Name: Longa Orta Serebral Arter Oklüzyon Yönteminin Tam Reperfüzyon için Optimizasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 18 s
Description: Öğrenin, farelerde iskemik inme araştırmaları için Longa orta serebral arter oklüzyon yöntemini tam reperfüzyon sağlayacak şekilde optimize etme tekniklerini. Bu protokol cerrahi doğruluğu artırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Tüm hayvan işleme ve prosedürleri, Zagreb Üniversitesi Tıp Fakültesi Etik Lisans Komitesi ve Hırvatistan Cumhuriyeti Tarım Bakanlığı'nın bilimsel amaçlarla kullanılan hayvanların korunması için Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır. Deneysel prosedürler, Avrupa Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Rehberi (Direktif 2010/63/EU) ile uyumlu olan Hırvatistan Hayvanları Koruma Yasası (NN 102/17, 32/19), Hayvanları Koruma Yasası Değişiklikleri (NN 37/13) ve Bilimsel Amaçlarla Kullanılan Hayvanların Korunmasına İlişkin Kılavuz İlkelerine (NN 55/13) göre gerçekleştirilmiştir.
1. Hayvanın ve cerrahi alanın hazırlanması
<ol><li>Hayvanı bir nakavt kutusuna yerleştirin ve bir oksijen / nitrojen karışımında (1: 2 oranında) %5 hacimde izofluran kullanarak anestezi uygulayın.</li>
	<li>Hayvanın bilinç durumunu ve solunum frekansını görsel olarak inceledikten sonra, onu bir laboratuvar terazisine getirin ve tartın.</li>
	<li>Uygun anestezi derinliğini sağlamak için alt ekstremitenin interdigital derisini sıkıştırarak refleksi kontrol edin.</li>
	<li>Hayvanı ısıtılmış ameliyat masasına yerleştirin ve burnunu anestezi maskesine getirin. İlk ameliyat masası sıcaklığını 36 °C'ye ayarlayın ve hayvanın vücut sıcaklığını 37 °C'de tutacak şekilde ayarlayın (sonraki adımlarda tanıtılan bir rektal prob ile ölçülür). Diğer tüm adımlar boyunca, hayvanın solunum hızını 100 nefes / dk'da tutmak için izofluranın hacim fraksiyonunu ayarlayın. NOT: Hayvanla doğrudan temas eden tüm yüzeyler ve malzemeler işlemden önce iyice dezenfekte edilmelidir.</li>
	<li>Dehidrasyondan ve izofluran gazından korumak için hayvanın gözlerine göz merhemi sürün.</li>
	<li>Hayvanı sırt üstü çevirin ve altına cerrahi banttan yapılmış küçük bir yastık koyarak boynunu uzatın.</li>
	<li>Cerrahi bant kullanarak hayvanın uzuvlarını yerine sabitleyin. Yanlışlıkla omuz eklemi çıkığına neden olmamak için ön ayakları çok fazla uzatmamaya özen gösterin.</li>
	<li>Rektal probu petrol beyazı jöle kullanarak yağlayın ve sürekli vücut ısısı ölçümü için rektuma yerleştirin. Cerrahi bant kullanarak probu kuyrukla birlikte yerine sabitleyin.</li>
	<li>İşlem sırasında hayvanı iyi nemlendirmek ve analjezi altında tutmak için intraperitoneal olarak ameliyat öncesi salin ve buprenorfin enjeksiyonu (0.5 mg / kg) uygulayın.</li>
	<li>Kablosuz bir hayvan kesme makinesi kullanarak hayvanın boyun bölgesindeki kürkünü tıraş edin. Cerrahi bant parçaları kullanarak tüm traşlı kürkleri toplayın. Ek olarak, bölgeyi kürkten tamamen arındırmak için bir usturayla tıraş edin.</li>
	<li>Ölçülen hayvanın ağırlığına ve/veya yaşına göre bir MCAO filamenti seçin. Kabından çıkarın ve görünür bir yerde bir Petri kabına koyun. Filamentin silikon kısmını temiz ve tozsuz tutmak için üzerine bir damla tuzlu su sürün. NOT: Filamentin silikon kaplamasının kalınlığı, 12-16 haftalık bir fare söz konusu olduğunda üreticinin resmi tavsiyelerine göre seçilmelidir. Ek olarak, silikon kaplamanın uzunluğu, tıkanacak sulama alanının boyutuna bağlı olarak önceden dikkatlice planlanmalıdır (bkz. Tartışma).</li>
	<li>Ameliyat masasının üzerine temiz bir cerrahi örtü yerleştirin.</li>
