Name: Decellularization ve Recellularization metodoloji insan safen damarlar için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-27T13:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 35 s
Description: Öğrenin insan safen damarlarının deküllülerizasyon ve reküllülerizasyon protokolünü. Deterjanlar ve biyoreaktör kullanarak doku mühendisliği için iskelet oluşturma yöntemini keşfedin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Profesör Anders Jeppsson kan damarlarının deneylerde kullanılan sağlama konusunda yardım için teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma finanse LUA ALF hibe SSH.

Doku kullanılan ve bu kağıt Protokolü Göteborg Üniversitesi etik kuralları izler.
1. doku hazırlık ve depolama
<ol><li>Cerrahi forseps ve makas kullanarak alınan safen ven çevre dokudan kesin. Not: Safen ven insanlar alt ekstremite damar cerrahları tarafından disseke. Bu yazıda kullanılan safen ven bypass cerrahisi sonra un kullanılan bir parçasıdır.</li>
	<li>Perfüzyon sırasında kaçağı önlemek için kendi amaçları dikişler ve forseps ile tüm yan şubelerinde ligate.</li>
	<li>Ven fosfat tampon salin (PBS) 40 mL içeren bir 50 mL tüp içinde tutun. Ven aşırı kan kaldırmak için PBS 2 - 3 kez değişiklik yaparak yıkayın. Ven-80 ° C'de dondurarak saklamak</li>
</ol>2. Decellularization kurulumları ve Recellularization biyoreaktör hazırlanması
Not: makas kullanarak, Tablo 1' de gösterildiği gibi silikon tüpler kesti.
<ol><li>
Decellularization kurulumu 1 (Triton X-100 perfüzyon ve yıkama)
	<ol>
<li>Bir 2 L (plastik küvet) odası, tüp Şekil 1A' gösterildiği gibi A tüm üç adet bant. Not: teyp nerede odası (deterjan'ın giriş) alt kenarına dokunur bir duvar için bir tüp ve diğer iki tüp ven uzunluğuna bağlı olarak 5-10 cm arasında bir mesafe ile karşı duvara. En az 5 cm Bu tüpler de odası 's yere (damar'ın giriş ve çıkış) bantlanmış.</li>
		<li>Erkek ve dişi radarı bağlayıcılar, kullanarak bağlan serisinde tüp için tüp B F, tüp C tüp tarafından takip deterjan'ın giriş ve sonunda damar giriş için. Yer ve peristaltik kaset tüpüne F ben pompa.</li>
		<li>Başka bir tüp C al ve bir ucunu damar'ın prize bağlayın. Diğer ucunu 45 cm (deterjan çıkış) odası yerleştirilir alt hortum çıkış ile cam kavanoza yerleştirin ve güvenliğini sağlamak için Kaydet. Tüp G alın ve bir ucu cam kavanoz hortum çıkış itmek ve diğer ucunu ven odanın içine yerleştirin. Not: Tüm kurulum (kırmızı oklar), odası ve akış yönünü (beyaz ok) resimlerini Şekil 1Aile gösterilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Decellularization kurulum 2 (için TnBP perfüzyon)
	<ol>
<li>1 L cam sürahi alıp tüp jar'ın alt dokunuyor kadar tüp C (deterjan giriş) bir ucunu kavanoza yerleştirin.</li>
		<li>Tüp F tüp tarafından C. yer tüp C diğer ucunu kavanozun içine yarım Derinlik (damar'ın giriş) kadar takip için diğer ucunu bağlayın. Tüp F peristaltik pompa kaset yerleştirin ben.</li>
		<li>Tüp D alın ve bir ucu kavanoza (damar'ın çıkış) yarım derinlik ve diğer ucunu cam kavanoza kadar damar'ın giriş (deterjan çıkış) 45 cm yükseklikten yer alt hortumu ile yerleştirin. Güvenliğini sağlamak için deterjan'ın giriş ve çıkış boruları teyp.</li>
		<li>1 L cam sürahi bir manyetik karıştırıcı yerleştirin ve mıknatıs şişe içinde tutmak.</li>
		<li>Tüp G alın ve bir ucu cam kavanoz hortum çıkış üzerine itmek ve diğer ucunu 1 L cam sürahi yerleştirin. Not: Resim tam kurulumu (kırmızı oklar), Şekil 1Badımında odası ve akış yönünü (beyaz ok) gösterilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Decellularization Kur 3 (için DNaz perfüzyon)
	<ol>
<li>250 mL Cam şişe alın ve her iki ucunda da tüp C. yer tüp ortasındaki alanı peristaltik pompa II kaset yerleştirin. Not: Tüp bir ucunu çözüm giriş ve tüp diğer ucunu damar'ın koya bağlı. Damar'ın çıkış çözümde serbest bırakılır.</li>
		<li>Pompa 37 ° C'de dahil olmak üzere tüm kurulum yerleştirin Kurulumu tamamlamak ve akış yönünde resmi Şekil 1 ciçinde gösterilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Recellularization biyoreaktör
	<ol>
<li>Tüm parçaları Şekil 2Agösterildiği gibi hazır tutun.</li>
		<li>Şekil 2Biçinde gösterildiği gibi 4-port kapağını ve her bağlantı noktasına takın, H (damar'ın çıkış) Tüp, tüp ben (medya giriş) ve J (damar'ın giriş) tüp. Tüp H diğer ucunu (medya çıkış) 4th bağlantı noktasına bağlayın. Not: 4-port kapağı üstten görünüm Şekil 2Ciçinde gösterilir. Tüpler, sivri bir makas ile kenarları kesilmiş kolay ekleme için.</li>
		<li>Diğer ucunu ise tüp J U şekle viraj ve dikiş ile kravat. Azalan bakiyeli bağlayıcılar tüpler H & J. iç ucuna bağlayın</li>
		<li>60 mL tüp düz taban ile 250 mL Cam şişe içine yerleştirin ve yukarıda yapılan Kur Şekil 2Bolarak gösterildiği gibi tüp içine yerleştirin. Şekil 2Eiçinde gösterildiği gibi tüplerde K, E ve K serisi bağlayın. Bir tüp K damar'ın giriş ve medya giriş için başka bir tüp K bağlayın. Not: Kurulum ve akış yönü Şematik diyagramı Şekil 2Fiçinde görülür.</li>
		<li>Biyoreaktör tarafından ısıyla sterilize.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. hazırlık çözümleri
<ol><li>Çözüm 1 (10 x su): için 1 L Ultrasaf Su, 2 g sodyum azid ve ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA) 18.6 g ekleyin. Tuz eriyene kadar karıştırın.</li>
	<li>Çözüm 2 (1 x su): 100 mL çözeltisi 1 alın ve 900 mL ultrasaf su ekleyin.</li>
	<li>Çözüm 3 (Triton X-100 x 5): Triton X-100 50 mL, 1 g sodyum azid ve 9.3 g EDTA Ultrasaf Su 950 mL için ekleyin. Eriyene kadar karıştırın.</li>
	<li>Çözüm 4 (Triton X-100 x 1): 200 mL çözüm 3 alın ve 800 mL ultrasaf su ekleyin.</li>
	<li>Çözüm 5 (1 x TnBP): TnBP 10 mL 10 mL pipet ile çözüm 2 990 mL için ekleyin.</li>
	<li>Çözüm 6 (40 Kunitz adet/mL DNaz): DNaseI, 2.000 Kunitz eklemek biriminde Dulbecco'nın fosfat tampon CaCl2 ve MgCl2içeren serum 50 mL. Taze hazırlamak ve hemen kullanın.</li>
	<li>Çözüm 7 (PBS): 24 g sodyum klorür, potasyum klorür 0.6 g, 4,32 g sodyum fosfat ve potasyum fosfat 0,72 g için 3 L ultrasaf su ekleyin. Eriyene kadar karıştırın. PH 7.4 için ayarlayın. 1 litre PBS Otoklav içinde sterilize ve ayrı ayrı saklayın.</li>
	<li>Çözüm 8 (% 0,1 Perasetik asit): 50 mL steril çözüm 7, 50 µL Perasetik asit ekleyin. Taze hazırlamak ve hemen kullanın.</li>
</ol>4. endotel orta hazırlanması
<ol><li>L-glutamine, 5 mL 5 mL anti-anti, insan AB serumu 50 mL ve 500 ml steril bir başlık altında MCDB131 orta fetal Sığır serum dışında EGM-2 büyüme faktörü kitinin tüm bileşenleri de ekleyin.</li>
</ol>5. safen ven decellularization
<ol><li>İnsan safen ven-80 ° c oda sıcaklığında erimek. Tekrar-80 ° C'de donmasına ve yine oda sıcaklığında erimek.</li>
	<li>Biyopsi makas kullanarak 2 mm uzunlukta Kes ve formaldehit oda sıcaklığında 24-48 h için düzeltin. Damar dikiş ile erkek ve dişi radarı bağlayıcı barbs için her iki ucuna bağla.</li>
	<li>Ven decellularization Kur 1 bağlanmak ve çözüm 2 1 litre doldurun. 15 dk 35 mL/dak., boş için kurulum içeriğini sıvı.</li>
	<li>Çözüm 4 1 litre ekleyin ve 4 35 mL/dak. s kurulum içeriğini boşaltmak için sıvı.</li>
	<li>Çözüm 2 500 mL ekleyin ve 5 dk. boş için kurulum içeriğini sıvı. Bu adımı yineleyin. Ven perfüzyon kurulumundan 1 çıkarıp perfüzyon kurulum 2 takın.</li>
	<li>Çözüm 5 1 litre ekleyin, karıştırıcı üzerinde açmak ve 35 mL/dk 4 h için sıvı. Not: Çözüm 5 dönüm karıştırıcı ve perfüzyon boyunca sonra bulanık.</li>
	<li>Ven perfüzyon kurulumundan 2 kesin ve 5-10dk Ultrasaf Su 4 değişiklikleri damar'ın iç ve dış şırınga veya 10 mL pipet ile yıkayın.</li>
	<li>Perfüzyon Kur 3 damar bağlanmak, çözüm 6 50 mL ekleyin ve 10 mL/dk 37 ° C odasında 4 h kurulum içeriğini boş ve damar kurulumundan kesmek için sıvı.</li>
	<li>Ven perfüzyon Kur 1 bağlanmak, çözüm 2 1 litre doldurmak ve gecede 35 mL/dak. tekrarlamak adım 5.4 ile adım 5,9 4 kez (için toplam 5 döngüleri), sıvı. Adım 5.2 belirtildiği gibi tekrar biyopsi alın. Not: Atla adım 5.8 ikinci bölümü döngülerle 1 ve 3.</li>
	<li>Belgili tanımlık tertibat içeriğini temizleyin. Çözüm 2 1 litre doldurun ve sıvı 24 h 35 mL/dak değişikliği çözüm için 2'den sonra 12 h. Kur içeriğini temizleyin. 1 L ultrasaf su doldurun ve 35 mL/dak değişiklik Ultrasaf Su 24 h için kurulum içeriğini sonra 12 h.Empty sıvı. Çözüm 7 1 L doldurun ve sonra 12 saat 7 24 h 35 mL/dak değişikliği çözüm için sıvı.</li>
</ol>6. Decellularization doğrulanması
<ol><li>Biyopsi standart protokolleri takip bir doku işlemci işlem 15 dakika süreyle Ultrasaf Su sabit formalin yıkayın ve parafin22embed.</li>
	<li>Bir microtome kullanma 5 µm bölümlerine kesmek ve leke Meyer Hematoksilen ve % 0,2 alkollü eozin (H & E) ile aşağıdaki standart protokolleri22.</li>
	<li>Çekirdekler için normal doku karşılaştırıldığında decellularized doku kaybı olup olmadığını denetlemek için mikroskop altında görüntüleyin.</li>
</ol>7. recellularization
<ol><li>Ven çözüm 8 50 mL içeren bir 50 mL tüp içinde yerleştirerek sterilize. Shaker 37 ° C'de 1 h için (devir/dakika) dakikada 80 rotasyonlar, kışkırtmak</li>
	<li>Laminar akış (SMD) andan itibaren kısırlık korumak için kabin altında ven başa. 50 mL steril çözüm 7 ve 500 µL anti-anti, içeren yeni bir 50 mL tüp için steril forseps kullanarak ven aktarın. Yukarıdaki gibi 12 h. değişiklik çözüm 7 en az iki kez arasında için tahrik.</li>
	<li>Steril forseps kullanarak, yeni bir 50 mL tüp ven aktarmak ve endotel medya 50 mL ekleyin. Yukarıdaki gibi 11 h için tahrik.</li>
	<li>SMD Kabin altında steril eldiven kullanarak biyoreaktör bir araya getirin. Ven biyoreaktör'ın damar giriş ve çıkış steril dikiş ve forseps ile için kravat.</li>
	<li>Ven biyoreaktör ve dolgu aynı orta ile bağlayın. 50 IU/mL heparin ekleyin ve 2 mL/dk 37 ° c 1 h için sıvı</li>
	<li>Heparin kaplı tüp tüpler donörden 15-25 mL taze kan (bağlı olarak damar'ın uzunluğu) toplamak ve Steen çözüm ile 1:1 oranında seyreltin. Daha sonra endokrin bezi kaynaklı vasküler endotelyal büyüme faktörü (EG-VEGF, 80 ng/mL), temel fibroblast büyüme faktörü (FGF-b, 4 µL/mL) ve asetil salisilik asit (5 µg/mL) ekleyin.</li>
	<li>37 ° C kuluçka %5 CO2 biyoreaktör taşımak ve 2 mL/dk 48 h için sıvı.</li>
	<li>Yaklaşık 12 h sonra biyoreaktör bir LAF dolap, hareket bir damla kan al ve kullanarak izleme cihazı bir kan şekeri glukoz ölçümü. Düzeyi daha az 3 mmol/L ise, glikoz getirmek için eklemek 7-9 mmol/l yineleme aralığı içinde bu adım her 8-12 h.</li>
	<li>48 h sonra biyoreaktör LAF kabin taşımak ve biyoreaktör kandan drenaj. 30 mL steril çözüm 7 ekleyin ve 5 dk. drenaj çözüm sıvı. 30 mL steril çözüm 7 ekleyin ve 5 dk. tekrar iki kez veya kan kırmızı renk kaybolur kadar sıvı. Not: Hücre ek doğrulama için biyopsi alınabilir. Damarı kesmek, ven 5 mm kenarları makasla kesmek ve onları atın. 5.2. adımda belirtildiği gibi bir biyopsi almak ve damar yeniden biyoreaktör (isteğe bağlı adım) bağlanın.</li>
	<li>Endotel orta 30-45 mL ekleyin ve 2 mL/dk kuluçka 96 h için sıvı. Not: endotel orta damarı batık kadar ekleyin.</li>
	<li>Biyoreaktör LAF kabinin taşımak, recellularized damar bağlantısını kesin, makas kullanarak ven 5 mm kenarları kesilmiş ve atmak. Biyopsi 5.2. adımda belirtilen şekilde alın.</li>
</ol>8. Recellularization doğrulanması
<ol><li>6 bölümündeki yönergeleri izleyin ve H & E boyama gerçekleştirmek. Slaytları hücrelerin varlığı için mikroskop altında incelemek.</li>
</ol>

