Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education Library
Lab Animal Research
 

Compuesto de administración IV

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

Intracardiaca, retro orbital y el bandolero son algunos de los métodos de inyección especializada que investigadores biomédicos utilizan para experimentos que requiere entrega de compuestos a través de estas rutas anormales.

Una inyección intracardiaca proporciona el compuesto en el ventrículo izquierdo permitiendo que la sustancia entrar directamente en la circulación arterial. La ruta orbital retra es una alternativa a la inyección en la vena de la cola y se utiliza para entregar el compuesto en la circulación venosa. Y consiste en una inyección de almohadilla subcutánea del artículo en las patas traseras del animal. Este video muestran las consideraciones, procedimientos y aplicaciones de estas técnicas de inyección especiales.

Vamos a empezar con algunos antecedentes y cosas que uno debe considerar antes de iniciar estos procedimientos de administración.

Administración intracardiaca se realiza mediante el uso de un ultrasonido para guiar la aguja en el lugar correcto en el corazón. Sin embargo, si se realiza correctamente, utilizando los lugares adecuados, la administración puede realizarse sin el uso de la ecografía. Nota que el procedimiento requiere el uso de anestesia general y sólo una inyección por animal está permitido para procedimientos de supervivencia. Generalmente se utiliza una aguja de calibre 27-30 para esta inyección y volumen máximo de administración es 100 a 300 microlitros para ratones y ratas, respectivamente.

Para inyección intravenosa vía retro orbital, uno debe tener una justa comprensión de la estructura venosa orbital. Un ratón tiene un seno donde varias venas-a saber, la supraorbitaria, dorsal nasal, inferior palpebral y superficial temporal-convergen. Mientras que en las ratas, hay una red o plexo de varias venas. La inyección se realiza directamente en el seno o en el plexo. Como intracardiaco, que este procedimiento también requiere el uso de anestesia general y sólo una inyección por ojo al día se recomienda un total de dos inyecciones por ojo para los procedimientos de supervivencia. Como con todas las inyecciones, la aguja de tamaño más pequeño debe ser seleccionado-generalmente calibre 27-30- y el volumen máximo recomendado es de 150 μL por ojo.

A pesar de la controversia, el uso de la inyección de bandolero sigue siendo necesario para algunos estudios, generalmente relacionadas con inflamación y tumor crecimiento. Tenga en cuenta que las inyecciones sólo podrá realizarse en un solo pie, nunca bi-lateralmente. Y las mediciones de bandolero deben hacerse diariamente, tan pronto como se ha producido inflamación evidente.

Ahora vamos a aprender los procedimientos de inyección, a partir de la inyección intracardiaca. Le mostraremos el procedimiento en un ratón, pero los puntos de referencia y el protocolo para una rata son similares.

El primer paso es preparar la jeringa. Recordar un 29 medidor de aguja y jeringa de 1 cc es apropiado para los ratones. Y el volumen máximo de inyección intracardiaca 100 microlitros. Elaboración de la solución, dejar una pequeña cantidad de aire entre el émbolo y el material de inyección. Esto es para permitir sangre entrar en la jeringa, se coloca en el corazón.

Para empezar, anestesiar el animal utilizando anestésicos inhalantes o inyectables. Revisión de las consideraciones para el mantenimiento de anestesia general en otro video de esta colección. A continuación, posición del animal recumbency dorsal en una plataforma aislada. Luego, los miembros anteriores a la plataforma de la cinta y coloque un trozo de cinta horizontalmente en el abdomen por encima de las caderas. Esto es aún más constante del animal y evitar cualquier movimiento una vez que se ha insertado la aguja. A continuación, usando un hisopo mojado pecho del animal con alcohol al 70%.

Para localizar el sitio de inyección, primero Localice el xifoides y el esternón manubrio. A continuación, encontrar el punto medio entre las dos señales. 1-2 mm izquierda de este punto, es la señal de inserción de la aguja. Con un aplicador con punta de algodón, aplicar povidona yodada para marcar el sitio de inserción de la aguja.

Para inyectar, dirigir la aguja perpendicular a la tabla e inserte a la profundidad de unos 2 mm. Luego, aplicar una muy pequeña contrapresión al émbolo. Un brillante rojo sangre oxigenada deberá entrar en el centro de la jeringa, que confirma la colocación correcta. Sostenga la jeringa en el mismo lugar e inyectar el material lentamente y constantemente en el transcurso de 30 a 60 segundos. Inyección rápida puede ocasionar aglutinación de las células y la obstrucción de las arterias, un choque al sistema debido a la temperatura de la sustancia siendo significativamente menor que la temperatura del cuerpo, o una expansión del ventrículo y la interrupción del ritmo cardíaco.

Una vez que el material haya desaparecido la jeringa, lentamente y con cuidado retire la aguja sin ningún movimiento lateral ya puede dañar los músculos del corazón. Luego suelte la cinta de la patas delanteras y el abdomen y colocar el animal en posición prona en una jaula limpia con ropa de cama lo suficientemente profunda para actuar como una capa aislante. Nota que la mitad de esta jaula de recuperación está en el animal anestesiado y una fuente de calor está situado en el lado caliente de la jaula. Esto evita la hipotermia, y mientras el animal se recupera de la anestesia será capaz de moverse del lado caliente como se desee.