	<li>Hayvanın traşlı derisine bir damla Betadine uygulayın. Dezenfektanı içten dışa dairesel bir şekilde cilde sürmek için pamuklu çubuk kullanın. Daha sonra, etanole batırılmış bir pamuklu çubukla aynı şeyi yapın. Her tekrarlama için yeni bir çift steril pamuklu çubukla bu adımı 3 kez tekrarlayın.</li>
	<li>Lokal yara analjezisi için gelecekteki insizyon bölgesinin dezenfekte edilmiş bölgesine bir miktar lidokain jeli uygulayın.</li>
</ol>2. İskemi indüksiyon cerrahisi
<ol><li>Bir neşter kullanarak dezenfekte edilmiş cilt üzerinde ilk kesi yapın. Cerrahi yaranın iyileşmesini kolaylaştırmak için cilt kesi vuruşlarının sayısını minimumda tutun. NOT: Tüm aletler daha önce sterilize edilmiş olmalıdır. Okuyucu, steril veya cerrahi eldiven kullanımı için kurumsal yönergelerine başvurmalıdır.</li>
	<li>Tip 7 ve 5 forseps kullanarak yüzeysel fasyayı yırtın ve tükürük bezlerini alttaki dokudan ayırın. NOT: Her zaman kapalı forsepslerle ilerleyin ve dokuyu uzaklaştırmak için hareket ederken uzatın. Bu sayede anatomik boşluklar minimal doku travması ile geçilebilmektedir.</li>
	<li>Tükürük bezlerinin sonraki adımlara müdahale etmediğinden emin olurken tel toplayıcıyı başlangıç konumuna yerleştirin.</li>
	<li>Tip 7 forseps kullanarak derin boyun fasyasını çıkarın ve ekartörü yeniden konumlandırmak için sternokleidomastoid kasları karotis bölgesinden ayırın.</li>
	<li>Karotis bölgesine erişim sağlamak için ekartörü sternokleidomastoid kasların altına ulaşacak şekilde yeniden konumlandırın.</li>
	<li>Karotis bölgesine net bir görsel ve daha kolay bir yaklaşım sağlamak için omohyoid kasını rezeke edin.</li>
	<li>Karotis arteri ve dallarını, karotis fasyasında bir arada tutulan karotis ven ve vagus sinirinden kurtarın. NOT: Vagus sinirine zarar vermemek veya önemli bir kanamaya neden olmamak için bu fasyanın dikkatlice çıkarılması gerekir.<ol><li>Karotis fasyasını karotis triadının yan tarafında sıkıştırın ve arteri, siniri, damarı ve çevresindeki tüm kan damarı dallarını görsel olarak tanımlamak için hafifçe yanal olarak çekin.</li>
		<li>Fasyayı yanlamasına çekerken, Tip 5 forseps kullanarak, CCA'yı komşu sinir ve toplardamardan dallanma noktasına ve CCA'nın üzerinden geçen üst tiroid toplardamarına kadar ayırın.</li>
		<li>CCA'nın alt kısmını, kavisli Tip 7 forseps kullanarak alttaki doku ve fasyadan tamamen ayırın ve sonraki adımlarda klemplemeye hazır olduğundan emin olun.</li>
		<li>CCA dallanma noktasının üzerindeki bölgede kraniyal olarak ilerleyerek, iki forseps kullanarak karotis fasyasını yırtın.</li>
		<li>Benzer şekilde, ECA ve iç karotis arteri (ICA) sırasıyla fasya ve çevresindeki dokudan hassas bir şekilde ayırmak için karotis fasyasının gevşek ucunu medial ve lateral olarak çekin.</li>
		<li>ECA ve ICA'yı kavisli Tip 7 forseps kullanarak alttaki dokudan serbest bırakın.</li>
	</ol></li>
	<li>CCA, ilgili iki dalı ile dikkatlice hazırlanırken, ECA'yı kavisli tip 7 forseps kullanarak kaldırın ve N0 tipi kendiliğinden kapanan forseps ile sıkıştırın.</li>
	<li>N0 tipi kendiliğinden kapanan forsepsleri ameliyat masasına dikkatlice indirin. NOT: ECA'nın sıkıştırma noktasını yeniden konumlandırmak için bazen tutamağı hafifçe serbest bırakmak ve ECA dallanma noktasını kaudal olarak itmek gerekir. Bu noktada, ECA kenetlemesi ile dallanma noktası arasında 1 mm'den fazla ECA kalmasını sağlamak önemlidir.</li>
	<li>ECA, N0 tipi cımbızla kenetlenip güvenli bir şekilde tutulduğunda, ECA'nın arkasına iki örgülü ipek iplik yerleştirin. NOT: Kraniyal iplik, ligasyon düğümünü oluşturacaktır ve sıkıştırma bölgesinden kraniyal olarak yerleştirilmelidir.</li>
	<li>Kalıcı olduğu için kraniyal ipliği tamamen bağlayın ve fazla ipliği makas kullanarak kesin.</li>
