Name: Doku mühendisliği uygulamaları için bitki dokuların Decellularization için iki yöntem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 20 s
Description: Öğrenin bitki dokularının dehüllerizasyonu için deterjanlı ve deterjansız iki yöntemi. Bu teknikler doku mühendisliği uygulamalarında iskele olarak kullanılabilen ekstraselüler matrisi korur ve çoğu bitki türüne uygulanabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

John Wirth bahçeleri Olbrich nezaketle bu projede kullanılan numuneler temini için teşekkür etmek istiyorum. Bu eser kısmen Ulusal Kalp, akciğer ve kan Enstitüsü tarafından desteklenen (G.R.G. R01HL115282) Ulusal Bilim Vakfı (DGE1144804) J.R.G ve G.R.G. ve Wisconsin Üniversitesi cerrahi departmanı ve mezunlar Fonu (H.D.L.). Bu eser de kısmen çevre koruma ajansı (yıldız hibe no. 83573701), Ulusal Sağlık Enstitüleri (R01HL093282-01A1 ve UH3TR000506) ve Ulusal Bilim Vakfı (IGERT DGE1144804) tarafından desteklenmiştir.

1. decellularization deterjan dayalı yaklaşım kullanarak bitki dokusunun
<ol><li>
Taze veya dondurulmuş F. hispida, yaprak örnekleri kullanın. -20 ° C-dondurucu ve store (en fazla bir yıl) ileride kullanmak üzere kullanılmayan taze örnekler dondur. Not: neredeyse istenen herhangi bir bitki kök veya yaprak dokusu kullanın. Genişletilmiş depolama kez dokulara zarar verebilir.<ol>
<li>Boyutunu ve şeklini temelinde örnek'ın kullanım işleme örnekleri belirler (yani şeritler halinde kesin örnekleri mekanik test uygulamaları için uygundur, bu arada 8 mm disk örnekleri çok iyi kodlamayla uygulamalarda yararlıdır ). Yaprak keskin, temiz biyopsi ile 8 mm yuvarlak yüzey içine oda sıcaklığında (20-25 ° C) deiyonize H2altında O. sular altında iken yumruk kesilmiş Not: Bu protokolü bütün yaprakları ve sapları üzerinde kullanılabilir. Ancak, daha küçük örnekleri daha hızlı decellularize.</li>
		<li>Örnekleri için 5-10 dk oda sıcaklığında (20-25 ° C) deiyonize H2O yıkayın ve/veya onları çözme için bir düşük hız ayarı için sallamak plaka sette, kuluçkaya. Yeterince deiyonize H2O tüm örneklerini iyice ıslak emin olmak için kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
% 10 (w/v) Sodyum Lauryl Sülfat (SDS) deiyonize H2o yer bir çözüm örnekleri (cam veya plastik tabak idealdir) uygun bir kap içinde hazırlamak ve tamamen örnekleri kapsayacak şekilde SDS Çözüm ekleyin. Örnekleri örnekleri için zarar görmesini önlemek için düşük bir hız için sallamak plaka sette, oda sıcaklığında (20-25 ° C) 5 gün kuluçkaya. Not: Bu decellularization sürecini yavaşlatmak ve düzensiz tedaviye SDS tarafından neden gibi kapsayıcı kalabalık değil. Bu adım sırasında örnekleri kahverengi bir renk tonu elde etmek.<ol>
<li>5 gün sonra SDS Çözüm örnekleri için ek bir 10-15 dk iyice durulayın kalan birisi SDS eriyik için sallamak plaka üzerinde deiyonize H2ile O. Incubate değiştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>% 10 (v/v) çamaşır suyu çözüm %1 (v/v) iyonik olmayan yüzey aktif hazırlayın. 500 mL solüsyon yapmak, iyonik olmayan yüzey aktif 5 mL 50 mL çamaşır suyu ile karıştırın sonra 445 mL deiyonize H2O. Submerge eklemek için taze hazırlanmış çözümde örnekler. Not: İyonik olmayan yüzey aktif/çamaşır suyu çözüm uzun bir raf ömrü, bu nedenle yok, hazırlık 48 saat içinde kullanılmalıdır.</li>
	<li>
Örnekleri tamamen temizlenene kadar iyonik olmayan yüzey aktif/çamaşır suyu çözüm her 24 h yerine ( Şekil 1A için görsel karşılaştırma için bakınız). Sonra örnek 2 min için sallamak tabakta deiyonize su aşırı iyonik olmayan yüzey aktif/çamaşır suyu çözüm durulama için kuluçkaya. Shake plaka örnekleri zarar önlemek için düşük bir ayara getirin. Not: kullanılan örneklerini temizlemek için gereken süreyi, bitki tür ve türünü bağlı olarak değişir. Tam örnekleri discoloring tam decellularization göstergesidir (kapsamlı Temizleme emin olmak için DNA miktar gerçekleştirin).<ol>
<li>Bunları bir yıl kadar saklamak için örnekleri lyophilize (sıvı nitrojen kullanarak buz gibi flaş tercih edilen,-80 ° C örnekleri dondurma da kabul edilebilir) ve oda sıcaklığında (20-25 ° C) düşük nem içinde saklayabilirsiniz.</li>
		<li>Tris-HCl (10 mM, pH 8,5) örneklerinde sulandırmak yeterli ceket örnekleri kullanarak. Örnek 2 - 3 kez serum-ücretsiz medya yavaşça (yani durulama, bir standart 24 iyi plaka başına kullanım 150-300 µL) kullanmadan bir micropipette kullanarak durulayın. Not: Tris-HCl tampon ve serum-ücretsiz medya (yani DMEM, ama medya yerine herhangi bir temel hücre kültürü) hücre canlılığı deiyonize H2ile O yalnız tedavi daha tedavi SDS örneklerinin etkisini düşürerek daha etkilidir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. hazırlanması, deterjan-Alerjik Decellularization yaklaşım kullanarak örnekleri
Not: Bu yordamın ilk adımını adımları 1.1-1.1.2 (yukarı bakın) ile aynı tarihte.
<ol><li>%5 (v/v) çamaşır suyu (NaClO) ve % 3 (w/v) sodyum bikarbonat (NaHCO3) çözüm hazırlamak. 60-70 ° C sıcak tabakta karıştırma sırasında 8 mm diskler halinde kesip F. hispida yaprak örnekleri için bir duman Hood'a çözümde sıcak. Not: Sodyum bikarbonat sodyum karbonat (Na2CO3) veya sodyum hidroksit (NaOH) ile yedek olabilir. İstenen sıcaklık büyük ölçüde (Oda sıcaklığı 90 ° c) değişir ve kullanılan örnekleri özellikleri göre ayarlanmalıdır.</li>
	<li>İstenen sıcaklık aralığı çözüm noktasına gelince, örnekleri daldırın ve onlara zarar görmesini önlemek için karıştırma hızını düşürür. Örnekleri gözle görülür geçtikten sonra ( Şekil 1B için görsel karşılaştırma için bakın), banyodan dikkatli bir şekilde çıkarın. Deiyonize H2O fazla çamaşır suyu çözümü kaldırmak 1-2 min için bir kez örneklerinde kuluçkaya. Not: örneklerini temizlemek için gereken süreyi çok değişebilir. Örneğin, kesme maydanoz daha kalın ve/veya daha büyük örnekleri ise 10-15 dakika içinde bütün yaprakları veya kaynaklanıyor yüksek sıcaklık banyoları tamamen temizleyin saatler alır gibi temizlenebilir.</li>
	<li>Örnekleri lyophilize ve oda sıcaklığında (20-25 ° C) düşük nem içinde depolayabilirsiniz.</li>
</ol>

<ol><li>Vacanti, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+and+regenerative+medicine%3A+from+first+principles+to+state+of+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pediatric+Surgery%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering and regenerative medicine: from first principles to state of the art.</a> Journal of Pediatric Surgery. 45 (2), 291-294 (2010).</li>
<li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+and+function+of+hepatocytes+on+a+novel+three-dimensional+synthetic+biodegradable+polymer+scaffold+with+an+intrinsic+network+of+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Survival and function of hepatocytes on a novel three-dimensional synthetic biodegradable polymer scaffold with an intrinsic network of channels.</a> Annals of Surgery. 228 (1), 8-13 (1998).</li>
<li>Park, A., Wu, B., Griffith, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+surface+modification+and+3D+fabrication+techniques+to+prepare+patterned+poly%28L-lactide%29+substrates+allowing+regionally+selective+cell+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomaterial+Science%2C+Polymer+Edition%22%5BJournal%5D)">Integration of surface modification and 3D fabrication techniques to prepare patterned poly(L-lactide) substrates allowing regionally selective cell adhesion.</a> Journal of Biomaterial Science, Polymer Edition. 9 (2), 89-110 (1998).</li>
<li>Steinhoff, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+of+pulmonary+heart+valves+on+allogenic+acellular+matrix+conduits%3A+in+vivo+restoration+of+valve+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%3A+JAMA.+102+%28Suppl+3%29%2C+III-50-+III+-55%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering of pulmonary heart valves on allogenic acellular matrix conduits: in vivo restoration of valve tissue.</a> Circulation: JAMA. 102 (Suppl 3), III-50- III -55. 102 (Suppl 3), III-50-III-55 (2000).</li>
<li>Stock, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+valved+conduits+in+the+pulmonary+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered valved conduits in the pulmonary circulation.</a> Journal of Thoracic Cardiovascular Surgery. 119 (4 Pt 1), 732-740 (2000).</li>
<li>Ott, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion-decellularized+matrix%3A+using+nature%27s+platform+to+engineer+a+bioartificial+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Perfusion-decellularized matrix: using nature's platform to engineer a bioartificial heart.</a> Nature Medicine. 14 (2), 213-221 (2008).</li>
<li>Guyette, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineering+Human+Myocardium+on+Native+Extracellular+Matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Bioengineering Human Myocardium on Native Extracellular Matrix.</a> Circulation Research. 118 (1), 56-72 (2016).</li>
<li>Huerta, S., Varshney, A., Patel, P., Mayo, H., Livingston, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+Mesh+Implants+for+Abdominal+Hernia+Repair%3A+US+Food+and+Drug+Administration+Approval+Process+and+Systematic+Review+of+Its+Efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Surgery%22%5BJournal%5D)">Biological Mesh Implants for Abdominal Hernia Repair: US Food and Drug Administration Approval Process and Systematic Review of Its Efficacy.</a> JAMA Surgery. 151 (4), 374-381 (2016).</li>
<li>Catalano, E., Cochis, A., Varoni, E., Rimondini, L., Azzimonti, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+skin+substitutes%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Artificial+Organs%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered skin substitutes: an overview.</a> Journal of Artificial Organs. 16 (4), 397-403 (2013).</li>
<li>Fang, B., Wan, Y., Tang, T., Gao, C., Dai, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proliferation+and+osteoblastic+differentiation+of+human+bone+marrow+stromal+cells+on+hydroxyapatite%2Fbacterial+cellulose+nanocomposite+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Proliferation and osteoblastic differentiation of human bone marrow stromal cells on hydroxyapatite/bacterial cellulose nanocomposite scaffolds.</a> Tissue Engineering. 15 (5), 1091-1098 (2009).</li>
<li>Wan, Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0928493106003523">Biomimetic synthesis of hydroxyapatite/bacterial cellulose nanocomposites for biomedical applications.</a> Materials Science and Engineering. 27 (4), 855-864 (2007).</li>
<li>Vinatier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+injectable+cellulose-based+hydrogel+for+the+transfer+of+autologous+nasal+chondrocytes+in+articular+cartilage+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">An injectable cellulose-based hydrogel for the transfer of autologous nasal chondrocytes in articular cartilage defects.</a> Biotechnology and Bioengineering. 102 (4), 1259-1267 (2009).</li>
<li>Vinatier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+silanized+hydroxypropyl+methylcellulose+hydrogel+for+the+three-dimensional+culture+of+chondrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A silanized hydroxypropyl methylcellulose hydrogel for the three-dimensional culture of chondrocytes.</a> Biomaterials. 26 (33), 6643-6651 (2005).</li>
<li>Vinatier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+cartilage+with+human+nasal+chondrocytes+and+a+silanized+hydroxypropyl+methylcellulose+hydrogel%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research+Part+A%22%5BJournal%5D)">Engineering cartilage with human nasal chondrocytes and a silanized hydroxypropyl methylcellulose hydrogel.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 80 (1), 66-74 (2007).</li>
<li>Helenius, G., Bäckdahl, H., Bodin, A., Nannmark, U., Gatenholm, P., Risberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+biocompatibility+of+bacterial+cellulose%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research+Part+A%22%5BJournal%5D)">In vivo biocompatibility of bacterial cellulose.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 76 (2), 431-438 (2006).</li>
<li>Zhong, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+aligned+nanofibrous+collagen+scaffold+by+electrospinning+and+its+effects+on+in+vitro+fibroblast+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research+Part+A%22%5BJournal%5D)">An aligned nanofibrous collagen scaffold by electrospinning and its effects on in vitro fibroblast culture.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 79 (3), 456-463 (2006).</li>
<li>Thomas, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+shape-controlled+tuneable+microgel+platform+to+modulate+angiogenic+paracrine+responses+in+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A shape-controlled tuneable microgel platform to modulate angiogenic paracrine responses in stem cells.</a> Biomaterials. 35 (31), 8757-8766 (2014).</li>
<li>Lai, C., Zhang, S., Wang, L., Sheng, L., Zhou, Q., Xi, T. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2015/tb/c5tb01640a">The relationship between microstructure and in vivo degradation of modified bacterial cellulose sponges.</a> Journal of Materials Chemistry B. 3 (46), 9001-9010 (2015).</li>
<li>Märtsonad, M., Viljantoa, J., Hurmea, T., Laippalac, P., Saukkob, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+cellulose+sponge+degradable+or+stable+as+implantation+material%3F+An+in+vivo+subcutaneous+study+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Is cellulose sponge degradable or stable as implantation material? An in vivo subcutaneous study in the rat.</a> Biomaterials. 20 (21), 1989-1995 (1999).</li>
<li>Miyamoto, T., Takahashi, S., Ito, H., Inagaki, H., Noishiki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+biocompatibility+of+cellulose+and+its+derivatives%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research%22%5BJournal%5D)">Tissue biocompatibility of cellulose and its derivatives.</a> Journal of Biomedical Materials Research. 23 (1), 125-133 (1989).</li>
<li>Entcheva, E., Bien, H., Yin, L., Chung, C., Farrell, M., Kostov, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+cardiac+cell+constructs+on+cellulose-based+scaffolding%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Functional cardiac cell constructs on cellulose-based scaffolding.</a> Biomaterials. 25 (26), 5753-5762 (2004).</li>
<li>Modulevsky, D., Cuerrier, C., Pelling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocompatibility+of+Subcutaneously+Implanted+Plant-Derived+Cellulose+Biomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Biocompatibility of Subcutaneously Implanted Plant-Derived Cellulose Biomaterials.</a> PLoS One. 11 (6), e0157894(2016).</li>
<li>McCulloh, K., Sperry, J., Adler, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water+transport+in+plants+obeys+Murray%27s+law%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Water transport in plants obeys Murray's law.</a> Nature. 421 (6926), 939-942 (2003).</li>
<li>Gershlak, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crossing+kingdoms%3A+Using+decellularized+plants+as+perfusable+tissue+engineering+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Crossing kingdoms: Using decellularized plants as perfusable tissue engineering scaffolds.</a> Biomaterials. 125, 13-22 (2017).</li>
<li>Fontana, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofunctionalized+Plants+as+Diverse+Biomaterials+for+Human+Cell+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Biofunctionalized Plants as Diverse Biomaterials for Human Cell Culture.</a> Advanced Healthcare Materials. 6 (8), (2017).</li>
<li>Wegst, U., Bai, H., Saiz, E., Tomsia, A., Ritchie, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioinspired+structural+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Materials%22%5BJournal%5D)">Bioinspired structural materials.</a> Nature Materials. 14 (1), 23-36 (2015).</li>
<li>Gibson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hierarchical+structure+and+mechanics+of+plant+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+Interface%22%5BJournal%5D)">The hierarchical structure and mechanics of plant materials.</a> Journal of the Royal Society Interface. 9 (76), 2749-2766 (2012).</li>
<li>Hoshiba, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+Extracellular+Matrix+as+an+In+vitro+Model+to+Study+the+Comprehensive+Roles+of+the+ECM+in+Stem+Cell+Differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Decellularized Extracellular Matrix as an In vitro Model to Study the Comprehensive Roles of the ECM in Stem Cell Differentiation.</a> Stem Cells International. 2016, (2016).</li>