A continuación, vamos a aprender el método de la inyección intravenosa utilizando el plexo retro orbital en ratas. Otra vez, le mostraremos el procedimiento en un ratón, pero los puntos de referencia y el protocolo para las ratas son similares.

Conecte la aguja adecuada en la jeringa seleccionada y llenar en el material de inyección. Recuerde que generalmente se utilizaría una aguja de calibre 27-30 con el posible más pequeño de la jeringa y un volumen máximo de 150 microlitros.

Para iniciar el proceso, primero anestesiar al animal. Luego, colóquela sobre una superficie plana en posición lateral recumbency. Ahora coloque el dedo índice en la parte superior de la cabeza y el pulgar en la mandíbula y suavemente tire hacia atrás y abajo. Esto es para tensar la piel y sobresalen del globo ocular. Tenga cuidado de no aplicar presión sobre la tráquea y restringir el flujo de aire. Si múltiples inyecciones, aplicar anestésico oftálmico tópico, como la tetracaína o proparacaine.

Inserte la aguja en el ángulo medial del ojo con un ángulo de 45° para la nariz. La profundidad debe ser suficiente para penetrar los tejidos conjuntivales y avanzar en la órbita ocular y en el seno. No debería encontrar el hueso en la parte posterior de la órbita. Para evitar la ruptura de los vasos sanguíneos, asegúrese de que la aguja tiene un mínimo movimiento una vez insertado. No aspirar, ya colapsan los vasos. Inyectar el artículo de manera lenta y constante. Luego, retire suavemente la aguja y aplicar presión ligera en los ojos para controlar el sangrado y para proporcionar hemostasia.

Por último, vamos a revisar el método de inyección de bandolero en ratones y ratas. Para comenzar, coloque la aguja apropiada y llenar la jeringa con el volumen correcto. Este procedimiento puede hacerse en animales conscientes.

Lugar el animal en un tubo de sujeción con un hind pie aislado y extendidos sujetando la piel por encima de la rodilla. Limpiar los pies con agua o con alcohol para eliminar los desechos antes de inyectar. Para evitar el vaso sanguíneo que corre a lo largo del pie, la señal de inyección está en el centro, pero justo fuera de la línea media, más cerca a los dedos del pie.

Coloque el bisel de la aguja hacia arriba en el sitio de inyección, dirigiéndolo hacia el talón. Inyectar el artículo lenta y constantemente para evitar la rápida distensión de los tejidos del pie. Esto hará que el bandolero a hincharse a medida que el material de inyección llena ese espacio subcutáneo. A pie de un pequeño animal la hinchazón de la inyección puede extender al talón, mientras que en un animal mayor será ser más localizado.

Después de la inyección, observar los animales diariamente y si hinchazón persistente está presente o si hay lesiones o tumores como resultado el protocolo experimental, entonces, utilizando una pinza, realizar la medición de bandolero. Este instrumento mide el espesor del pie en milímetros y ayuda en la cuantificación de la inflamación.

Ahora vamos a discutir algunos experimentos de ejemplo utilizando inyecciones intracardiacas, retras orbital y bandolero.

Una de las muchas aplicaciones de administración intracardiaca es desarrollo de un modelo animal de metástasis del cáncer. Aquí, los investigadores utilizaron esta ruta para inyectar las células tumorales que tienen propensión a la colonización de hueso. En los días siguientes, estudió el crecimiento del tumor en los huesos mediante rayos x y fluorescencia, técnicas de imagen. En otro estudio, se utilizó la ruta orbital retra para inyectar los anticuerpos específicos que etiqueta de neutrófilos. Luego, con ayuda de la proyección de imagen intravital, los científicos fueron capaces de rastrear el patrón de migración de las células marcadas.

Por último, los investigadores suelen utilizan inyección de bandolero para analizar la respuesta inflamatoria. En este experimento, los investigadores aislaron células mononucleares de sangre periférica de muestras de sangre humana, mezclan con diferentes antígenos e inyectarán las soluciones en bandolero del animal.

Sólo ha visto el tramo final de Zeus en las técnicas de administración compuestos habituales y especializados.

Solo para recapitular, en la primera parte repasamos la ruta parenteral más común. En el segundo capítulo, hablamos de los procedimientos de enterales y tópicos. La tercera entrega aborda el primer conjunto de procedimientos anormales como intradérmica, intranasal e intracraneal en neonatos. Por último, aquí discutimos tres rutas adicionales que investigadores biomédicos en los laboratorios para fines específicos.

Después de ver esta serie tienes una mucho mejor comprensión de las técnicas de administración diferente y también debe saber las consideraciones generales y específicas relacionadas con estos protocolos de administración compuesto como siempre, gracias por ver!

Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter