Üçüncü-biçim Drosophila Melanogaster merkezi sinir sisteminin etkinliğinin elektrofizyolojik kayıt

Bu yöntem, Drosophila melanogaster merkezi sinir sisteminin elektrogenezini ölçerek böcek toksikolojisi ve böcek fizyolojisi alanlarındaki temel soruların yanıtlatına yardımcı olabilir. Bu bir bilimsel hipotezler geniş bir test etmek ve eylem yeni böcek modları keşfinde yardımcı sağlar. Bu tekniğin en büyük avantajı, Drosophila sinir sistemini incelemek için en az mali girdi ile basit, tekrarlanabilir ve nispeten yüksek iş sistemi sağlar.

Başlamak için, satın alma/analiz yazılımını açın. Ana araç çubuğunda Kurulum'u tıklatın ve iletişim kutusunu açacak Kanal Ayarları'nı seçin. Toplam kanal sayısını üçe indirin.

Kanal bir 100 milivolt luk bir menzille amplifikatörün ham sinyalini kaydedecek. Kanal iki, belirli bir eşiğin üzerinde olan kanal birdeki olay sayısını saymak için kullanılır. Bunun için, kanal iki için açılır menüyü açmak için Hesaplama sekmesine tıklayın.

İkinci bir iletişim kutusunu açacak Döngüsel Ölçümler'i seçin. Kaynak olarak kanal bir'i seçin. Ardından, açılır menü ölçümünde Etkinliklerde Birim Başak'ı seçin.

Son olarak, algılama ayarları alanında, açılır menüden Basit Eşik'i seçin. Eşik düzeyi, arka plan gürültüsünün üzerine ayarlanacak algılama ayarlama penceresine giriştir. Elektriksel etkinliği hertz'de ifade edilen bir hız çizimine dönüştürmek için üçüncü kanalda Aritmetik'i seçin.

Yeni pencerede, giriş 1000 kez smoothsec, parantez kanal iki virgül iki. Daha sonra, birim açılır menüde frekans birimi hertz seçin. Ana ekrana dönmek için iletişim kutularını kapatın.

Kanal üç y ekseni hertz ve x-ekseni zaman içinde ifade edilmelidir. Larva Drosophila CNS'i ilk olarak kültür şişesinden üçüncü yıldız Drosophila melanogaster'i tanımlayıp ayıklayarak ve 200 mikrolitre saline yerleştirerek inceleyin. Sonra, ince forceps bir çift ile ağız kanca kavramak ve ince cutiküler tabaka yırtılma önlemek için, hafif basınç ile, ikinci bir çift forceps ile kurtçuk karın kapmak.

Yavaşça baş bölgesinden kurtçuk kaudal ucunu ayırmak ve kurtçuk vissera ortaya çıkarmak için farklı yönlerde ağız kanca ve karın çekin. CNS nefes borusu ve sindirim sistemi ile iç içe olacak. CNS'i sindirim sistemi ve nefes borusundan forceps ile dışarı atın.

Kurtçuk drosophila merkezi sinir sisteminin diseksiyon başarı için kritik bir adımdır. Diseksiyonlu gangliyonlar, azalan motor sinirlere önemli bir zarar vermeden bozulmamış olmalıdır. Ganglia bağlı motor sinirlerin daha fazla sayıda temel ateşleme frekansları artacak.

Gerekirse, Vannas bahar makası ile serebral loblar için CNS posterior elle transektör tarafından kan-beyin bariyerini bozun. Transection kullanılan kimyasal ın fizyokimyasal özelliklerine göre yapılmalıdır. Kırmızı çizgi önerilen transeksiyon noktası ve bozulmamış alçalan periferik sinir gövdeleri burada gösterilen transekted CNS.

Başlamak için, ilk beş ila 15 megaohms bir direnç borosilikat cam kılcal damarlar gelen cam pipet elektrot çekin. Transektör lüzumlu CNS'yi 200 mikrolitre salin içeren balmumu odasına yerleştirin. Zemin telle lehimlenmiş bir timsah klibi ile kaplamasız bir böcek pimi kenetle ve devreyi tamamlamak için pimi tuzlu ya da solu takın.

Mikromanipülatörleri kullanarak elektrodu transektifcin kaudal ucuna yönlendirin. Periferik sinir gövdelerini bağlamadan önce satın alma/analiz yazılımındaki eşik düzeyini ayarlayarak arka plan gürültüsünü ortadan kaldırın. Emiş elektrodu içine periferik sinirleri çekmek için şırınga üzerinde hafif negatif basınç uygulayın.

Veri toplama yazılımındaki kaydı ve temel atış hızının temel atış hızı verilerini toplamadan önce beş dakika boyunca dengede olmasını başlatın. Beş dakika sonra, kontrol ateşleme hızlarını kaydetmeye başlamak için odanın toplam hacmini 400 mikrolitreye çıkarmak için 200 mikrolitre tuz ve araç ekleyin. Kontrol tedavisinin ateşleme deseni burada gösterilen örneğe benzemiyorsa, hazırlık ve kayıt tanatın.

Üç ila beş dakikalık kayıttan sonra taban çizgisi oluşturulduğunda, 200 mikrolitre salin çekin ve tuzlu suda çözünen deneysel ajanın 200 mikrolitresini ekleyin. İlaç ve son konsantrasyoniçeren bir yorum ekleyerek satın alma / analiz yazılımı ilaç uygulamanın bu zaman noktası etiketleyin. Burada gösterilen dmso maruz kalmadan önce ve sonra temsili bir sinir akıntısı izi.

Ok uygulama saatini gösterir. DMSO'ya sınırlı bir yanıt görülür. Propoksur artan dozlarda bir konsantrasyonbağımlı bir şekilde transekted Drosophila CNS ani deşarj sıklığını artırdı, nörodepresan GABA konsantrasyona bağlı bir şekilde başak deşarj sıklığını azalttı oysa.

Bu yordamı çalışırken, bunun bir ex vivo deney olduğunu ve bu nedenle pH ve sıcaklık gibi tuzlu hava koşullarının merkezi sinir sistemi hazırlığının uzun süreli aktivitesi için kritik öneme sahip olduğunu hatırlamak önemlidir. Benzer şekilde, yabancı elektriksel aktivite eksikliği, etkili bir Faraday kafes, ve 60-hertz gürültü bir azalma bu töz başarı için önemlidir. Bu araştırma yoluyla toplanan veriler, böcek öldürücülerin belirli eylem modunu belirlemeye yardımcı olabilir.

Voltaj-kelepçe elektrofizyolojisi, biyokimyasal analizler ve ek farmakolojik tahliller gibi diğer yöntemlerle bu verilerin daha sonra doğrulanması yapılabilir.