<li>Guyette, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+decellularization+of+whole+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Perfusion decellularization of whole organs.</a> Nature Protocols. 9 (6), 1451-1468 (2014).</li>
<li>Modulevsky, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apple+derived+cellulose+scaffolds+for+3D+mammalian+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Apple derived cellulose scaffolds for 3D mammalian cell culture.</a> PLoS ONE. 9 (5), e97835(2014).</li>
<li>Blonder, B. How to make leaf skeletons. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://benjaminblonder.org/The_secrets_of_leaves/Making_skeletons.html">http://benjaminblonder.org/The_secrets_of_leaves/Making_skeletons.html</a> (2017).</li>
<li>Seba, A., Sloane, H. <a target="_blank" href="http://www.jstor.org/stable/103557?seq=1">The Anatomical Preparation of Vegetables, by Albertus Seba, F. R. S. Communicated to the Royal Society by Sir Hans Sloane, Bart. Pr. R. S. and Col. Med. Lond. Translated from the German, by Mr. Zolman, F. R. S.</a> Philosophical Transactions. 36 (407), 441-444 (1775).</li>
<li>Parrish, E. <a target="_blank" href="https://archive.org/details/phantombouquetpo00parriala">The Phantom Boutique: A Popular Treatise on the Art of Skeletonizing Leaves and Seed-Vessels and Adapting Them to Embellish the Home of Taste.</a> The Phantom Boutique: A Popular Treatise on the Art of Skeletonizing Leaves and Seed-Vessels and Adapting Them to Embellish the Home of Taste. , (1865).</li>
<li>Coffin, S., Gaudette, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aprotinin+extends+mechanical+integrity+time+of+cell-seeded+fibrin+sutures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research+Part+A%22%5BJournal%5D)">Aprotinin extends mechanical integrity time of cell-seeded fibrin sutures.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 104 (9), 2271-2279 (2016).</li>
<li>Zangala, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Genomic+DNA+from+Mouse+Tails%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Isolation of Genomic DNA from Mouse Tails.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (6), e246(2007).</li>
<li>Borselli, C., Cezar, C., Shvartsman, D., Vandenburgh, H., Mooney, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+multifunctional+delivery+scaffold+in+the+ability+of+cultured+myoblasts+to+promote+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The role of multifunctional delivery scaffold in the ability of cultured myoblasts to promote muscle regeneration.</a> Biomaterials. 32 (34), 8905-8914 (2011).</li>
<li>Hill, E., Boontheekul, T., Mooney, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designing+Scaffolds+to+Enhance+Transplanted+Myoblast+Survival+and+Migration%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Designing Scaffolds to Enhance Transplanted Myoblast Survival and Migration.</a> Tissue Engineering. 12 (5), 1295-1304 (2006).</li>
<li>Hill, E., Boontheekul, T., Mooney, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulating+activation+of+transplanted+cells+controls+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Regulating activation of transplanted cells controls tissue regeneration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 103 (8), 2494-2499 (2006).</li>
<li>Ma, J., Holden, K., Zhu, J., Pan, H., Li, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Application+of+Three-Dimensional+Collagen-Scaffolds+Seeded+with+Myoblasts+to+Repair+Skeletal+Muscle+Defects%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedicine+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">The Application of Three-Dimensional Collagen-Scaffolds Seeded with Myoblasts to Repair Skeletal Muscle Defects.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2011, 1-9 (2011).</li>
<li>Tyree, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+hydraulics%3A+the+ascent+of+water%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Plant hydraulics: the ascent of water.</a> Nature. 424 (6943), 923(2003).</li>
<li>Raven, P., Evert, R., Eichhorn, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRaven%2C+P+%22Biology+of+Plants%22">Biology of Plants</a>. , 7th edition, (2005).</li>
<li>Turrell, F. <a target="_blank" href="https://www.jstor.org/stable/2435976">The area of the internal exposed surface of dicotyledon leaves.</a> American Journal of Botany. 23 (4), 255-264 (1936).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Burada, bitki doku decellularize için iki yöntem açıklanmaktadır. Burada anlatılan sonuçları önceki çalışmalar25, sonuçları ile birleştiğinde ortaya koymak protokolleri muhtemeldir önermek geniş bir yelpazede uygun bitki tür ve sapları ve yaprakları üzerinde gerçekleştirilebilir. Bu yordamları basit ve bitki decellularization çoğu laboratuvarlarında yürütülen olabilir bu yüzden özel ekipman gerektirmez. Bu decellularization sonra iskele memeli hücre adezyon kolaylaştırmak için functionalized gerek...