	<li>Kuyruk ipliğini gevşek bir sabitleme düğümüne bağlayın. NOT: MCAO filamentinin geçmesi için ECA dallanma noktasına yakın konulmalı ve gevşek tutulmalıdır.</li>
	<li>Vasküler mikroklipler kullanarak, arteriyotomiden sonra kanamayı önlemek için CCA ve ICA'yı kapatın. NOT: CCA'ya uygulanan mikroklipsin yeterince güçlü bir tutuşa sahip olduğundan emin olmak çok önemlidir, çünkü CCA titreşimli yüksek verimli bir arterdir ve bunun yapılmaması, sonraki adımlarda hayvanın bol miktarda kanamasına ve ölümüne neden olabilir.</li>
	<li>Mikro yaylı makas kullanarak, ECA sıkıştırma bölgesinin hemen altında küçük bir arteriyotomi yapın. NOT: Arteriyotominin, filamentin silikon kısmının içeri girmesi için yeterince büyük olması, ancak N0 tipi forsepslerin tuttuğu gerilimi tehlikeye atmamak için ECA çevresinin yarısından daha büyük olmaması gerekir.</li>
	<li>ECA'nınkiyle eşleşen bir açıyla, filamenti CCA'ya proksimal yönde arteriyotomi bölgesine yerleştirin, ECA'nın dallanma bölgesindeki gevşek sabitleme düğümünden geçin ve filament ile CCA'nın lümenine yapışın.</li>
	<li>Filamentin silikon kısmının etrafındaki sabitleme düğümünü sıkın. NOT: Filament son manevranın yarısında ECA'dan kayma eğiliminde olduğundan ve bu noktada tekrar yerine koymak çok zor olduğundan, bu noktada çok dikkatli olunması gerekir.</li>
	<li>ICA mikro klipsini dikkatlice açın ve çıkarın.</li>
	<li>Filament kısmen ECA'ya yerleştirilmiş ve sabitlenmiş durumdayken, tam bir arteriyotomi yapın, böylece ECA kütüğünü içindeki MCAO filamenti ile gevşetin. Bu noktada, N0 tipi kendiliğinden kapanan forsepsleri serbest bırakın ve çıkarın.</li>
	<li>Bir set tip 5 cımbız ile ECA kütüğünü sıkıca sıkıştırın ve hafifçe kaldırın. Kısmen yerleştirilmiş filamenti başka bir forseps ile tutarken, filamentin iç ucunu ICA'ya doğru yönlendirmek için ECA kütüğünü indirin ve hafifçe çekin. Filamentin silikon kısmını asla sıkıştırmayın.</li>
	<li>Forseps filamenti tutarak, filamenti ICA'dan İrade çemberine doğru yavaşça ilerletin. NOT: ICA'nın ilk dallanma noktası, aynı zamanda operatörün istenen MCA dallanma noktasını kaçırabileceği tek noktadır. Bu nedenle, filamenti MCA dallanma noktasına yönlendirmek için hafif bir yanal ilerleme açısı gereklidir. Hafif yanal ilerleme açısıyla, filament pterygopalatin arterden (PPA) uzağa doğru kıvrılır ve ilerleyen ucun Willis çemberine girme olasılığını artırır (Şekil 1).</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66720/66720fig01.jpg"> Şekil 1: Orta serebral arter oklüzyonu filamentinin pterygopalatin arter dallanma noktasını geçerek ilerlemesinin bir çizimi. Uygun filament ilerlemesi (solda), MCAO filamentinin ICA'nın yan duvarına dayanacak ve PPA dallanma noktasından uzağa doğru kıvrılacak şekilde yönlendirilmesiyle elde edilir. Bunun yapılmaması (sağda), filamentin PPA'ya girmesine ve darbeye neden olmamasına neden olabilir. İkinci durumda, filament gerektiği kadar ilerleyemeyecektir ve cerrah, ucu ICA dallanma noktasında görünür hale gelene kadar filamenti geri çekmeli ve filamenti tekrar ilerletmeye başlamalıdır. Yeşil renkli arterler, farelerde çoğunlukla patentsiz olan posterior komünikan arterleri (PcomA) temsil eder. BioRender.com ile oluşturuldu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66720/66720fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<ol start="21"><li>Dirençte ani bir artış hissedilene kadar MCAO filamentini Willis çemberi boyunca yavaşça ilerletin. NOT: Bu noktada, filamentin kalan uzunluğunu gözlemlemek önemlidir. Filament, yetişkin bir farede ICA dallanma noktasından en az 7 mm uzakta zahmetsizce ilerlemelidir.</li>
	<li>İskemi sırasında filamentin yer değiştirmediğinden emin olmak için sabitleme düğümünü sıkın.</li>
