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Overview

출처: 케이 스튜어트, RVT, RLATG, CMAR; 발레리 A. 슈뢰더, RVT, RLATG. 노틀담 대학교, IN

실험실 마우스와 쥐에서 화합물 관리를 위한 많은 일반적으로 사용 되는 경로. 프로토콜은, 그러나, 덜 일반적으로 사용되는 경로의 사용을 요구할 수 있습니다: 심내, 발판 및 복고풍 궤도 주사. 이러한 절차를 성공적으로 수행하기 위해서는 전문 교육이 필수적입니다. 이러한 경로에 대한 정당성은 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 승인을 얻기 위해 제공 될 수있다.

Principles

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내심 투여는 골암 전이의 동물 모델의 발달뿐만 아니라 심근 경색의 결과에 대한 직접 내심 전달의 효과에 대한 검사를 포함하여 다양한 응용 분야에서 사용되어 왔다. 이 절차는 종종 초음파를 사용하여 바늘을 심장의 올바른 위치로 안내합니다. 2 그러나 적절한 랜드마크를 활용하여 올바르게 수행하면 초음파 시각화를 사용하지 않고 이 절차를 수행할 수 있습니다.

절차의 침략적인 특성 때문에, 심내 주입의 사용은 IACUC 프로토콜에서 과학적으로 정당화되어야 합니다. 단 하나의 생존 주사를 허용해야 한다. 이 절차는 조직 내에 규정 된 지침에 따라 일반 마취제, 흡입제 또는 주사용의 사용을 요구합니다. 바늘 선택은 주입된 물질의 점도를 허용할 가능한 가장 작은 크기여야 합니다. 일반적으로 27-30 게이지 바늘이 사용됩니다. 사출 량은 100 μL에서 최대 300 μL까지 다양합니다.

마우스의 꼬리에 있는 정맥 주사는 도전적이고 수시로 실패합니다. 정맥 투여의 대체 경로는 복고풍 궤도 신경총을 통해입니다. 이 기술은 훈련과 능력을 수행해야하는 동안, 연구는 측면 꼬리 정맥 주입보다 복고풍 궤도 주입과 높은 성공률이 있음을 보여 주었다. 3, 4, 5 마취는 절차 도중 마우스가 이동하지 못하도록 하기 위하여 필요합니다. 종병이나 정밀기화기에 부착된 유도 챔버를 통해 전달되는 일반 흡입제 마취가 효과적입니다. 그러나 흡입제가 사용되는 경우, 동물이 챔버에서 제거되면 신속하게 복구되기 시작하므로 주사를 수행 할 준비가되어 있어야합니다. 국소 안과 마취제 (테트라카인 또는 프로파라카인)는 여러 주사를 수행 할 때 권장됩니다.

마우스와 쥐의 궤도 정맥 구조는 다릅니다. 마우스는 주상혈관 정맥, 등갈비 정맥, 열등한 팔페브랄 정맥, 눈 주위 의 궤도 의 공간을 채우는 피상적 측두정맥을 포함한 여러 선박의 부비동 또는 수렴을 가지고 있습니다. 쥐 궤도 지역에는 혈관의 네트워크 나 신경총이 있습니다. 모든 주사와 마찬가지로, 선택한 바늘은 가능한 가장 작은 크기여야합니다. 일반적으로 27-30 게이지 바늘. 더 큰 부피의 보고가 있었지만, 최대 부피는 눈당 150 μL입니다. 3, 4, 5 눈 당 한 주사, 하루에, 권장, 생존 절차에 대 한 눈 당 총 2 회 주사. 또한, 주사 사이 적어도 하루 간격 이 있어야. 비생존 절차의 경우 최대 500 μL의 부피를 투여할 수 있습니다.

논란에도 불구 하 고, 주입 사이트로 발 패드의 사용은 여전히 일부 연구에 대 한 필요. 발 패드를 통해 주입할 때 일부 마우스 균주에서 항체 반응이 호크에 주입될 때보다 현저히 강하다는 것이 입증되었습니다. 6 모든 동물은 통증의 징후, 음식 소비 수준 및 정상적인 앰비저브를 위해 면밀히 모니터링해야합니다. 발의 자가 절단은 다리가 파괴되는 정도까지 발생할 수 있습니다. 이것은 만성 통증의 표시입니다. 자기 절단을 보여주는 모든 동물은 즉시 수의사의 주의를 기울여야합니다.