<ol><li>Brockbank, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+cryopreservation+upon+vein+function+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Effects of cryopreservation upon vein function in vivo.</a> Cryobiology. 31 (1), 71-81 (1994).</li>
<li>O'Donnell, T. F. Jr, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+operative+findings+with+angiographic+and+noninvasive+hemodynamic+factors+associated+with+failure+of+polytetrafluoroethylene+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Correlation of operative findings with angiographic and noninvasive hemodynamic factors associated with failure of polytetrafluoroethylene grafts.</a> Journal of Vascular Surgery. 1 (1), 136-148 (1984).</li>
<li>Atala, A., Bauer, S. B., Soker, S., Yoo, J. J., Retik, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+autologous+bladders+for+patients+needing+cystoplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered autologous bladders for patients needing cystoplasty.</a> Lancet. 367 (9518), 1241-1246 (2006).</li>
<li>Raya-Rivera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+autologous+urethras+for+patients+who+need+reconstruction%3A+an+observational+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered autologous urethras for patients who need reconstruction: an observational study.</a> Lancet. 377 (9772), 1175-1182 (2011).</li>
<li>Macchiarini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+transplantation+of+a+tissue-engineered+airway%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Clinical transplantation of a tissue-engineered airway.</a> Lancet. 372 (9655), 2023-2030 (2008).</li>
<li>Olausson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+an+allogeneic+vein+bioengineered+with+autologous+stem+cells%3A+a+proof-of-concept+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Transplantation of an allogeneic vein bioengineered with autologous stem cells: a proof-of-concept study.</a> Lancet. 380 (9838), 230-237 (2012).</li>
<li>Olausson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Application+of+Tissue-Engineered+Veins+Using+Autologous+Peripheral+Whole+Blood%3A+A+Proof+of+Concept+Study%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">In Vivo Application of Tissue-Engineered Veins Using Autologous Peripheral Whole Blood: A Proof of Concept Study.</a> EBioMedicine. 1 (1), 72-79 (2014).</li>
<li>Ott, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+and+orthotopic+transplantation+of+a+bioartificial+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Regeneration and orthotopic transplantation of a bioartificial lung.</a> Nature Medicine. 16 (8), 927-933 (2010).</li>
<li>Uygun, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+reengineering+through+development+of+a+transplantable+recellularized+liver+graft+using+decellularized+liver+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix.</a> Nature Medicine. 16 (7), 814-820 (2010).</li>
<li>Conconi, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracheal+matrices%2C+obtained+by+a+detergent-enzymatic+method%2C+support+in+vitro+the+adhesion+of+chondrocytes+and+tracheal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+International%22%5BJournal%5D)">Tracheal matrices, obtained by a detergent-enzymatic method, support in vitro the adhesion of chondrocytes and tracheal epithelial cells.</a> Transplant International. 18 (6), 727-734 (2005).</li>
<li>Gilbert, T. W., Sellaro, T. L., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16519932">Decellularization of tissues and organs.</a> Biomaterials. 27 (19), 3675-3683 (2006).</li>
<li>Zhang, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+human+fetal+mesenchymal+stem+cells+for+off-the-shelf+bone+tissue+engineering+application%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The potential of human fetal mesenchymal stem cells for off-the-shelf bone tissue engineering application.</a> Biomaterials. 33 (9), 2656-2672 (2012).</li>
<li>Elebring, E., Kuna, V. K., Kvarnstrom, N., Sumitran-Holgersson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cold-perfusion+decellularization+of+whole-organ+porcine+pancreas+supports+human+fetal+pancreatic+cell+attachment+and+expression+of+endocrine+and+exocrine+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Cold-perfusion decellularization of whole-organ porcine pancreas supports human fetal pancreatic cell attachment and expression of endocrine and exocrine markers.</a> Journal of Tissue Engineering. 8, 2041731417738145(2017).</li>
<li>Masumoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+iPS+cell-engineered+cardiac+tissue+sheets+with+cardiomyocytes+and+vascular+cells+for+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Reports%22%5BJournal%5D)">Human iPS cell-engineered cardiac tissue sheets with cardiomyocytes and vascular cells for cardiac regeneration.</a> Science Reports. 4, 6716(2014).</li>
<li>Wiles, K., Fishman, J. M., De Coppi, P., Birchall, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Host+Immune+Response+to+Tissue-Engineered+Organs%3A+Current+Problems+and+Future+Directions%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+B+Reviews%22%5BJournal%5D)">The Host Immune Response to Tissue-Engineered Organs: Current Problems and Future Directions.</a> Tissue Engineering Part B Reviews. 22 (3), 208-219 (2016).</li>
<li>Young, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cells+in+the+eyes+of+an+immunologist%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology+Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">Endothelial cells in the eyes of an immunologist.</a> Cancer Immunology Immunotherapy. 61 (10), 1609-1616 (2012).</li>
<li>Graham, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+seeding+of+prosthetic+vascular+grafts%3A+early+experimental+studies+with+cultured+autologous+canine+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell seeding of prosthetic vascular grafts: early experimental studies with cultured autologous canine endothelium.</a> Archives of Surgery. 115 (8), 929-933 (1980).</li>
<li>Onuki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+endothelialization+model+for+the+study+of+Dacron+graft+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Accelerated endothelialization model for the study of Dacron graft healing.</a> Annals of Vascular Surgery. 11 (2), 141-148 (1997).</li>
<li>Clowes, A. W., Kirkman, T. R., Reidy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+arterial+graft+healing.+Rapid+transmural+capillary+ingrowth+provides+a+source+of+intimal+endothelium+and+smooth+muscle+in+porous+PTFE+prostheses%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of arterial graft healing. Rapid transmural capillary ingrowth provides a source of intimal endothelium and smooth muscle in porous PTFE prostheses.</a> American Journal of Pathology. 123 (2), 220-230 (1986).</li>
<li>L'Heureux, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+tissue-engineered+blood+vessels+for+adult+arterial+revascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Human tissue-engineered blood vessels for adult arterial revascularization.</a> Nature Medicine. 12 (3), 361-365 (2006).</li>
<li>Syedain, Z. H., Meier, L. A., Lahti, M. T., Johnson, S. L., Tranquillo, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+of+completely+biological+engineered+grafts+following+decellularization+into+the+sheep+femoral+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Implantation of completely biological engineered grafts following decellularization into the sheep femoral artery.</a> Tissue Engineering Part A. 20 (11-12), 1726-1734 (2014).</li>
<li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protocols%22%5BJournal%5D)">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harb Protocols. 2014 (6), 655-658 (2014).</li>
<li>Pollack, A. A., Taylor, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+exercise+and+body+position+on+the+venous+pressure+at+the+ankle+in+patients+having+venous+valvular+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">The effect of exercise and body position on the venous pressure at the ankle in patients having venous valvular defects.</a> Journal of Clinical Investigation. 28 (3), 559-563 (1949).</li>
<li>Li, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-molecular-weight+peptides+derived+from+extracellular+matrix+as+chemoattractants+for+primary+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Endothelium%22%5BJournal%5D)">Low-molecular-weight peptides derived from extracellular matrix as chemoattractants for primary endothelial cells.</a> Endothelium. 11 (3-4), 199-206 (2004).</li>
<li>van Ark, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+2+diabetes+mellitus+is+associated+with+an+imbalance+in+circulating+endothelial+and+smooth+muscle+progenitor+cell+numbers%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Type 2 diabetes mellitus is associated with an imbalance in circulating endothelial and smooth muscle progenitor cell numbers.</a> Diabetologia. 55 (9), 2501-2512 (2012).</li>
<li>Steen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+lungs+from+a+non-heart-beating+donor%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Transplantation of lungs from a non-heart-beating donor.</a> Lancet. 357 (9259), 825-829 (2001).</li>
<li>Van Raemdonck, D., Neyrinck, A., Cypel, M., Keshavjee, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4133548/">Ex-vivo lung perfusion.</a> Transplant International. 28 (6), 643-656 (2015).</li>
<li>Cross, M. J., Claesson-Welsh, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FGF+and+VEGF+function+in+angiogenesis%3A+signalling+pathways%2C+biological+responses+and+therapeutic+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Pharmacological+Science%22%5BJournal%5D)">FGF and VEGF function in angiogenesis: signalling pathways, biological responses and therapeutic inhibition.</a> Trends in Pharmacological Science. 22 (4), 201-207 (2001).</li>
<li>Peplow, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+factor-+and+cytokine-stimulated+endothelial+progenitor+cells+in+post-ischemic+cerebral+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">Growth factor- and cytokine-stimulated endothelial progenitor cells in post-ischemic cerebral neovascularization.</a> Neural Regeneration Research. 9 (15), 1425-1429 (2014).</li>
<li>Xiao-Yun, X., Zhao-Hui, M., Ke, C., Hong-Hui, H., Yan-Hong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucagon-like+peptide-1+improves+proliferation+and+differentiation+of+endothelial+progenitor+cells+via+upregulating+VEGF+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Science+Monitor%22%5BJournal%5D)">Glucagon-like peptide-1 improves proliferation and differentiation of endothelial progenitor cells via upregulating VEGF generation.</a> Medical Science Monitor. 17 (2), BR35-BR41 (2011).</li>
<li>Dragoni, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+stimulates+endothelial+colony+forming+cells+proliferation+and+tubulogenesis+by+inducing+oscillations+in+intracellular+Ca2%2B+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor stimulates endothelial colony forming cells proliferation and tubulogenesis by inducing oscillations in intracellular Ca2+ concentration.</a> Stem Cells. 29 (11), 1898-1907 (2011).</li>
<li>Sai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+fibroblast+growth+factor+is+essential+to+maintain+endothelial+progenitor+cell+phenotype+in+TR-BME2+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+and+Pharmaceutical+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Basic fibroblast growth factor is essential to maintain endothelial progenitor cell phenotype in TR-BME2 cells.</a> Biological and Pharmaceutical Bulletin. 37 (4), 688-693 (2014).</li>
<li>Gallus, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aspirin+and+other+platelet-aggregation+inhibiting+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Journal+of+Asutralia%22%5BJournal%5D)">Aspirin and other platelet-aggregation inhibiting drugs.</a> Medical Journal of Asutralia. 142 (1), 41-47 (1985).</li>
</ol>

