標準添加法

この実験では、標準の追加法は分析ツールとして示されています。メソッドは、典型的な較正曲線の生成しない種の定量分析のためのプロシージャです。標準添加分析を実現するには、前に、試料の知られている標準液の正確な因数の付加の後の発光スペクトル強度を測定します。

この実験の反応による非蛍光性種の研究それら蛍光錯体を形成するように。この方法は、金属イオンの調査に使用されます。アルミニウム イオン (Al^{3 +}) は、8-ヒドロキシキノリン (8HQ) と複合体を形成することによって決定されます。Al^{3 +}は水溶液からの 8HQ によって引き起こされる、クロロホルムに抽出し、クロロホルム溶液の蛍光測定は、オリジナル Al^{3 +}溶液の濃度に関連します。百万ごとの部分 (ppmまたはG/ml) 範囲で感度は、この実験の予定です。

反応が

この実験中に各サンプルのアルミニウムの使用量として計算されます。

1. 試薬の準備

1. 100 ppm 標準 Al^{3 +}ソリューション: DI 水を 1 L メスフラスコにディゾルブ 0.9151 g アルミニウム硝酸塩 (Al (₃)₃•9H₂O)。
2. 8HQ ソリューション 1 M 酢酸 (2 %wt/巻): 8-ヒドロキシキノリンの 2.0 g を 100 mL のメスフラスコに追加。
3. 慎重に 100 mL フラスコに 5.74 mL の氷酢酸を追加し、DI 水が付いている印に希釈します。これは液相に溶解する 8-オキシキノリンをことができます。
4. 1 M NH₄⁺/NH₃バッファー (pH ~ 8): 酢酸アンモニウム (NH₄OAc) 20 g を 100 mL のボトルに追加。
5. この 100 mL ボトルに 30% アンモニア水 7 mL を追加し、DI 水のマークを希薄化します。これにより、8HQ ソリューションを組み合わせるときの酸を中和します。
6. その他の試薬は無水硫酸ナトリウムを含む (Na₂SO₄) とクロロホルム (スペック グレード)。

2. サンプルの準備

1. Al^{3 +}ソリューション ピペットで 100 ppm 株式の 1.0 mL を 100 mL のメスフラスコに追加することによって 1.00 ppm 標準 Al^{3 +}ソリューションを準備します。
2. ボンネットにある大型のリング スタンド上にあるリングに 6 125 mL, 目標到達プロセスを配置します。彼らは次のようにラベル付けされる必要があります: BL、0、1、2、3、4 です。 ガラス製品すべてが綿密にきれい、クロロホルムの小さなビーズは、ガラスの壁に固執する場合、量的な結果を得ることが困難であることを確認します。
3. 5, 目標到達プロセス 0、1、2、3 をラベルに不明な Al^{3 +}ソリューションの 25.00 mL を追加 & 4。この例では、未知の濃度は 0.110 ppm です。
4. 1 mL ピペットで 5 目標到達プロセスにそれぞれ、4.00 1.00 ppm 標準 Al^{3 +}溶液、mL、3.00 2.00 1.00 0 を追加します。
5. 黒ラベル, 漏斗に 25.00 mL の蒸留水を追加することによって、空白を準備します。
6. それぞれの六つのソリューションに 1.0 mL のピペットで 8-ヒドロキシキノリン溶液を追加します。
7. それぞれの六つのソリューションにピペットで緩衝液 3.0 mL を追加します。
8. 2 回各時間 1 分は積極的に揺れクロロホルム 10 mL で各ソリューションを抽出します。圧力集結を解放する, 漏斗を時折口に注意してください。(注: 良い抽出のみ行われるフェーズ間の液-液接触の多くがある場合)。
9. 清潔で乾燥した 100 mL のラベルの付いたビーカーにクロロホルムを収集します。クロロホルムので、それは下層の密度を 1.5 g/cm³、閉じる。完全な抽出した水相でに黄色左のトレースをする必要がありますはありません。
10. それぞれ 25 mL メスフラスコに各ビーカーから結合されたクロロホルム抽出を転送し、クロロホルムが付いている印に希釈します。必ず、クロロホルムが蒸発するを防ぐために各のメスフラスコにストッパーを配置してください。
11. 無水硫酸ナトリウムの ~ 1 g を追加 (Na₂SO₄) ステップ 2.9 から 6 100 mL ビーカーのそれぞれに。硫酸ナトリウム クロロホルム抽出物に存在する水の痕跡を削除することができます。
12. ソリューションを彼らの敬われたビーカーに転送します。サンプルの水の脱水を促進する慎重に旋回。
13. 石英蛍光セルにクロロホルム抽出をデカント (注: クロロホルムをプラスチックのポリスチレン セルを解散する)。

