitsel Beyin Sapı Davranım Odyometrisi ve dış saç hücre bütün hücreli yama kelepçe kayıt Doğum sonrası sıçanlarda

Daha fazla video keşfet