SSH tutar Verigraft, kan damarlarının mühendislik doku teknolojisini lisanslı bir şirket hisse. Diğer yazarlar ifşa gerek yok.

Safen damarlar decellularization için burada sunulan teknik umbilikal ve meme damarlar gibi tüm küçük çaplı damarlar için uygulanabilir kolay, basit ve düşük maliyetli bir yöntemdir. Decellularization çözümleri ve bu yöntemde kullanılan onların konsantrasyonları bizim önceki sonuçları6,7' den vardır. Decellularization 5 döngüleri öneririz rağmen bazı damarlarda biz de 3 kür tam decellularization fark ettim. Ancak, tekrarlanabilir sonuçlar 5 döngüleri kullanarak elde edilmiştir. Bu iletişim kuralı uygulayarak, biz uzunlukları değişen damarları decellularized 30 cm'ye kadar başarıyla (yayınlanmamış sonuç). Decellularization çözümün çıkış tarafından 45 cm kaldırma 33 mmHg ven içinde basınç oluşturur. Deneyim, biz bütün damar düzgün decellularizing ve tekrarlanarak 5 döngüleri önemli bir adım olarak bu fark. Seçilen basınç normal safen ven basınç (5-10 mmHg) 3 kat daha yüksek ama yetersiz olduğu (varis)23damarlar. Ayrıca, bu yüksek basınç önemli bir güç damar duvarlarında oluşturur ve bu nedenle, verimli ve daha hızlı hücre kaldırılmasına yardımcı olabilir spekülasyon.
TnBP bir organik çözücü ve suda çözünmez olduğundan, deterjan bulutlu hale gelinceye kadar karıştırarak önemlidir; Aksi takdirde, deterjan yüzer olacak. Aynı nedenle, hortum çıkış ile cam kavanoz üstündeki deterjan'ın çıkış tüp çözümde, karışık TnBP tutmak için yerleştirildi. TnBP verimli kaldırılması damardan sonra onun kullanım her döngüsünde TnBP damlacıkları yıkanmış suda yüzen yokluğu tarafından görülebilir. Ayrıca DNaz adım atlama da decellularized bir doku üretti ama birkaç durumlarda, decellularized doku nispeten yüksek bir DNA içeriği fark etmişsinizdir. Yüksek basınç ve yüksek akış oranları verimli DNaz etkinlik için gerekli değildir, bir düşük perfüzyon oranı (10 mL/dak) kullanılabilir. Onun küçük boyutta kurulumu kolay İşlemede yardımcı olarak farklı peristaltik pompa kullanıldı. Çoğu hücre hasarı dönemi 2 sonuçlarında decellularization sırasında fark ettik beri DNaz tedavi döngüleri 1 ve 3 (yayınlanmamış sonuç) sırasında atlama öneririz. Karakterizasyonu ve miktar hücre dışı matriks proteinleri bu el yazması yapıldı değil olsa bile, bizim önceki deneyim benzer decellularization protokollerle biyomekanik özellikleri korunması gösterdi, hücre dışı matriks7yapısı ve proteinler. Bu damarlar ile bizim ön miktar deneyler (yayınlanmamış) benzer bir sonuç üretilen rağmen zaten yayınlanmış sonuçlarımız bu güven güçlendirecektir.
Bir önlemek uzun hücre genişletme kez, genişletilmiş hücreleri, cerrahi işgali ve rahatsızlık spontan mutasyonlar hasta için kan kullanarak recellularization bir rahat ve kolay kemik iliği genişletilmiş hücrenin üzerine işlemdir. Bu bilinen beri endothelialization da EPCs dolaşan oluşabilir, biz o perfüzyon ile endotel orta perfüzyon ardından kan ile olan recellularization için yeterli olacaktır. İki tür damarlar ile ekstra hepatik portal damar tıkanıklığı7çocuk içine implante edildi Emanet benzer bir yöntemle mühendislik ven dokuların nakli başarılı sonuçlarından görülür. Decellularized hücre dışı matriks içinde büyüme faktörleri EPCs kan24dolaşan eki verecektir spekülasyon. Recellularization benzer bir protokol sonrası damar hücreleri VEGF reseptör-2 ve farklılaşma (CD) 14 lümen CD45 ifade hücreleri adventitia7' de görüldü ise küme için olumlu gösterdi. Ayrıca sürekli endotel katman her durumda bu kişilerin progenitör hücre25dolaşan numaraları azalma Bilindiği gibi özellikle büyük ve hastalıklı hastalardan kan ne zaman istimal gözlenen değil ki hayal. Ancak, biz bu perfüzyon ile alıcının kendi önermeyi kan yüzünden decellularization maruz kalır ve böylece olumsuz inflamatuar reaksiyonları sadece dikim yerine nakledilen olasılığını azaltmak antijenleri pek çok maske decellularized kan damarları. Buna ek olarak, kan perfüzyon büyüme faktörleri lümen ve hangi sırayla recellularization vivo içindehızlı bir işlemde ortaya çıkan progenitör hücre dolaşımdaki artan numaraları işe olabilir adventitia, daha yüksek düzeyde yatırabilirsiniz.
Bu çalışmada kullanılan biyoreaktör tasarım avantajı tam Isıyla, kolay montaj, maliyet-etkililik, kolay kullanım ve en az zarar olasılığı vardır. Deneyim, dakikada 10 cm uzunluğunda recellularized geçerli Tasarım, damarları kullanarak. Düz-se bile kadar damarları 25 cm uzunluğunda de recellularized damar "U" şeklinde biyoreaktör içinde tutarak, bu doğrulanması gerektiğini. Biyoreaktör Tasarımı ven akış yönünü yerçekimine karşı ve normal insanlarda bu damarlar için akış yönünü olduğundan bu nedenle tasarlanmıştır gösterilmiştir. Endotel orta adım 12 h perfüzyon ven yaygõn ve gelen EPCs eki benzeşim artırmak olduğunu. İlave heparin ve perfüzyon 1 h için eklenmesi kan pıhtıları kan perfüzyon sırasında tüplerde şekillendirme riskini düşürür.
Gerekli kan kan hacmi damarın uzunluğuna bağlıdır. Damar içinde kan sokulmasına biz kan hacmi için takip temel ilkedir. Kan 45 mL büyük birimler işlerken, ara sıra karıştırma biyoreaktör alt hücre birikimi önlemek için gerekli olabilir. Biz Steen'ın çözüm yüksek miktarda protein ve dokuların sağlıklı organ nakli26,27sırasında korumak için gerekli bileşenler içerdiğinden kan için ekledi. VEGF ve b-FGF ek olarak onlar güçlü anjiogenik büyüme faktörleri28 ve geçiş, yayılmasını önleme ve EPCs29,30,31,32 farklılaşma varlıklarını indükler faydalıdır . Eklendi VEGF miktarı EPCs yayılması 80 ng/mL nerede görülmüş önceki yayınlanmamış sonuçlarımız temel alır. Aspirin ilavesi böylece endotel tabakası kendi eki olasılığını azaltarak trombosit33 aktivasyonu engeller. Sürekli izlenmesi ve glikoz ilavesi de hücre çoğalması ve hemoliz kırmızı kan hücrelerinin önlenmesi için faydalı olacaktır.
Sadece basit kan örneği alıcıdan gelen gerekli olduğu için daha az teknik uzmanlık gerektiren bir kolay ve uygulanabilir prosedür olarak kabul edilebilir. Burada bitirmek için baştan gösterilen tüm prosedürü 20 gün alır rağmen, decellularized damarlar olarak saklamak bir raftan ürün hastalar için 8 gün yordamına kısaltacaktır. Decellularized damarlar depolanmasını Teknik olarak recellularization verimliliği etkilememelidir rağmen değerlendirilmelidir. Aşağıdaki yordamı oluşturulan doku mühendisliği damarları tıkalı damarlar, varis bağışıklık suppression gerek kalmadan önde gelen ve böylece daha iyi bir kalite sağlayan venöz yetmezlik yerine bypass ameliyatları için klinikte kullanılabilir hayat hasta için.

Vasküler kanallar gibi anevrizma, karotid arter stenoz ve ateroskleroz ciddi vasküler sorunlar için önde gelen birkaç klinik koşulları için gereklidir. Cerrahlar otolog, allojeneik veya sentetik vasküler kanallar fonksiyonel kan akımı geri yüklemek için kullanın. Otolog kan damarları kullanımı hala ideal yaklaşım olarak kabul rağmen hastalarda oldukça sınırlı olduğunu. Allojenik veya sentetik Greftler gibi alternatifleri immünsüpresif tedaviler ve zavallı açıklık reoperation1,2önemli sağlık ülkelere ekonomik yükleri kaynaklanan, önde gelen derin sorunları var. Doku mühendisliği kan damarlarının doğal Homoloji ve otolog hücrelerin Greftler sunmayı amaçlamaktadır. Böylece, alıcı bağışıklık sistemi transplante greft kendini olarak tanır ve böyle bir greft doğal proteinler ve özgün yapılandırmayı hücrelerde içerdiğinden, daha iyi geçerli alternatifleri ile karşılaştırıldığında işlev. Mesane3, üretra4, nefes borusu5ve damarlar6,7, başarıyla klinikte kullanılmış gibi doku organları, mühendislik.
Kişiselleştirilmiş Greftler üretmek için doku mühendisliği bir greft decellularization ve recellularization ardından bir donörden gerektirir. Decellularization hücreleri doku ve organların8,9,10' dan kaldırmak için umut verici bir teknolojidir. Decellularization belirli fiziksel, kimyasal ve enzimatik Yöntemler11 veya bunları birleştirerek tarafından gerçekleştirilebilir. Bu yöntemlerin en uygun kullanımı decellularized dokularda benzer yapısal ve işlevsel proteinler bir hücre dışı matriks yerli dokulara benzer olabilir. Böyle organları eki, geçiş, yayılması ve gelen kök hücre farklılaşma geliştirmek iç kapasitesine sahip.
Recellularization hücre greft tohum dinamik bir süreçtir ve alıcı kök hücre klinik ekimi için kullanılabilir. Şu anda bu tür amaçlar için kullanılan kök hücreler kemik iliği, mezenkimal ve organ sakinleri3,5,6içerir. Hayvan ve araştırma odaklı çalışmalar fetal ve indüklenmiş pluripotent12,13,14vardır mezenkimal kökenli kök hücrelerden kullandık. Bu işlem bir biyoreaktör (damarı tutar ve sıcaklık, gazlar, pH ve basınç gibi gerekli koşulları sağlayan bir odası) gerektirir hücreleri ve Kültür medya. Recellularization mücadelesine hücreleri belirli bir türü ve hangi tarafından bütün doku veya organ hücreleri ulaşabilirsiniz tohum bir strateji gerekli sayıda elde etmektir. Rağmen hiçbir tam doku veya organ yapısal ve işlevsel olarak yapılmış oluşturulan ve şimdiye kadar birkaç gelişmeler alan ve ilk sonuçları gelecekteki olasılığı15göster değerlendirildi. Ven tuşu fonksiyonu iltihabi hücre infiltrasyonu doku ve daralma içinde yardımcı olur ve kan basıncı16tutmak için güç sağlar orta düz kas katmanı içine denetler luminal endotel yatıyor. Çalışmalar sırasında hasar, anastomoz veya dolaşan endotelyal progenitor hücreler (EPCs) kan17,18,19endothelialization oluştuğunu göstermiştir. Bizim strateji recellularization damarlar için kan dolaşan mevcut EPCs kullanır.
Doku mühendisliği damarları ve arterler farklı decellularization recellularization stratejileri20,ve21takip çeşitli gruplar tarafından gerçekleştirildi. Grubumuz aynı zamanda gerçekleştirilen ve iliak ve meme damarlar6,7için decellularization ve recellularization stratejiler geliştirdi. Decellularization Triton X-100, tri-n-butil fosfat (TnBP) ve enzim deoksiribonükleaz (DNaz) damarda ajitasyon tarafından gerçekleştirildi. Recellularization kemik iliği türetilmiş endotel ve düz kas hücreleri6 veya periferik kan7kullanılarak gerçekleştirildi. Ekstra hepatik portal damar tıkanıklığı6,7ile fonksiyonel kan akımı pediatrik hastalarda ekiminde sağlanmasında klinik vaat iki protokolü tarafından damarları recellularized.
Biz şu anda küçük çaplı damarlar decellularization, recellularization ve biyoreaktör işlenmesi kolay ve geliştirilmiş performans için aynı iletişim kuralını değiştirilmiş bir versiyonu geliştirdik. Geçerli decellularization iletişim kuralı deterjanlar ajitasyon deterjanlar ile yerine basınç uygulayarak ven yoluyla perfüzyon gerekli. Recellularization Protokolü Önkoşullanma hücre adezyon ve ek hücre adezyon, hayatta kalma ve yayılmasını önleme geliştirmek için kan dolaşan içinde büyüme faktörlerinin artırmak için ek bir adım içerir. Piyasada bulunan ürünleri kullanarak Biyoreaktör Tasarımı da iyileştirilmiştir. Bu yazıda, biz decellularization ve recellularization insan safen damar gerçekleştirmek için değiştirilmiş bir protokol ayrıntılı bir açıklama mevcut.

<table><tbody><tr><td>4 Bağlantı Noktalı Kapak</td><td>CPLabSafety</td><td>WF-GL45-4Kit</td><td></td></tr><tr><td>Asetil salisilik asit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5376</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Anti</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>B-FGF</td><td>Lonza</td><td>cc-4113B</td><td></td></tr><tr><td>Kan Şekeri izleme sistemi - Serbest stil Lite</td><td>Abbott</td><td>70808-70</td><td></td></tr><tr><td>D-Glikoz</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G8769</td><td></td></tr><tr><td>DNase-I</td><td>Worthington</td><td></td>, Dulbecco'nun CaCl2 ve MgCl2Sigma Aldrich D8662 EDTA disodyum tuzu dihidrat AlfaAesar A15161 ile PBS'sini LS0020007<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td>.<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td> </td><td></td>OB</tr><tr><td>EGM-2 Büyüme Faktörleri Kiti</td><td>Lonza</td><td>CC-4176</td><td></td></tr><tr><td>EG-VEGF</td><td>Peprotech</td><td>100-44</td><td></td></tr><tr><td>Cam şişe 250ml</td><td>VWR</td><td>2151593</td><td>GL45 kapaklı herhangi bir şişe kullanılabilir</td></tr><tr><td>Cam şişe 1L</td><td>VWR</td><td>2151595</td><td>GL45 kapaklı herhangi bir şişe kullanılabilir</td></tr><tr><td>Alt hortum çıkışlı cam kavanoz 500ml</td><td>Kimble Chase Yaşam Bilimleri</td><td>14607</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Leo</td><td>387107</td><td></td></tr><tr><td>Heparin Kaplı Vacutainer Tüpleri</td><td>Becton Dickinson</td><td>368480</td><td></td></tr><tr><td>İnsan AB Serumu</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H3667</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>Luer Dişi 1/8 "ID Barb</td><td>Oina</td><td>LF-2PP-QC</td><td>3X5mm silikon tüp</td></tr><tr><td>Luer için 3/32 "ID Barb Oina</td><td></td><td>LF-1.5PP-QC</td><td>ile Kadın 2X4mm silikon tüp için</td></tr><tr><td>Luer Erkek 3/32 "ID Barb</td><td>Oina</td><td>LM-1.5PP-QC</td><td>ile 2X4mm silikon tüp</td></tr><tr><td>için Luer Erkek 1/8 "ID Barb</td><td>Oina</td><td>LM-2PP-QC</td><td>3X5mm silikon tüp için</td></tr><tr><td>Luer Erkek 5/32 "ID Barb Cole Parmer</td><td></td><td>EW-45518-06</td><td>5X8mm silikon tüp için</td></tr><tr><td>MCDB 131</td><td>Life Teknolojiler</td><td>10372-019</td><td></td></tr><tr><td>Asetik asit başına</td><td>Sigma Aldrich</td><td>433241</td><td></td></tr><tr><td>Peristaltik pompa I</td><td>Masterflex</td><td>7524-45</td><td>Hücre Giderme kurulumu 1 ve 2 için. Kullanılan kaset 7519-75</td></tr><tr><td>Peristaltik pompa II</td><td>Hücre</td><td>Giderme kurulumu 3 ve Yeniden Hücrelendirme biyoreaktörü için</td> <td>ISM941'dir</td>.</tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5405</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum hidrojen fosfat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P9791</td><td></td></tr><tr><td>İndirgeyici Konnektör 1.5mmX2.5mm</td><td>Biotech</td><td>ISM569A</td><td></td></tr><tr><td>Shaker</td><td>Ika</td><td>KS4000 kontrol</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Azide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>71290</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Sigma Aldrich</td><td>13423</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum hidrojen fosfat</td><td>Merck</td><td>71640-M</td><td></td></tr><tr><td>Steen çözeltisi</td><td>Xvivo</td><td>19004</td><td></td></tr><tr><td>Sütür</td><td>Agnthos</td><td>14817</td><td></td></tr><tr><td>Tri-n-bütil Fosfat</td><td>AlfaAesar</td><td>A16084.AU</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X-100</td><td>AlfaAesar</td><td>A16046. OF</td><td></td></tr><tr><td>Tüp 60ml düz tabanlı</td><td>Sarstedt</td><td>60596</td><td></td></tr><tr><td>Tüp A</td><td>VWR</td><td>2280706</td><td>Hücre giderme perfüzyon steup 1 ve 2 için her biri 25 cm uzunluğunda 3 parça kesin</td></tr><tr><td>Tüp B</td><td>VWR</td><td>2280706</td><td>Hücre giderme perfüzyonu için 35 cm uzunluğunda 1 parça kesin Steup</td></tr><tr><td>Tüp C</td><td>VWR</td><td>2280706</td><td>Decellularization perfüzyonu için her biri 75 cm uzunluğunda 5 parça kesin Steups 1-3</td></tr><tr><td>Tüp D</td><td>VWR</td><td>2280706</td><td>Kesim Hücre giderme perfüzyonu için 90 cm uzunluğunda 1 parça steup 2</td></tr><tr><td>Tüp E</td><td>VWR</td><td>2280706</td><td>Kesim Reselülerizasyon için 20 cm uzunluğunda 1 parça steup</td></tr><tr><td>Tüp F</td><td>VWR</td><td>2280713</td><td>Hücre giderme perfüzyonu için her biri 15 cm uzunluğunda 2 parça kesin steup 1 ve 2</td></tr><tr><td>Tüp G</td><td>VWR</td><td>2280713</td><td>Hücre giderme perfüzyon steup 1 ve 2 için her biri 60 cm uzunluğunda 2 parça kesin</td></tr><tr><td>Tüp H</td><td>VWR</td><td>2280703</td><td>Reselülerizasyon perfüzyon steup için 15 cm uzunluğunda 1 parça kesin</td></tr><tr><td>Tüp I</td><td>VWR</td><td>2280703</td><td>Reselülerizasyon perfüzyon steup için 20 cm uzunluğunda 1 parça kesin</td></tr><tr><td>Tüp J</td><td>VWR</td><td>2280703</td><td>Hücreselleştirme perfüzyon için 25 cm uzunluğunda 1 parça kesin steup</td></tr><tr><td>Tüp K</td><td>VWR</td><td>2280703</td><td>Hücreselleştirme perfüzyon steup için her biri 35 cm uzunluğunda 2 parça kesin</td></tr></tbody></table>