	<li>CCA klibini çıkarın ve saati not edin. NOT: Bu, iskemi başlangıcının başlangıcını işaret eder.</li>
	<li>MCAO filamentinin gevşek ucunu, karotis üçgeni ile ipsilateral sternokleidomastoid kas arasındaki oluğa paketleyin, böylece cerrahi yaradan dışarı çıkmaz.</li>
	<li>Tel ekartörü çıkarın ve cerrahi yaranın kenarlarını birbirine yaklaştırın. Dokunun anatomik konumuna dönmesi için ameliyat bölgesinin birkaç saniye oturmasına izin verin.</li>
	<li>İskemi döneminden sonra yaranın daha hızlı yeniden açılmasını kolaylaştırmak için cerrahi yarayı bant yara kapakları kullanarak kapatın. NOT: Bir araştırmacı iskemi döneminde hayvanın uyanmasına izin vermek isterse, yaranın zamansız bir şekilde yeniden açılmasını önlemek için yaranın dikilmesi önerilir.</li>
</ol>3. İskemi dönemi
<ol><li>MRI veya başka bir kantitatif perfüzyon ölçüm yöntemi kullanarak ameliyatın başarısını doğrulayın. NOT: MRG taraması yapılması durumunda, perfüzyon ağırlıklı görüntüleme (PWI) geniş MCA bölgesinde kritik iskemi göstermeli ve difüzyon ağırlıklı görüntüleme (DWI) hücre ödemine bağlı azalmış görünür difüzyon katsayısı (ADC) bölgesini özetlemelidir.</li>
	<li>İskemi dönemi sona erene kadar hayvanı temiz bir kafese koyun.</li>
</ol>4. Filament çekme ameliyatı
<ol><li>Ayrılan iskemi süresi sona ermeden yaklaşık 5 dakika önce, hayvanı yerleştirin ve tekrar ameliyat masasına sabitleyin.</li>
	<li>Bant yara kapaklarını çıkarın ve cerrahi yarayı tel ekartör ile tekrar açın.</li>
	<li>MCAO filamentinin gevşek ucunu çevreleyen dokudan ve sabitleyici düğüm ipliğinin uçlarından kurtarın.</li>
	<li>N0 tipi forsepslerle, üzerine gerginlik koymak için ECA kütüğünün kenarını ventral olarak sıkıştırın ve çekin. İlk cerrahi prosedüre benzer şekilde kıstırma forsepslerini dikkatlice aşağı indirin. NOT: Operatör, düğümün çözülememesine neden olacağından, sabitleme düğümünü sıkıştırmaktan kaçınmalıdır.</li>
	<li>CCA'yı bir mikrovasküler klipsle tekrar sıkıştırın.</li>
	<li>Tip 5 forseps kullanarak, filamentin çekilmesini sağlamak için sabitleme düğümünü gevşetin. NOT: Düğümü gevşetmeye başlamanın en iyi yolu, tek tek parçalara ayrılana kadar sıkıştırmaya devam etmek ve ardından iplik uçlarını düğüme doğru itmektir.</li>
	<li>Silikon parça ECA kütüğünden dışarı çıkmaya başlayana kadar MCAO filamentini yavaşça geri çekin. Filamentin tamamen çekilmesine hazırlanmak için sabitleme düğümünü hafifçe sıkın.</li>
	<li>Filamentin silikon ucuna yaklaştığında, sabitleme düğümünü MCAO filamentini dışarı itecek ve ECA kütüğünü tek bir manevrayla kapatacak şekilde sıkın. Filament dışarı çıktıktan sonra düğümü tamamen sıkın.</li>
	<li>Sıkıştırma forsepslerini CCA klipsi ile birlikte açın ve çıkarın. NOT: Bu, iskemi döneminin sonunu ve reperfüzyon sürecinin başlangıcını işaret eder.</li>
	<li>Tel ekartörü çıkarın ve cerrahi yaranın kenarlarını tekrar bir araya getirin.</li>
	<li>Ameliyat yarasını periferden başlayarak aşağıya doğru dikin, altta yatan herhangi bir doku görünmeden yarayı tamamen kapatın. NOT: Gerekli dikiş sayısı cerrahi yaranın boyutuna bağlıdır.</li>
	<li>Ameliyat bölgesini alkollü mendiller kullanarak temizleyin ve dezenfekte edin.</li>
</ol>5. Ameliyat sonrası bakım
<ol><li>Hayvanı temiz bir kafese koyun ve anesteziden kendiliğinden uyanmasına izin verin.</li>
	<li>Daha kolay ulaşılması için peletlenmiş yiyecekleri kafesin altına yerleştirin. İçme suyu kullanarak gıda peletlerini yumuşatın. Küçük bir Petri kabını içme suyuyla doldurun ve onu da kafesin tabanına getirin.</li>
	<li>Sonraki 48 saat içinde, intraperitoneal olarak her 24 saatte bir buprenorfin (0.5 mg / kg) ile 0.25 mL salin enjekte edin.</li>
</ol>