풋패드 측정은 명백한 붓기가 발생하자마자 매일 수행되어야 합니다. 최종 점수는 IACUC 지침에 따라 제자리에 있어야 합니다. 일반적으로, 병변이나 종양이 음식과 물을 앰플하거나 도달하는 동물의 능력을 방해할 때 동물은 안락사되어야 합니다. 풋패드에 주입할 수 있는 최대 부피는 50 μL입니다. 주사에 29-30 게이지 바늘을 권장 합니다.

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Procedure

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1. 심내 주입

  1. 랜드마크 및 포지셔닝: 마우스 또는 쥐를 오른쪽 측면 재조정(왼쪽이 위쪽으로 향함) 또는 등쪽 재조정에 배치하고 랜드마크를 식별합니다.
    1. 팔꿈치의 포인트와 흉골의 왼쪽에 심혼을 대략 평평하게 배치합니다.
    2. 팔꿈치 의 지점에서 갈비뼈 사이에 바늘을 삽입합니다.
    3. 등대 변조에 있는 동물에서 바늘을 식탁과 평행하게 가슴에 삽입합니다.
    4. 측면 의 복종에 있는 동물에서, 테이블에 수직가슴에 바늘을 삽입합니다.
  2. 기사의 주입
    1. 이 심장 기능을 손상으로, 심근 낭에 출혈을 일으키는 원인이 되는 근육을 방지하기 위해 심장에 삽입되면 바늘의 최소한의 움직임이 있는지 확인합니다.
    2. 주사기를 흡인하여 적절한 배치를 결정합니다. 종종 주사기의 허브에 혈액의 플래시가있다.
    3. 바늘이 심장에 배치되면 주사주사기에 손이 재배치되지 않도록 주사기를 잡으라.
    4. 느리고 꾸준한 방식으로 기사를 주입.
    5. 출혈을 최소화하기 위해 바늘을 천천히 철회하십시오.
    6. 호흡 곤란, 발작, 청색증, 장기간 운동 실조 또는 주사 외상과 관련된 다른 후유증을 경험하는 마우스는 수의사 직원에 의해 평가되고 그들의 권고에 따라 안락사되어야 합니다.

Figure 1
그림 1. 마우스에서 심장 내 주사.

2. 레트로 궤도 신경총을 활용한 정맥 주사

  1. 사출 랜드마크 및 포지셔닝
    1. 동물을 평평한 표면에 놓고 측면 의지에 놓습니다.
    2. 바늘을 코에 45° 각도로 눈의 내측 캔투스에 삽입합니다.
    3. 바늘 깊이는 결막 조직을 관통하고 안구 궤도 뒤에 그리고 안구 신경총으로 전진하기에 충분해야 합니다. 바늘을 배치 할 때, 그것은 궤도의 뒷면에 뼈를 발생하지 않아야합니다.
    4. 턱에 엄지 손가락으로 머리 위에 검지 손가락을 놓습니다.
    5. 부드럽게 뒤로 아래로 당겨 피부를 조이고 안구를 돌출합니다.
    6. 기관체에 압력을 가하고 공기 흐름을 제한하지 않도록주의하십시오.
  2. 주사
    1. 안구가 아닌 눈 뒤에 바늘을 놓습니다.
    2. 바늘이 한 번 복고풍 궤도 신경총에 삽입 된 최소한의 움직임을 가지고 있는지 확인, 또는 혈관은 눈 뒤에 조직에 에이전트의 출혈과 손실을 일으키는 파열됩니다. 주사를 잡고 바늘이 복고풍 궤도 신경총에 배치되면 주사를 위해 주사기에 손이 재배치되지 않도록하십시오.
    3. 당신이 선박을 붕괴할 것이기 때문에 주사기와 흡인하지 마십시오.
    4. 느리고 꾸준한 방식으로 기사를 주입.
    5. 바늘을 철회하고 출혈을 제어하고 혈청을 제공하기 위해 눈에 가벼운 압력을 가합니다.
    6. 부종을 경험하는 마우스, 결막염, 또는 주사 외상과 관련된 그밖 후유증은 수의학 직원에 의해 평가되고 그들의 권고에 따라 취급되거나 안락사되어야 합니다

Figure 2
그림 2. 마우스에서 복고풍 궤도 주입.

3. 풋 패드 주입

  1. 구속을 위해, 한 개의 뒷발이 분리된 구속 튜브에 동물을 놓고, 피부를 움켜쥐는 것으로 확장합니다.
  2. 주입하기 전에 이물질을 제거하기 위해 물이나 알코올로 발을 닦으부습니다.
  3. 주사 부위에 작은 출혈을 형성하는 뒷발의 중심에 피하주사한다. 발의 길이를 실행하는 혈관을 피하려면 혈관과 평행한 중간줄을 막 벗어보세요.