decellularization ve recellularization metodoloji insan safen damarlar için

Decellularization and Recellularization Methodology for Human Saphenous Veins

Vasküler kanalların çoğu vasküler cerrahi sırasında kullanılan kez immünosupresyon ve zavallı a_ılabilinirse neden komplikasyonlara yol allojenik veya sentetik Greftler vardır. Doku mühendisliği doğal hücre dışı matriks decellularization ve recellularization yöntemini kullanarak alıcının hücreleri içeren kişiselleştirilmiş Greftler oluşturmak için yeni bir çözüm sunuyor. Biz insan safen ven ve recellularization decellularization periferik kan perfüzyon tarafından gerçekleştirmek için detaylı bir yöntemi gösterir. Ven ventriküler 1 oranında decellularized Triton X-100, % 1'tri-n-butil-fosfat (TnBP) ve 2.000 Kunitz birimleri deoksiribonükleaz (DNaz). DNaz 10 mL/dk 4 h için 37 ° C'de periosteum iken Triton X-100 ve TnBP 35 mL/dk 4 h için derin. Ven Ultrasaf Su ve PBS yıkanmış ve % 0.1 Perasetik asit sterilize edilmiştir. Tekrar PBS içinde yıkanmış ve endotel ortamda preconditioned. Damar bir biyoreaktör bağlı ve periosteum ile endotel orta 50 IU/mL içeren doldurmak biyoreaktör taze kan ile Steen çözüm seyreltilmiş 1:1 ve endokrin bezi kaynaklı eklemek için 1 h. Recellularization heparin gerçekleştirildi vasküler endotelyal büyüme faktörleri (80 ng/mL), temel fibroblast büyüme faktörleri (4 µL/mL) ve asetil salisilik asit (5 µg/mL). Biyoreaktör sonra bir kuluçka taşındı ve glikoz 3-9 mmol/l arasında koruyarak 2 mL/dk 48 h için derin Daha sonra damar endotel orta ile dolu ve PBS ile yıkanmış kuluçka 96 h için derin. Triton X-100, TnBP ve DNaz ile tedavi 5 döngülerle safen ven decellularized. Decellularized ven normal ve recellularized damarlar (ışık kırmızı) aksine beyaz baktım. Hematoksilen ve eozin (H & E) boyama çekirdeği varlığı sadece normal ama decellularized damarlar gösterdi. Recellularized şekilde, H & E boyama ven luminal yüzeyinde hücreleri varlığını gösterdi.

Normal bir damar brüt morfolojisi ışıktır kırmızı (Şekil 3A). Kırmızı renk ilerici decellularization döngülerle kaybolur (döngüsü 2, Şekil 3B; 3, döngüsü Şekil 3 c) ve 5th döngüsü tarafından görünüyor soluk ve beyaz (şekil 3D). Recellularized damar kan perfüzyon (Şekil 3E) ve endotel medya perfüzyon (Şekil 3F) sonra parlak kırmızı renkte görünüyor. (Şekil 4B) H &amp; E boyama içinde yok Mavi çekirdeği görüldüğü decellularization tedavi 5 döngüleri damar hücreleri başarıyla kaldırıldı. Buna ek olarak, birkaç çekirdek normal şekilde (Şekil 4A) görüldü. Luminal tarafındaki ekli hücrelerin varlığı recellularized ven kan 48 h (Şekil 4 c, siyah ok) ve sonra 96 h (şekil 3D, siyah oklar) endotel orta ile perfüzyon ile H &amp; E boyama içinde görülür.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57803/57803fig1.jpg"> Resim 1 : Perfüzyon kurulumları için decellularization montajı. A) birleştirilmiş decellularization kurulumu 1 Triton X-100 için gösteren ve yıkama resim. Beyaz ok çözümleri için akış yolu gösterme ve kırmızı oklar giriş ve çıkışları ven ve çözümler için gösterir. B) TnBP perfüzyon monte decellularization kurulum 2 gösteren resim. Benzer şekilde, decellularization Kur 1, olduğu gibi beyaz ok çözümleri için akış yolunu göstermek ve kırmızı oklar giriş ve çıkışları ven ve çözümler için gösterir. C) deoksiribonükleaz perfüzyon monte decellularization Kur 3 gösteren resim. Beyaz ok çözümleri için akış yolu gösterme ve kırmızı oklar alıcılar ven ve çözümler için gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57803/57803fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a> 
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57803/57803fig2.jpg"> Resim 2 : Hazırlık ve recellularization için biyoreaktör montajı. A) resim gösteren malzemeler biyoreaktör montajı için gerekli. B) bağlayıcılar (kırmızı oklar), azaltmak amacıyla yerleşim gösteren 4-port kap içine resmini puan damar giriş ve çıkış (beyaz ok) ve düzeni tüpler H, ben ve J. bağlanmak için Ücretsiz Tüp H sonuna medya dönmek için biyoreaktör yerleştirilir. C) ve dışarı gidiyor ilgili tüpler 4 bağlantı noktası kap üst taraftan görülebilir. D) monte biyoreaktör gösteren resim. E) bütün biyoreaktör Kur peristaltik pompa ile gösteren resim. Tüpler K biyoreaktör bağlantılarından peristaltik pompa uzatın. F) bütün biyoreaktör perfüzyon sistemi şematik gösterimi. Turuncu oklar, akış yönünü gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57803/57803fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a> 
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57803/57803fig3.jpg"> Şekil 3 : Decellularization ve recellularization sırasında damarlar morfolojisi brüt. A) normal damar brüt morfolojisi parlak kırmızı renkte görünüyor. Rengi decellularization devir sayısının artması ile kaybolur B) 2 döngüsü ve C) 3 döngüsü. D) 5 tarafından devir, damar görünüyor soluk ve beyaz. E ile ventriküler sonra ven) kan 48 h ve F) endotel ortamı için 96 h ile bir kez daha parlak kırmızı renkte görünüyor. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57803/57803fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57803/57803fig4.jpg"> Şekil 4 : Decellularized ve recellularized damarlar karakterizasyonu. Hematoksilen ve görüntü boyama eozin A) normal damar içeren birçok mavi çekirdeği ama yok bunlar içinde B) decellularized damar. İle recellularized ven C) kan ile ve 48 h için D) 96 h, ek hücre (siyah oklar) lümen, endotel orta olduğunu fark ettim. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57803/57803fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Burada, deterjanlar ve recellularization tarafından periferik kan ve endotel orta perfüzyon kullanarak safen ven decellularization için bir protokol açıklayın.