<ol><li>Feigin, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((regional%2C+and+national+burden+of+stroke+and+its+risk+factors%2C+1990-2019%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2019%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet.+Neurology%22%5BJournal%5D)">regional, and national burden of stroke and its risk factors, 1990-2019: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2019.</a> The Lancet. Neurology. 20 (10), 1-26 (2021).</li>
<li>Bai, J., Lyden, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revisiting+cerebral+postischemic+reperfusion+injury%3A+New+insights+in+understanding+reperfusion+failure%2C+hemorrhage%2C+and+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Stroke%22%5BJournal%5D)">Revisiting cerebral postischemic reperfusion injury: New insights in understanding reperfusion failure, hemorrhage, and edema.</a> Int J Stroke. 10 (2), 143-152 (2015).</li>
<li>Sommer, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+stroke%3A+experimental+models+and+reality%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Ischemic stroke: experimental models and reality.</a> Acta Neuropathol. 133 (2), 245-261 (2017).</li>
<li>Hill, J. W., Nemoto, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+middle+cerebral+artery+occlusion+with+complete+reperfusion+in+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">Transient middle cerebral artery occlusion with complete reperfusion in spontaneously hypertensive rats.</a> MethodsX. 1, 283-291 (2014).</li>
<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Nosotchu%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema.</a> Nosotchu. 8 (1), 1-8 (1986).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li>
<li>Justić, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redefining+the+Koizumi+model+of+mouse+cerebral+ischemia%3A+A+comparative+longitudinal+study+of+cerebral+and+retinal+ischemia+in+the+Koizumi+and+Longa+middle+cerebral+artery+occlusion+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+and+Metab%22%5BJournal%5D)">Redefining the Koizumi model of mouse cerebral ischemia: A comparative longitudinal study of cerebral and retinal ischemia in the Koizumi and Longa middle cerebral artery occlusion models.</a> J Cereb Blood Flow and Metab. 42 (11), 2080-2094 (2022).</li>
<li>El Amki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothalamic%2C+thalamic+and+hippocampal+lesions+in+the+mouse+MCAO+model%3A+Potential+involvement+of+deep+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22J+of+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Hypothalamic, thalamic and hippocampal lesions in the mouse MCAO model: Potential involvement of deep cerebral arteries.</a> J of Neurosci Methods. 254, 80-85 (2015).</li>
<li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+Stroke+in+Mice+-+Middle+Cerebral+Artery+Occlusion+with+the+Filament+Model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model.</a> J Vis Exp. (47), e2423(2011).</li>
<li>Trotman-Lucas, M., Kelly, M. E., Janus, J., Gibson, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Middle+cerebral+artery+occlusion+allowing+reperfusion+via+common+carotid+artery+repair+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Middle cerebral artery occlusion allowing reperfusion via common carotid artery repair in mice.</a> J Vis Exp. (143), e58191(2019).</li>
<li>Morris, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+study+of+variables+influencing+ischemic+injury+in+the+longa+and+koizumi+methods+of+intraluminal+filament+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A comparative study of variables influencing ischemic injury in the longa and koizumi methods of intraluminal filament middle cerebral artery occlusion in mice.</a> PLoS One. 11 (2), e0148503(2016).</li>
<li>Shimamura, N., Matchett, G., Tsubokawa, T., Ohkuma, H., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+silicon-coated+nylon+suture+to+plain+nylon+suture+in+the+rat+middle+cerebral+artery+occlusion+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of silicon-coated nylon suture to plain nylon suture in the rat middle cerebral artery occlusion model.</a> J Neurosci Methods. 156 (1-2), 161-165 (2006).</li>
<li>Guan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+suture+properties+on+stability+of+middle+cerebral+artery+occlusion+evaluated+by+synchrotron+radiation+angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Effect of suture properties on stability of middle cerebral artery occlusion evaluated by synchrotron radiation angiography.</a> Stroke. 43 (3), 888-891 (2012).</li>
<li>Yuan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+suture+middle+cerebral+artery+occlusion+model+in+C57BL%2F6+mice+circumvents+posterior+communicating+artery+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Optimizing suture middle cerebral artery occlusion model in C57BL/6 mice circumvents posterior communicating artery dysplasia.</a> J Neurotrauma. 29 (7), 1499-1505 (2012).</li>