Doku mühendisliği canlı bir doku oluşturmak için 1980'lerde ortaya çıkan yerine ve potansiyel olarak adres önemli organ ve doku sıkıntısı1. Bir strateji iskele teşvik ve vücut eksik doku veya organ yeniden oluşturmak için rehber kullandı. 3-b baskı üretilen benzersiz fiziksel özellikleri ile iskele gibi yaklaşımlar üretim gelişmiş rağmen iskele ile ulaşılabilir fiziksel ve biyolojik özellikleri çeşitli bir yelpazede üretim yeteneği mücadelesi2 kalır , 3. Ayrıca, işlevsel bir damar ağı eksikliği nedeniyle, bu teknikleri 3 boyutlu doku Yenileyici sınırlı. İskele olarak decellularized hayvan ve insan doku kullanımı bu sorun4,5,6,7engellemeyi destekli. Ancak, yüksek maliyet, toplu iş toplu iş değişkenliği ve sınırlı kullanılabilirliğe yaygın kullanımını sınırlayabilir decellularized hayvan iskele8. Ayrıca potansiyel hastalık iletim hastalara ve bazı decellularized memeli doku9immünolojik tepki hakkında endişeler vardır.
Bitki ve bakteriyel kaynaklardan elde edilen selüloz, kapsamlı rejeneratif tıp Biyomalzeme geniş bir uygulama yelpazesi için oluşturmak için kullanılmıştır. Bazı örnekler şunlardır: kemik10,11, kıkırdak12,13,14 ve15şifa yara. Dayanıklı ve memeli hücreleri tarafından kırık aşağı için dayanıklı olduğu oluşmaktadır iskele selüloz bir yararı yok. Gerçeğini memeli hücreleri selüloz molekülleri kırmak gerekli enzimler üretmek değildir nedeniyle bu. İçinde karşılaştırma, iskele oluştururlar kollajen gibi hücre dışı matriks kullanarak üretilen16 kolayca kırık ve uzun vadeli uygulamalar için uygun olmayabilir. Kollajen iskele kimyasal cross-linking tarafından stabilize. İskele17biyouyumluluk etkiler cross-linkers doğasında toksisite nedeniyle bir ticaret-off be. Diğer taraftan, selüloz dışındahiç bir şeyden etkilenmez memeli hücreleri18,19,20enzimatik bozulma olduğundan süre takmaktan implantasyonu sitesinde mevcut kalır potansiyeline sahiptir. Bu bozulma ile hidroliz Önarıtma oranı ve iskele cellulases21ile ortak teslim ayarlama tarafından değiştirilebilir. Decellularized bitki elde edilen selüloz iskele vivo içinde biyouyumluluk da fareler22tarihinde yapılan bir çalışmada gösterilmiştir.
Milyonlarca yıllık evrim, kendi yapısı ve sıvı taşıma ve saklama verimliliğini artırmak için kompozisyon bitkiler iyileştirdiyseniz. Bitki vasküler gemiler hidrolik direnç küçük gemi, Murray'nın hukuk23göre memeli damarlara benzer içine dallanma tarafından en aza indirmek. Decellularization sonra fabrika gemileri ve birbirine bağlı gözenekleri karmaşık ağ korunur. Farklı bitki türü hazır çok sayıda göz önüne alındığında, bitki kaynaklı iskele iskele doku mühendisliği24,25Şu anda etkileyen tasarım sınırlamalarının üstesinden gelir potansiyeline sahip. Örneğin, Modulevsky vd. decellularized elma doku subkutan bir fare22arkasında implante zaman anjiogenez ve hücre göç oluştuğunu gösterdi. Benzer şekilde, Gershlak ve ark. endotel hücreleri decellularized yaprakları24damarlara içinde yetiştirilen olabilir gösterdi. Ayrı bir deneyde, Gershlak vd. Ayrıca cardiomyocytes yaprak yüzeyinde büyümüş olabilir ve24sözleşme başardık göstermek mümkün.
Bitkiler de hücresel karmaşık kuruluştan bile bugüne kadar geliştirilen en ileri üretim teknikleri ile elde etmek zordur makroskopik ölçekli içerir. Bitki doku karmaşık hiyerarşik tasarımı onları onların bileşenlerinin26toplamından daha güçlü yapar. Bitkiler bir bolluk kaynaklanıyor gibi katı ve sert bileşenleri arasında değişen farklı mekanik özelliklere sahip, çok daha esnek ve bükülebilir olanlar gibi27bırakır. Yaprakları tür boyutu açısından bağlı olarak değişiklik gösterebilir, şekli, gücü, vaskülarizasyon, derecesini kırmak ve hydrophilicity farklı derecelerde taşıyabilir. Genel olarak, bu bitki özellikleri decellularized bitkiler iskele mühendislik doku da dahil olmak üzere benzersiz ve çok fonksiyonel tıbbi cihaz olarak hizmet verebilir tavsiye ederim.
Bu iletişim kuralı bitki doku decellularize için iki yöntem üzerinde duruluyor, gibi bırakır ve doku mühendisliği iskele olarak kullanmak için kaynaklanıyor. İlk yöntem bir dizi banyoları DNA ve memeli decellularize ve doku6,22,25 bitki için yaygın olarak kullanılan bir teknik adapte hücresel madde kaldırmak için kullanan bir deterjan tabanlı tekniktir ,28,29,30. İkinci yöntem deterjan-alerjik ve genellikle yumuşak doku yaprakları31kaldırmak için kullanılan bir "iskeletleşmiş" kuralından uyarlanmıştır. Ön çalışma yaprakları çamaşır suyu ve sodyum bikarbonat bir çözümde kaynayan damarlara ayrılması çevreleyen yumuşak doku31kolaylaştırdı gösterdi. Bu teknik geri 17inci ve 18inci yüzyıl, Albertus Seba32 ve Edward Parrish33çalışmalarını gibi yapılan deneyler için verilebilir. Bitki oldu, yaprak ve meyve gibi bırakarak etrafında merkezli bu deneyler için uzun bir süre suda Batık (hafta ay) ve uzak doğal çürüme daha yumuşak dokularda izin. Burada "iskeletleşmiş" yaklaşım hücresel artıkları kaldırmak için ve yumuşak doku yapısı önemli ölçüde etkilemesini önlemek için daha düşük sıcaklıklarda uzun kuluçka süreleri gibi daha hafif koşulları kullanmak için uyarlanmıştır. Burada detaylı deneyler için üç bitki türleri kullanılmıştır: Ficus hispida, Pachira aquatica ve Garciniabir tür. DNA miktar, mekanik test ve her iki yöntem üzerinden hücresel metabolik aktivite üzerindeki etkisi sonuçları açıklanmıştır.