Decellularization ve Recellularization metodoloji insan safen damarlar için

Vascular conduits used during most vascular surgeries are allogeneic or synthetic grafts that often lead to complications caused by immunosuppression and ...

Bu yöntem, safen ven dokusu mühendisliği için ayrıntılı bir prosedürü açıklar. Ayrıca basit aparatlar kullanarak hücreden arındırma kurulumlarının ve yeniden hücrelendirme için biyoreaktörün hazırlanmasını da gösteriyoruz. Bu tekniğin temel avantajı, yeniden hücrelendirme için basit bir kan örneğine ihtiyaç duyulması, böylece ağrılı kemik iliği toplanması ve zaman alıcı hücre kültürü prosedürlerinin ortadan kaldırılmasıdır.Triton-X 100 perfüzyon ve yıkama için hücre giderme kurulumunu hazırlayın. İki litrelik bir hazneye, üç tüp parçasını da bantlayın A. Bir tüpü, deterjanın girişi için kenarın haznenin dibine değdiği duvara bantlayın. Diğer iki tüpü, damarın uzunluğuna bağlı olarak, aralarında beş ila 10 santimetre mesafe olacak şekilde karşı duvara bantlayın.Bu tüplerin en az beş santimetresi de odanın zeminine bantlanmalıdır. Erkek ve dişi yem konektörlerini kullanarak deterjanın giriş borusunu B borusuna bağlayın. Daha sonra B tüpünü F tüpüne ve F tüpünü C tüpüne bağlayın.Şimdi, F tüpünü peristaltik pompanın kasetine yerleştirin. Başka bir tüp C alın ve bir ucunu damarın çıkışına bağlayın. Diğer ucunu, alt hortum çıkışı ile donatılmış ve haznenin 45 santimetre yukarısına yerleştirilmiş bir cam kavanoza yerleştirin ve sabitlemek için bantlayın.Bu, deterjan çıkışı görevi görür. Ardından, G tüpünün bir ucunu cam kavanozun hortum çıkışına itin ve diğer ucunu damar haznesine yerleştirin. Ardından, metin protokolünde ayrıntılı olarak açıklandığı gibi TnBP perfüzyonu için hücre çözme kurulumu iki hazırlayın.Ayrıca, metinde ayrıntılı olarak açıklandığı gibi DNA'nın perfüzyonu için hücre giderme kurulumu üç hazırlayın ve 37 santigrat dereceye yerleştirin. Yeniden hücreselleştirme biyoreaktörünü hazırlamak için, tüp H'yi damarın çıkışı olarak işlev görmesi için dört portlu bir kapağın bir portuna yerleştirin. İkinci bağlantı noktasına, medya girişi olarak işlev görmesi için tüp I'i yerleştirin.Ve üçüncü porta, damarın girişi için J tüpünü yerleştirin. Ardından, medya çıkışı olarak hizmet etmesi için H tüpünün diğer ucunu dördüncü bağlantı noktasına takın. İndirgeyici konektörleri H ve J tüplerinin iç uçlarına bağlayın. J tüpünün diğer ucunu U şeklinde bükün ve bir dikişle bağlayın.Şimdi, 250 mililitrelik bir bardağa düz tabanlı 60 mililitrelik bir tüp yerleştirin. Ardından, tüp K'nin bir ucunu damar girişine bağlayın ve diğer ucunu tüp E'ye bağlayın. Daha sonra hazırlanan kapak kurulumunu şişede bulunan tüpe yerleştirin.Son olarak, biyoreaktörü otoklavlama ile sterilize edin. Makasla iki milimetre uzunluğunda bir biyopsiyi kesmeden önce metin protokolünde ayrıntılı olarak açıklandığı gibi bir insan safen damarı üzerinde iki donma-çözülme döngüsü gerçekleştirin. Biyopsiyi oda sıcaklığında 24 ila 48 saat formaldehit içinde sabitleyin.Damarın her iki ucunu bir dikişle bir erkek ve dişi yem konektörünün dikenlerine bağlayın. Damarı hücreden arındırma kurulumuna bağlayın, birinci kurulum yapın ve odayı bir litre çözelti iki ile doldurun. Şimdi, dakikada 35 mililitre hızında 15 dakika perfüze edin ve kurulumun içeriğini boşaltın.Daha sonra, bir litre çözelti dört ekleyin ve dakikada 35 mililitre olarak dört saat boyunca perfüze edin. İçeriği boşaltın, 500 mililitre çözelti iki ekleyin, beş dakika perfüze edin ve içeriği tekrar boşaltın. Damarı perfüzyon kurulumu bir'den ayırın ve perfüzyon kurulumu ikisine bağlayın.Daha sonra, bir litre çözelti beş ekleyin, karıştırıcıyı açın ve dakikada 35 mililitre olarak dört saat boyunca perfüze edin. Damarı ikinci perfüzyon ayarından ayırın ve damarın dışını iki kez 20 mililitre ultra saf su ile yıkayın. Daha sonra damarın içini iki kez 20 mililitre ultra saf su ile beş ila 10 dakika yıkamak için bir şırınga kullanın.Metin protokolünde açıklandığı gibi perfüzyon kurulumu üç ile perfüzden sonra, damarı perfüzyon kurulumu bir'e bağlayın. Bir litre çözelti iki'yi doldurun ve gece boyunca dakikada 35 mililitre perfüze edin. Nükleer materyalin tamamen uzaklaştırılması için perfüzyon işlemini dört kez tekrarlayın.Perfüzyonu takiben, kurulumu boşaltın, bir litre çözelti ikisini doldurun ve dakikada 35 mililitre ile 24 saat boyunca perfüze edin. 24 saat sonra kurulumu tekrar boşaltın ve bir litre ultra saf su ile doldurun. Dakikada 35 mililitre ile 24 saat daha perfüz.Son olarak, aynı koşulları kullanarak, ancak yedinci çözelti ile perfüzyonu tekrarlayın. Metin protokolünde açıklandığı gibi hücre çözmenin doğrulanmasından sonra, damarı 50 mililitre çözelti sekiz içeren 50 mililitrelik bir tüpe yerleştirerek sterilize edin. 37 santigrat derecede bir saat boyunca bir çalkalayıcıda dakikada 80 dönüşte çalkalayın.Steriliteyi korumak için laminer bir akış kabininde çalışmak, şimdi steril damarı 50 mililitre steril çözelti yedi içeren ve 500 mikrolitre anti anti içeren yeni bir 50 mililitre tüpe aktarmak için steril forseps kullanın. Damarı daha önce olduğu gibi 12 saat boyunca çalkalayın, aralarında en az iki kez çözelti yedi'yi değiştirin. Steril forseps kullanarak, damarı 50 mililitrelik yeni bir tüpe aktarın, 50 mililitre endotel ortamı ekleyin ve 11 saat boyunca çalkalayın.Şimdi damarı steril sütür ve forseps ile biyoreaktörün damar giriş ve çıkışına bağlayarak bağlayın ve kapak kurulumunu 250 mililitrelik şişeye kadar sıkın. Biyoreaktörü aynı endotel ortamı ile doldurun. Mililitre başına 50 birim heparin ekleyin ve inkübatörde dakikada iki mililitre olarak bir saat perfüze edin.Donörden 15 ila 25 mililitre taze kanı heparin kaplı vakutainer tüplerde toplayın ve steen solüsyonu ile bire bir seyreltin. Daha sonra endokrin bezinden türetilmiş vasküler endotelyal büyüme faktörü, bazik fibro blast büyüme faktörü ve ince bir salisilik asit ekleyin. Endotel ortamını biyoreaktörden boşalttıktan sonra, içine kanı ekleyin ve yüzde beş karbondioksit içeren 37 santigrat derece inkübatörde dakikada iki mililitre hızında 48 saat boyunca perfüze edin.Yaklaşık 12 saat sonra, biyoreaktörden bir damla kanı çıkarmak için laminer akış kabininde çalışın ve bir kan şekeri izleme cihazı kullanarak glikozu ölçün. Seviye litre başına üç milimolden azsa, litre başına yedi ila dokuz milimol aralığına getirmek için glikoz ekleyin. İnkübatöre geri döndükten 48 saat sonra, laminer akış kabinindeki biyoreaktörden kanı boşaltın.30 mililitre steril çözelti yedi ekleyin, beş dakika perfüze edin ve çözeltiyi boşaltın. Kan kırmızısı renk kaybolana kadar bu işlemi tekrarlayın. Son olarak, 30 ila 45 mililitre endotel ortamı ekleyin ve inkübatörde dakikada iki mililitre hızında 96 saat boyunca perfüs yapın.Hücreli damarı laminer akış kabinindeki biyoreaktörden ayırın, damarın beş milimetre kenarını makas kullanarak kesin ve atın. Daha önce olduğu gibi bir biyopsi alın, formaldehite yerleştirin ve metin protokolünde açıklandığı gibi yeniden hücreselleşmenin doğrulamasını gerçekleştirin. Normal bir damarın brüt morfolojisi parlak kırmızı renkte görünür.Kırmızı renk, ilerleyici hücreden arındırma döngülerinde kaybolur ve beş tedavi döngüsünden sonra soluk ve beyaz görünür. Periferik kan ve endotel ortamının perfüzyonu ile yeniden hücrelenen ven tekrar parlak kırmızı renkte görünüyordu. Burada, birçok mavi çekirdeğin varlığını gösteren normal damarın temsili bir Hemotoksilin ve Eozin boyama görüntüsü gösterilmektedir.Bununla birlikte, deselüler venin Hemotoksilin ve Eozin boyamasında mavi çekirdekler görülmedi. Kan ve endotel ortamı ile perfüze edilen reselüler vende, Hemotoksilin ve Eozin boyaması lümende hücre bağlanmasının varlığını gösterdi. Bu videoyu izledikten sonra, safen venin deterjanlarla hücreden arındırılması ve periferik kan ve endotel ortamı ile yeniden hücreselleştirilmesinin nasıl gerçekleştirileceğini iyi anlamış olmalısınız.Triton-X 100, TnBP ve DNA'ların basınç altında perfüzyonunu kullanan bu hücre giderme tekniği, insan safen damarlarından çekirdeklerin çıkarılmasında başarılı ve tekrarlanabilirdi. Bu tekniğin tamamlanması 20 gün sürse de, hücreden arındırılmış damarın raf sonrası ürün olarak saklanması işlem süresini sekiz güne indirecektir. Alıcının periferik kanını kullanarak damarların yeniden hücreselleştirilmesi klinik olarak anlamlı olarak kabul edilebilir.Benzer protokol ile reselüler hale getirilen venler, operasyon sonrası fonksiyonel bir kanlanma sağlayarak klinik transplantasyonda umut vaat etmiştir. Küçük değişikliklerle, bu protokol herhangi bir damar tipi için ve tüm vasküler ameliyatlar için kliniklerde kişiselleştirilmiş bir greft olarak kullanılabilir.