<li>Kitagawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+ischemia+after+bilateral+carotid+artery+occlusion+and+intraluminal+suture+occlusion+in+mice%3A+Evaluation+of+the+patency+of+the+posterior+communicating+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+and+Metab%22%5BJournal%5D)">Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: Evaluation of the patency of the posterior communicating artery.</a> J Cereb Blood Flow and Metab. 18 (5), 570-579 (1998).</li>
<li>McColl, B. W., Carswell, H. V., McCulloch, J., Horsburgh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extension+of+cerebral+hypoperfusion+and+ischaemic+pathology+beyond+MCA+territory+after+intraluminal+filament+occlusion+in+C57Bl%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Extension of cerebral hypoperfusion and ischaemic pathology beyond MCA territory after intraluminal filament occlusion in C57Bl/6J mice.</a> Brain Res. 997 (1), 15-23 (2004).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinctions+between+the+Koizumi+and+Zea+Longa+methods+for+middle+cerebral+artery+occlusion+%28MCAO%29+model%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+rodent+data%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Distinctions between the Koizumi and Zea Longa methods for middle cerebral artery occlusion (MCAO) model: a systematic review and meta-analysis of rodent data.</a> Sci Rep. 13 (1), 10247(2023).</li>
<li>Trueman, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+re-examination+of+the+intraluminal+filament+mcao+model%3A+impact+of+external+carotid+artery+transection%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">A critical re-examination of the intraluminal filament mcao model: impact of external carotid artery transection.</a> Transl Stroke Res. 2 (4), 651-661 (2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Betadin kutanöz çözelti 10g/100ml</td><td>Alkaloid Üsküp</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Örgülü ipek sütür</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18020-60</td><td></td></tr><tr><td>Dafilon sütür 5/0 DS16</td><td>B. Braun</td><td>C0936154</td><td></td></tr><tr><td>Dolokain 20 mg/g jel</td><td>Jadran-Galenski Laboratorij</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11251-20</td><td>2 adet</td></tr><tr><td>Dumont #7 forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11271-30</td><td></td></tr><tr><td>Dumont N0 kendiliğinden kapanan forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11480-11</td><td></td></tr><tr><td>Durapore Cerrahi Bant 1,25cm x 9,1m</td><td>3M</td><td>7100057169</td><td></td></tr><tr><td>Durapore Cerrahi Bant 2,5cm x 9,1m</td><td>3M</td><td>7100057168</td><td></td></tr><tr><td>Harici termostat</td><td>Petnap</td><td>1012536</td><td></td></tr><tr><td>Halsey iğne tutucular</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>Sıcak boncuk sterilizatörü</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18000-50</td><td></td></tr><tr><td>İris makası</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14060-10</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran USP</td><td>Piramal yoğun bakım</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Lazer Doppler Monitör</td><td>Moor</td><td>MOORVMS-LDF2</td><td></td></tr><tr><td>Metal Pet Isı Yastığı</td><td>Petnap</td><td></td><td></td>1012525</tr><tr><td>Mikro Vannas yaylı makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>Mini-colibri ekartör</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>17000-01</td><td></td></tr><tr><td>Recugel göz merhemi</td><td>Bausch & Lomb</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>S & T B-1 gemi mikro kelepçesi&nbsp;</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td>00396-01</td><td>2 adet</td></tr><tr><td>S& Forseps uygulayan T mikro kelepçe</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>00071-14</td><td></td></tr><tr><td>Schwartz mikro serrafinler</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18052-01</td><td></td></tr><tr><td>Stemi DV4 Spot stereo mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>000000-1018-453</td><td></td></tr><tr><td>Steri-Strip Takviyeli Yapıştırıcı Cilt Kapakları 3 mm x 75 mm</td><td>3M</td><td>7100236545</td><td></td></tr><tr><td>Düz doku forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11023-10</td><td></td></tr><tr><td>SZX Stand Kolu</td><td>Olympus</td><td>SZ2-STS</td><td></td></tr><tr><td>Tec III 300 serisi kalibre edilmiş buharlaştırıcı</td><td>Buharlaştırıcı Satış ve Servis a.ş.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Üniversal Stand Tip 2</td><td>Olympus</td><td>SZ2-STU2</td><td></td></tr><tr><td>VetFlo Altı Kanallı Anestezi Standı</td><td>Kent Scientific</td><td>VetFlo-1225</td><td>O2/N2 karıştırma için modifiye</td></tr></tbody></table> edilmiştir