3. 励起波長を選択します。

スキャンを実行することによって励起し、発光波長を決定し、単に読み、これらの値のすべてのサンプルの蛍光強度を記録します。励起と発光帯域幅が 5 であらかじめ設定されて nm。励起波長は約 385 をする必要がありますので、近い紫外線の複合体が吸収する nm。当初、500 で蛍光をモニター発光支店で nm。

1. 蛍光、両方の内部および外部冷却ファン、蛍光ではキセノン ランプの電源投入前にオンにことを確認します。キセノン ランプは非常に熱く、継続的な冷却が必要です。
2. 400 V に PMT 検出器に高電圧 (HV) オンにします。
3. シャッターの両方を開きます。
4. コンピューター上のデータ集録プログラムを開き、ここでは"100nmFluorScan"。
5. 「サンプル + 追加 2 mL」を置く最高の励起・発光波長を決定するために使用する石英セルに (2) ソリューション。
6. 500 で設定当初発光波長 nm、2 nm/秒のスキャン速度と 335 435 nm から励起スキャンを実行します。
7. 結果として得られる蛍光プロット (EXλ_最大)、最大蛍光励起波長を決定し、その値に計測器を設定します。

4. 発光波長を選択します。

1. 450 に蛍光発光波長を設定 nm。
2. 発光波長範囲 450-550 nm から 100 nm スキャンを実行するを設定します。
3. スキャンを開始するには、蛍光のフロント パネルの「スタート」ボタンを押すと同時にプログラムに「試験開始」ボタンをクリックします。
4. 結果として得られる蛍光プロット(EMλ_最大)、最大蛍光波長を決定し、その値 (図 2) に楽器を設定します。

図 2。最適な EXλ の_maxと EM を決定するλ_max 波長。

5. サンプルの蛍光性の測定

1. すべてのサンプルは、EMλ_maxと EXλ_maxで実行されます。これらの条件における蛍光値だけで、各サンプルのスキャンは不要です。最も希薄サンプル (空白) にはじまって、石英セルで、楽器を配置します。蛍光強度を実験室のノートに記録します。
2. 他のすべてのサンプルに対して繰り返します。
3. 覚えて空の相対強度が相対的強度校正チャートを作成する前に各ソリューションから減算しなければなりません。

6. 標準添加プロットを作成します。

1. Al^{3 +}追加の μ g 対蛍光強度をプロットします。
2. 結果プロットの二乗値を決定し、傾きと切片の両方を記録します。
3. Al^{3 +} Al^{3 +}の方程式 μ g から未知のサンプルでの μ を決定 -b/m を =
4. 不明なアルミが 25.0 mL 各サンプルに追加の量を持っていたことを知って、未知の世界のアルミニウムの濃度を決定します。

励起波長 335-435 からのスキャンは、399 で最高の吸収を示した nm、ので励起分光器がその値に設定されていました。450-550 nm からエミッション スキャンを行ったし、最も強い信号が 520 でことが判明した nm。これらは、すべてのサンプルに使用される波長です。

Μ g の Al^{3 +}追加 (図 4) 対蛍光 (図 3) のプロットの二乗ラインをもたらした。

蛍光強度 = 0.0417 (Al^{3 +}追加の μ g) x + 0.1216

Al^{3 +}の量-(Y-Int)/斜面を =-0.1216/0.0417 =-2.916 = μ G/ml

以来、未知の追加の量は 25 mL、2.916 μ g/mL 値を 25 で割った値に必要があります。

不明なアルミニウム濃度 = 2.916 μ g/mL/25.0 mL = 0.117 μ g/mL = 0.117 ppm
かなり 0.110 ppm (6.4% エラー) の実際の値に近いです。

図 3。サンプルの蛍光。

図 4。標準添加校正プロット。

標準の追加のメソッドは、多くの場合原子吸光、蛍光分光法、誘導結合プラズマ発光、ガスクロマトグラフィーなどの分析の分析で使用される正確な定量的な結果が必要なときに利用手法です。これは、削減または定量的な結果を得るのため必要な吸光度の強化目的の標本でその他のコンポーネントがある場合によく使用されます。これは、場合は、1 つ単に伝統的な校正曲線のアプローチを使用して標準検体信号を比較することはできません。実際には、マトリックス効果評価検証手順の必須の部分をする必要があります。

標準の追加機能を使用できる別の例は、古い写真廃棄物からの銀の抽出です。廃棄物はハロゲン化銀が含まれているし、銀をクリアできるように抽出することができます。銀の知られていた量の不明な「無駄」を打ちつけることによってこのメソッドは、写真フィルムから得られた銀の量を予測できます。

ベンゼン製造工場にさらされている労働者はしばしば、彼らは安全にベンゼンの受け入れレベルを下回っていることを確認するテストされ。化学工業、彼らの尿をテストし、生物学的マトリックスであります。また、単一の校正キットは動作しませんので、検体抑圧量は異なった人々 のため異なります。標準添加法とは、すべての従業員をテストおよび正確に評価できます。