decellularization-recellularization-methodology-for-human-saphenous

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Perfüzyon decellularization organ ekstraselüler matriks kompozisyonu ve mikromimarisini korur tüm karaciğer iskeleleri üretmek için yeni bir tekniktir. Burada, hepatositler ile perfüzyon decellularization ve sonraki repopulation kullanarak tüm organı iskeleleri hazırlama yöntemi açıklanmıştır. Fonksiyonel ve transplante karaciğer greft tekniği kullanılarak oluşturulabilir.

Tüm karaciğerleri Decellularization ve Recellularization

Kan ile temas eden otolog hücre ve test biyouyumluluk biyomalzemeler tohumlama titanyum için bir yöntem açıklanmıştır. Bu yöntem, cerrahi implantasyon dakika içinde domuz venae kava numaralı seribaşı endotel progenitör hücrelerin ve titanyum tüpler, kullanır. Bu teknik, diğer birçok implante biyomedikal cihazlar için uyarlanabilir.

Otolog Endotelyal progenitör Hücre-Yayımlama Teknoloji ve Büyük Hayvan Modeli Kardiyovasküler Cihazlar için Biyouyumluluk Testleri

Test sistemleri olarak insan 3D tümör dokuları oluşturmak için yöntemler tarif edilmiştir. Bu teknolojiler, decellularized Biyolojik Vaskülarize İskele (BioVaSc), primer insan hücreleri ve bir akış biyoreaktör içinde dinamik koşullar altında hem de statik altında kültürlenebilir bir tümör hücre hattı, dayanmaktadır.

İnsan 3D Doku Mühendisliği<em&gt; In vitro</em&gt; Tümör Test Sistemi

Intimal hiperplazi (İH) ve ven greft yetmezliği gelişimine yol açan mekanizmalar hala tam olarak anlaşılamamıştır. Bu çalışma kontrollü akış ve basınç altında, insan damarları serpmek için bir ex vivo sistemini anlatmaktadır. Ayrıca dış hasırlı verimliliği fıtığın gelişimi değerlendirildi sınırlamak için.

İnsan Safen Ven Prosedürü Ex vivo Perfüzyon ve Dış Takviye

Burada, biz çift tohumlama kısmen uyarılmış pluripotent kök hücre ile farelere aşılama için fonksiyonel doku mühendisliği gemi greft oluşturmak için bir protokol mevcut (PiPSC) - Bir decellularized damar iskele biyoreaktör üzerinde elde edilen endotel hücreleri - düz kas hücreleri ve PiPSC türetilmiş.

Bir Fare Modeli Doku mühendisliği Kapların Üretimi ve Tırnak

Bu yöntem, decellularization karmaşık bir solid organ ozmotik şok ve perfüzyon en az organ matris bozulma ile iyonik deterjan dayalı basit bir protokol kullanarak sağlar. Gerçek zamanlı akış dinamiği ve hücresel enkaz çıkış izleme ile basınçlı bir kese içinde insan kalpleri bir roman decellularization tekniği oluşmaktadır.

Decellularization ters yönde bir basınçlı bir kese içinde bütün insan kalp

Burada sunulan alt bacaktan antegrad endoskopik ven hasat için bir protokoldür, hangi güvenle rutin koroner arter bypass greftleme tanıtılabilir. Ven greftleri, bacakların konumlandırılması, vene minimal invaziv erişim ve antegrad endoskopik ven hasadı ile bu standart protokole göre mükemmel greft kalitesi sunar.

Alt Bacaktan Büyük Saphenous Ven Greft Kalitesinin İyileştirilmesi için Köprüven Damar Hasat ile Sinerji Antegrade Endoskopik

Protokol, özelleştirilmiş bir perfüzyon biyoreaktöründe flep vaskülatürü boyunca sodyum dodesil sülfat deterjanının perfüzyonu ile vaskülarize domuz fleplerinin cerrahi tedarikini ve ardından desellülarizasyonunu açıklamaktadır.

Özelleştirilmiş Perfüzyon Biyoreaktöründe Domuz Vaskülarize Fleplerinin Tedariği ve Perfüzyon-Desellülarizasyonu

Bu yazıda kompozit sıçan arka bacakları için cerrahi teknik ve desellülarizasyon süreci anlatılmaktadır. Desellülarizasyon, bir ex vivo makine perfüzyon sistemi aracılığıyla düşük konsantrasyonlu sodyum dodesil sülfat kullanılarak gerçekleştirilir.

Vaskülarize Kompozit Allotransplantasyon için Ex Vivo Perfüzyon Bazlı Biyoreaktör Kullanılarak Sıçan Arka Bacaklarının Tedariği ve Desellülarizasyonu

Burada, N-butil siyanoakrilat ve metakrioksi sülfolandan (NBCA + MS) oluşan orijinal bir sklerozan ve embolize edici siyanoakrilat bazlı yapıştırıcı kullanarak, şiddetli patolojik reflüden etkilenen büyük safen veni (GSV) ve küçük safen veni (SSV) tedavi etmek için bir protokol sunuyoruz.

N-Butil Siyanoakrilat ve Metakrilokoksi Sülfolana Dayalı Kopolimerik Yapıştırıcı Kullanılarak Büyük ve Küçük Safen Veninin Tıkanması

İnsan safen ven endotel hücrelerini (hSVEC'ler) izole etmek ve kültürlemek için bir protokol tanımladık. Ayrıca, hSVEC'lerde mekanik gerilimi incelemek için kesme gerilmesi ve gerilme üretmek için ayrıntılı yöntemler sunuyoruz.

İnsan safen ven endotel hücre izolasyonu ve kontrollü kayma stresi ve gerilme seviyelerine maruz kalma

Öğrenin insan safen damarlarının deküllülerizasyon ve reküllülerizasyon protokolünü. Deterjanlar ve biyoreaktör kullanarak doku mühendisliği için iskelet oluşturma yöntemini keşfedin.

Decellularization ve Recellularization metodoloji insan safen damarlar için

Daha fazla video keşfet