longa orta serebral arter oklüzyon yönteminin tam reperfüzyon için optimizasyonu

Optimization of the Longa Middle Cerebral Artery Occlusion Method for Complete Reperfusion

İntraoperatif veya postoperatif MRI taramaları, özellikle perfüzyon ağırlıklı görüntüleme (PWI) ve/veya difüzyon ağırlıklı görüntüleme (DWI) taramaları (Şekil 2) başarılı bir prosedürün kesin kanıtını sunabilir. İntraoperatif PWI, ipsilateral MCA bölgesinde kritik iskemiyi gösterir ve böylece filament yerleşiminin tam oklüzyon ile sonuçlandığını doğrular. Başarılı bir prosedürün postoperatif PWI'si, lezyon çekirdeğinde hiperperfüzyonun yanı sıra MCA bölgesi sınırlarında bir dereceye kadar reperfüzyon gösterir. İntraoperatif DAG lezyonları, intraoperatif PWI'de gözlenen iskemik bölgelere karşılık gelir. Postoperatif DAG lezyonları, lezyonun görünür difüzyon katsayısında önemli bir azalma ile birlikte iskemik lezyonun çekirdeğine doğru küçülme gösterir ve bu da onu intraoperatif DAG lezyonlarından ve çevresindeki reperfüze beyin dokusundan daha koyu hale getirir. Hem intraoperatif hem de postoperatif standart T2 anatomik taramaları, filament kaynaklı kanama meydana gelmedikçe tipik olarak kayda değer bir şey göstermez
(Şekil 3). Bu gibi durumlarda, PWI ve DWI taramaları eksik iskemi ortaya çıkarır veya hiç iskemi göstermez.
Reperfüzyon işlemi sonraki 48 saat içinde takip eder ve işlemden sonraki ikinci gün yapılan MRI taramalarında gerçekleştiği doğrulanır (Şekil 2, 2. günde CBF). PWI taramaları, lezyon çekirdeğinde hafif hiperperfüzyon ile lezyon bölgesinde tam reperfüzyon gösterir. DWI taramaları, beyin ödemi oluşumuna bağlı olarak düşük görünür difüzyon katsayılarının çoklu bölgelerini gösterir. T2 anatomik taramalar, hipokampus gibi MCA olmayan bölgelerin tutulumu olmaksızın, MCA bölgelerini saran ödemin hiperintens bölgelerini gösterir.
Uyandıktan sonra, hayvan akut inmenin açık belirtilerini gösterir. Yaygın davranışsal semptomlar arasında, lezyonun yan tarafında artan kas tonusu bulunur ve bu da hayvanın gövdesini bu yöne doğru esnetmesine neden olur. İpsilateral yönde daire çizmek ve dönmek de akut inmenin açık belirtileridir. Yürüyüş ataksisi sıklıkla hipokampusun iskemik lezyon hacmine katılımını önerir. Bununla birlikte, bu semptom, izofluran anestezi yan etkileri nedeniyle hiperakut fazda özgüllükten yoksun olabilir. İlerleyen günlerde, hayvan ipsilateral olarak ön bacak fleksiyonu geliştirmeli ve bıyık refleksi yokluğu ile birlikte postüral durumunun kötüleşmesi gerekir. Beyin ödemi nedeniyle ölüm oranı işlemden yaklaşık 3 gün sonra zirve yapar. Beyin ödemi çözülmeye başladıktan sonra kronik faz başlar. Bu süre zarfında, hayvan idrar tutma ile ortaya çıkabilir. Bu nedenle, hayvanı mesane sertliği açısından kontrol etmenin yanı sıra üretral çıkışta sağlam bir kapak olması önemlidir. Çoğu zaman, bu sorun idrara çıkmayı kolaylaştırmak için mesaneye hafifçe masaj yaparak çözülebilir. Kilo kurtarma belirtileri genellikle inme başlangıcından sonraki ilk 7 gün içinde ortaya çıkar.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66720/66720fig02.jpg"> Şekil 2: MRI taramaları ile doğrulanmış tam reperfüzyonlu başarılı bir MCAO'nun temsili örneği. CBF, ADC ve T2w, sırasıyla serebral kan akış haritaları, görünür difüzyon katsayısı haritaları ve T2 ağırlıklı anatomik taramalar anlamına gelir. İntraOP, postop ve D02, iskemi başlangıcından sonra, reperfüzyon başlangıcından sonra ve MCAO'dan sonraki ikinci günde sırasıyla 3 farklı görüntüleme zaman noktasını ifade eder. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66720/66720fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66720/66720fig03.jpg"> Şekil 3: MCAO prosedürü sırasında filament kaynaklı bir kanamanın temsili MRI taramaları. CBF, ADC ve T2w, sırasıyla serebral kan akış haritaları, görünür difüzyon katsayısı haritaları ve T2 ağırlıklı anatomik taramalar anlamına gelir. İntraOP, postOP ve D02, sırasıyla iskemi başlangıcından sonra, reperfüzyon başlangıcından sonra ve MCAO'dan sonraki ikinci gün olmak üzere 3 farklı görüntüleme zaman noktasını ifade eder. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66720/66720fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66720/66720fig04.jpg"> Şekil 4: Orta serebral arter dalında uygun filament yerleşiminin bir gösterimi. Çoğu durumda, filamentin silikon kısmı (beyaz renkli), anterior serebral arterin (ACA) proksimal kısmına, MCA dallanma noktasından yaklaşık 2 mm daha fazla yerleşir. Normalde ACA beyin bölgesi farelerde etkilenmez, çünkü ACA kontralateral olanla tekil bir azygos ACA'ya katılır. Etkilenen arterler gri renkle gösterilir. Solda, iskemi döneminde CCA patentli olarak bırakılmıştır, böylece filamentin silikon kısmı ile tıkanan MCA'ya kadar tüm İKA dallarına kan sağlar. Sağda, iskemi döneminde CCA ligasyonunun tutulması dışında filament aynı şekilde konumlandırılmıştır. PcomA'nın (yeşil renkli) çoğu durumda patent olmaması nedeniyle, CCA ligasyonu tutulursa, inme seçici olmayan bir şekilde MCA, AchA, VTA, HTA ve PCA yoluyla ipsilateral hemisferin çoğunu sarar. Bu durumlarda, tıkalı PPA nedeniyle gözün akut enfarktüsü belirtileri (lökokori ve anizokori) de gözlenebilir. BioRender.com ile oluşturuldu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66720/66720fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Longa Orta Serebral Arter Oklüzyon Yönteminin Tam Reperfüzyon için Optimizasyonu

The middle cerebral artery occlusion model serves as the primary animal model for studying ischemic stroke. Despite being used in research for over three ...

optimization-longa-middle-cerebral-artery-occlusion-method-for

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Intraluminal orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli deneysel iskemik inme modelleri arasında en sık kullanılan model. Burada Lazer Doppler flowmetre kılavuzu ile ayrıntılı olarak tüm model ve onun temsilcisi sonuçları gösterecektir.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Kanıt yoktur birikmektedir, bu iskemik ön (PC) - beyne olmayan bir zarar iskemik meydan okuma - bir sonraki zarar iskemik hasara geçici bir koruma bahşeder. Biz C57Bl6 / J farelerde geçici fokal serebral iskemi (orta serebral arter tıkanıklığı, MCAO neden olduğu) için erken iskemik tolerans (IT) ikna etmek için bir ön hazırlık uyarıcı olarak ikili karotis arter tıkanıklığı (BCCAO) kurdu.