<table><tbody><tr><td>Sodyum dodesil sülfat</td><td>Sigma Life Science</td><td>75746-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>MP Biomedicals, LLC</td><td>807426</td><td>Makalede atıfta bulunulan iyonik olmayan yüzey aktif madde. Çok viskoz reaktif, çizerken pipet ucunun ucunu kesmeye yardımcı olabilir.</td></tr><tr><td>Konsantre çamaşır suyu (% 8.25 sodyum hipoklorit)</td><td>Clorox</td><td>Ürün #: 31009</td><td>Standart konsantre çamaşır suyu.</td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat</td><td>Acros Organics</td><td>217120010</td><td>Sodyum hidroksit veya sodyum karbonat ile ikame edilebilir.</td></tr><tr><td>8 mm Biopunch</td><td>HealthLink</td><td>15111-80</td><td>24 kuyulu plakaya iyi uyan numuneleri keser</td></tr><tr><td>Oryantal Dansçı-Sarsıntı masası</td><td>Stovall Yaşam Bilimleri</td><td>BDRAA115S</td><td>Dokulara zarar vermemek için düşük hızlar kullanın. Herhangi bir model / marka sarsma masası kullanabilir.</td></tr><tr><td>Isotemp sıcak/karıştırma plakası</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td>Herhangi bir stil/marka sıcak/karıştırma plakası kullanabilir.</td></tr><tr><td>Beher:</td><td>Herhangi Bir</td><td></td><td>Numunelerinize uyduğu ve onları aşırı kalabalık olmadığı sürece herhangi bir boyutta beher kullanabilirsiniz.</td></tr><tr><td>Tris Hidroklorür</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP153-500</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning</td><td>MT50003PC</td><td></td></tr><tr><td>Quant-iT Picogreen dsDNA testi</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>P11496</td><td>Eldeki herhangi bir dsDNA miktar tayin mehtodunu kullanabilir.</td></tr></tbody></table>

doku mühendisliği uygulamaları için bitki dokuların decellularization için iki yöntem

Two Methods for Decellularization of Plant Tissues for Tissue Engineering Applications

Şu anda iskele doku yerine kullanılan otolog, sentetik ve hayvan kaynaklı greft nedeniyle düşük kullanılabilirlik, zavallı biyouyumluluk ve maliyet kısıtlamaları bulunmaktadır. Bitki doku yapmak onları benzersiz olarak uygun yüksek yüzey alanı, mükemmel su taşıma ve saklama, gibi iskele olarak birbirine bağlı gözeneklilik, damar ağları ve çok çeşitli mekanik önceden kullanmak uygun özelliklere sahip özellikleri. Doku mühendisliği uygulamaları için bitki decellularization iki başarılı yöntemleri burada açıklanmıştır. Birinci yöntem daha önce kurulan yöntemleri memeli dokuları temizlemek için kullanılan benzer hücresel madde kaldırmak için deterjan banyoları temel alır. İkinci yaprak damarlara yalıtır ve ısıtmalı çamaşır suyu ve sapları ve yaprakları temizlemek için tuz banyosu kullanımı içerir bir protokol adapte deterjan-Alerjik bir yöntemdir. Her iki yöntem iskele karşılaştırılabilir mekanik özellikleri ve böylece daha iyi onların amaçlanan uygulama uygun protokol seçmesini sağlayan düşük hücresel metabolik etkisi ile verim.

Her iki yöntem hücre kültürü ve doku mühendisliği uygulamaları için uygun iskele vermiştir. Şekil 1 decellularization süreci için deterjan tabanlı ve kesim örnekleri (8 mm çap) deterjan ücretsiz yöntemi için sağlam bir yaprak kullanarak genel iş akışını gösterir. Her iki yöntem takip Ficus hispida dokuların başarılı decellularization açık ve sağlam örnekleri (Şekil 1A ve 1B) vermiştir. Bütün bitki doku (...

Burada mevcut ve bitki dokularında decellularize için kullanılan kontrast iki protokolleri: deterjan temelli bir yaklaşım ve deterjan-Alerjik bir yaklaşım. Her iki yöntem sonra doku mühendisliği uygulamaları için iskele olarak kullanılabilir hücre dışı matriks kullanılan, bitki dokuların geride.

Doku mühendisliği uygulamaları için bitki dokuların Decellularization için iki yöntem

The autologous, synthetic, and animal-derived grafts currently used as scaffolds for tissue replacement have limitations due to low availability, poor ...

Bu yöntemler, mükemmel sıvı transfer yeteneklerine sahip, sofistike ultra yapılara ve ölçeklenebilir üretime sahip bir iskelenin geliştirilmesi gibi biyomalzemeler alanındaki temel soruların ele alınmasına yardımcı olabilir. Bu tekniklerin temel avantajı, özel ekipmana ihtiyaç duymadan kök dokuları için çoğu bitkiye uygulanabilmeleridir. İlk olarak, F.hispida yapraklarının taze veya donmuş örneklerini toplayın.Kalan taze numuneyi ileride kullanmak üzere eksi 20 santigrat derecede saklayın. Yaprağın 20 ila 25 santigrat derecede deiyonize suya batırılmış halde kalmasına izin verin. Yaprağı sekiz milimetre çapında diskler halinde kesmek için temiz bir biyopsi zımbası kullanın.Daha sonra, yaprak örneklerini yıkamak için, deiyonize suya batırılmış olarak beş ila 10 dakika boyunca düşük hızda bir çalkalama plakası üzerinde inkübe edin. Daha sonra deiyonize suda hacimce %10 SDS hazırlayın. SDS çözeltisini hazırladıktan sonra, yaprak örneklerini plastik bir tabağa yerleştirin.Ardından, numuneleri tamamen kaplayacak şekilde SDS solüsyonunu ekleyin. Buharlaşmayı önlemek için SDS daldırılmış yaprak numunelerini üstü kapalı olarak bir sallama plakasına yerleştirin. Daha sonra yaprak örneğini o

two-methods-for-decellularization-plant-tissues-for-tissue

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Perfüzyon decellularization organ ekstraselüler matriks kompozisyonu ve mikromimarisini korur tüm karaciğer iskeleleri üretmek için yeni bir tekniktir. Burada, hepatositler ile perfüzyon decellularization ve sonraki repopulation kullanarak tüm organı iskeleleri hazırlama yöntemi açıklanmıştır. Fonksiyonel ve transplante karaciğer greft tekniği kullanılarak oluşturulabilir.

Tüm karaciğerleri Decellularization ve Recellularization

Hızla ve tamamen retrograd perfüzyon yoluyla sağlam bir domuz kalbinden hücresel bileşenleri kaldırmak için bir yöntem tarif edilmiştir. Bu yöntem, çoklu klinik uygulamalarda kullanım için potansiyele sahip bir site spesifik kardiyak ekstraselüler matriks iskele verir.

Retrograd Koroner Perfüzyon tarafından Domuz Kalp Decellularization Prosedürü

Makalede, sıçan bağırsaktan bir hücresel olmayan matrisinin üretimi için bir yöntem anlatılmaktadır. Bağırsak iskelelerinin türetme hücre biyolojisi ve uyuşturucu testi kök, doku mühendisliği gelecekteki uygulamalar için önemlidir.

Doğal Aselüler Bağırsak Matrix&#39;in üretimi için bir Decellularization Metodoloji

dokuya özgü, hücre dışı matris (ECM) hücre fonksiyonunun önemli bir düzenleyicidir. Bu makalede, saf ECM türevli köpükler ve in vitro hücre kültürü modelleri ileri 3D uygulamaları için ya da ön-rejeneratif bioscaffolds gibi kimyasal çapraz bağlama yapılmasına gerek olmadan kültürdeki kararlı olan mikro taşıyıcıları sentezlenmesi için yöntemler tarif etmektedir.

Doku spesifik Hücre Kültürü ve Delivery Platform olarak Ekstrasellüler Matriks kaynaklı Köpükler ve mikro Fabrikasyon

Kardiyak hücre dışı Matriks (ECM) anahtar süreçlerinde doku ve organların fizyolojik hayatı boyunca remodeling kalıcı süre alacak moleküllerinin karmaşık bir ağdır. Fetal ve yetişkin kalplerin standart decellularization 3D bir bağlamda yerel mimari ve biyomekanik özellikleri yakalayarak karşılaştırmalı deneysel çalışmalar hem dokuların izin verir.

Vitro çalışmalar için 3D benzeri platformlar olarak Fetal ve yetişkin kalp doku karşılaştırılabilir Decellularization Explants

Burada, deterjanlar ve recellularization tarafından periferik kan ve endotel orta perfüzyon kullanarak safen ven decellularization için bir protokol açıklayın.

Decellularization ve Recellularization metodoloji insan safen damarlar için

Bu yöntem, decellularization karmaşık bir solid organ ozmotik şok ve perfüzyon en az organ matris bozulma ile iyonik deterjan dayalı basit bir protokol kullanarak sağlar. Gerçek zamanlı akış dinamiği ve hücresel enkaz çıkış izleme ile basınçlı bir kese içinde insan kalpleri bir roman decellularization tekniği oluşmaktadır.

Decellularization ters yönde bir basınçlı bir kese içinde bütün insan kalp

Bu protokol, hücreden sönmemiş sıçan böbrekleri kullanarak bir iskele geliştirmek için bir yöntem sunar. Protokol, biyoyararlanıcılığı doğrulamak için hücreden arındırma ve yeniden hücreleştirme süreçlerini içerir. Desellülerizasyon Triton X-100 ve sodyum dodecyl sülfat kullanılarak gerçekleştirilir.

Sıçanlarda Hücreden Sönmemiş Böbrek İskelelerinin Hazırlanması

Protokol, özelleştirilmiş bir perfüzyon biyoreaktöründe flep vaskülatürü boyunca sodyum dodesil sülfat deterjanının perfüzyonu ile vaskülarize domuz fleplerinin cerrahi tedarikini ve ardından desellülarizasyonunu açıklamaktadır.

Özelleştirilmiş Perfüzyon Biyoreaktöründe Domuz Vaskülarize Fleplerinin Tedariği ve Perfüzyon-Desellülarizasyonu

Bu çalışmada, bitki bazlı biyomalzemelerin hücre çözme, fiziksel karakterizasyon, görüntüleme ve in vivo implantasyon yöntemlerinin yanı sıra yapı iskelelerinde hücre tohumlama ve farklılaşma yöntemlerini detaylandırıyoruz. Açıklanan yöntemler, kemik dokusu mühendisliği uygulamaları için bitki bazlı biyomalzemelerin değerlendirilmesine izin verir.

In Vitro ve In Vivo Kemik Doku Mühendisliği için Hücrelerden Arındırılmış Elma Türevi İskeleler

Öğrenin bitki dokularının dehüllerizasyonu için deterjanlı ve deterjansız iki yöntemi. Bu teknikler doku mühendisliği uygulamalarında iskele olarak kullanılabilen ekstraselüler matrisi korur ve çoğu bitki türüne uygulanabilir.

Doku mühendisliği uygulamaları için bitki dokuların Decellularization için iki yöntem

Daha fazla video keşfet