Odak Serebral İskemi Erken İskemik Tolerans tetikleyebilecek bir Yeterli Önkoşullama Uyarıcı olarak bilateral Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı

Biz bir kemirgen büyük bir beyin damar daimi tıkanıklığı için son derece tekrarlanabilir yöntem açıklanmaktadır. Bu teknik çok az çevresel zarar, en az kan kaybı, uzun süreli sağkalım oranının yüksek ve insan klinik nüfusu ile orantılı tutarlı infarkt hacmi ile gerçekleştirilebilir.

Kalıcı Serebral Gemi Tıkanıklığı<em&gt; Ile</em&gt; Çift Ligature ve transeksiyonu

Bu protokol, farelerde geçici orta serebral arter tıkanıklığını takiben enfarktüs hacimlerini ve kan-beyin bariyeri bozulmasını azaltan tekrarlayan hipoksik ön koşullandırmayı veya sistemik hipoksiye kısa süreli maruziyetleri tanımlar. Ayrıca, nörovasküler korumanın etkinliğini değerlendirmek için inme sonrası enfarktüs hacminin ve kan-beyin bariyeri bozulmasının ikili miktar tayinini detaylandırır.

Farelerde Tekrarlanan Hipoksik Önkoşullanma ve Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ardından Nörovasküler Koruma Kantitasyonu

inme patofizyolojisini anlamak için, güvenilir modeller kullanmak önemlidir. Farelerde en sık kullanılan inme modellerinden birini anlatacağız Bu yazıda, orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli olarak adlandırılan reperfüzyon ile (ayrıca lümen içi filament veya sütür modeli olarak adlandırılır).

Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım

Silikon kaplı bir sütür kullanılarak orta serebral arterin tıkanmasıyla inen bir fare inme modelini tarif ediyoruz. Protokol, kalıcı oklüzyon veya geçici bir iskemiyi indüklemek için uygulanabilir ve ardından reperfüzyon uygulanabilir.

Enfarktüs Bölgesi Orta Arter Tıkanıklığı Tekniği ve Görselleştirme kullanma Fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon

Neonatal inme, çalışmayı mümkün kılmak için tutarlı fokal yaralanma paternlerine ve yüksek tekrarlanabilirliğe sahip translasyonel bir model gerektiren erken beyin hasarının önemli bir nedenidir. Bu çalışmada, tam terim eşdeğeri kemirgenlerde hemorajik olmayan, tek taraflı fokal iskemi-reperfüzyon hasarı oluşturmak için ayrıntılı cerrahi prosedür anlatılmaktadır.

P10 Sıçanlarda Yenidoğan İnme Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Intraluminal filaman tıkanıklığı orta serebral arter deneysel kontur rodents en sık kullanılan vivo içinde modeldir. Ortak karotid arter onarım izin vermek için başka bir cerrahi yaklaşım burada, reperfüzyon ortak karotid arter ve orta serebral arter bölge tam bir reperfüzyon veren gerçekleştirilir.

Orta serebral arter tıkanıklığı ortak karotid arter onarım ile reperfüzyon farelerde izin

Serebral iskemi-reperfüzyon bir fare modeli kontur Patofizyoloji araştırmak için kuruldu. Klemple sağ orta serebral arter ve şu ortak Karotid arter ligate ve kan akımı iskemi 10-40 dakika sonra geri yükleme.

Serebral iskemi-reperfüzyon iki damar tıkanıklığı fare modeli

Bu protokol, orta serebral arterin intraluminal oklüzyonu yoluyla farelerde geçici fokal serebral iskemi modelini açıklar. Ek olarak, manyetik rezonans görüntüleme ve davranış testleri kullanılarak sonuç değerlendirme örnekleri gösterilmiştir.

İnmenin Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Bu protokol, ortak karotis arter yoluyla orta serebral arter oklüzyonu reperfüzyonu için hazırlık sürecini tanımlar.

Orta Serebral Arter Oklüzyonu Reperfüzyonu için Modifiye Bir Model Hazırlığı

Öğrenin, farelerde iskemik inme araştırmaları için Longa orta serebral arter oklüzyon yöntemini tam reperfüzyon sağlayacak şekilde optimize etme tekniklerini. Bu protokol cerrahi doğruluğu artırır.

Longa Orta Serebral Arter Oklüzyon Yönteminin Tam Reperfüzyon için Optimizasyonu

Daha fazla video keşfet