Figure 3
그림 3. 마우스와 쥐에 풋 패드 주입.

심장 내, 복고풍 궤도 및 풋 패드는 생물 의학 연구원이 비정형 경로를 통해 화합물의 전달을 필요로 하는 실험에 사용 하는 전문 된 주입 방법 중 일부.

심내 주사는 물질이 동맥 순환에 직접 들어갈 수 있도록 좌심실로 화합물을 전달합니다. 복고풍 궤도 경로는 꼬리 정맥 주입에 대 한 대안이며 정맥 순환으로 화합물을 전달하는 데 사용됩니다. 그리고 풋 패드 주사는 동물의 뒷발에 기사의 피하 투여를 포함한다. 이 비디오는 이러한 특수 주입 기술의 고려 사항, 절차 및 응용 프로그램을 설명합니다.

이러한 관리 절차를 시작하기 전에 고려해야 할 몇 가지 배경 정보 및 사항으로 시작해 보겠습니다.

심장 내 투여는 종종 초음파를 사용하여 바늘을 심장의 올바른 위치로 안내합니다. 그러나 적절한 랜드마크를 활용하여 올바르게 수행하면 초음파 시각화를 사용하지 않고 투여할 수 있습니다. 절차는 일반 마취제를 사용해야하며 생존 절차에는 동물 당 1 개의 주사만 허용됩니다. 일반적으로 27-30 게이지 바늘은 이 주입에 사용되며 최대 투여량은 각각 마우스와 쥐를 위한 100 및 300 마이크로리터이다.

복고풍 궤도 경로를 통해 정맥 주사의 경우, 하나는 궤도 정맥 구조의 공정한 이해를 가져야한다. 마우스에는 여러 정맥, 등강비, 열등한 팔페브랄 및 피상적 측두구가 수렴되는 부비동이 있습니다. 쥐에 있는 반면, 몇몇 정맥의 네트워크 또는 신경총이 있습니다. 주사는 부비동 또는 신경총으로 직접 수행됩니다. 심장 내와 마찬가지로, 이 절차는 또한 전신 마취의 사용을 필요로하고, 생존 절차에 대한 눈 당 두 개의 주사의 총으로 하루에 눈 당 하나의 주사를 권장합니다. 모든 주사와 마찬가지로, 가장 작은 크기의 바늘은 일반적으로 27-30 게이지를 선택해야 하며 권장되는 최대 부피는 눈당 150 μL입니다.

논란에도 불구 하 고, 풋 패드 주입의 사용은 여전히 일부 연구에 대 한 필요, 일반적으로 염증및 종양 성장관련. 주사는 한 쪽 발에만 수행 될 수 있습니다. 그리고 풋패드 측정은 명백한 붓기가 발생하자마자 매일 수행되어야 합니다. 29-30 게이지 바늘은 주입에 권장되며 권장되는 최대 부피는 50 μL입니다. 어떤 주입 에 이어, 모든 동물은 통증의 징후, 음식 소비 수준 및 정상적인 앰비션을 위해 면밀히 모니터링해야합니다. 일반적으로 동물은 병변이나 종양이 동물의 음식과 물을 앰플하거나 도달하는 능력을 방해할 때 안락사되어야 합니다.

이제 심내 주사로 시작하여 주사 절차를 배우게하십시오. 우리는 마우스에서 절차를 시연할 것이지만, 랜드 마크와 쥐의 프로토콜은 유사합니다.

첫 번째 단계는 주사기를 준비하는 것입니다. 29 게이지 바늘과 1 cc 주사기를 회수하는 것은 마우스에 적합합니다. 그리고 심내 주입을 위한 최대 부피는 100 마이크로리터입니다. 용액을 그릴 때 플런저와 사출 재료 사이에 소량의 공기를 둡니다. 이것은 혈액이 심혼에 놓이기 때문에 주사기를 입력하는 것을 허용하기 위한 것입니다.

시작하려면 흡입제 또는 주 사용 마취제를 사용하여 동물을 마취하십시오. 이 컬렉션의 다른 비디오에서 전신 마취를 유지하기 위한 고려 사항을 검토합니다. 다음으로, 동물을 등지 의 재배치 위치에 절연 된 플랫폼에 배치합니다. 그런 다음 앞다리를 플랫폼에 테이프로 테이프로 놓고 엉덩이 위에 복부를 가로질러 테이프 조각을 수평으로 놓습니다. 이것은 동물을 더욱 안정시키고 바늘이 삽입되면 어떤 움직임도 피하기 위한 것이다. 다음으로 면봉을 사용하여 동물의 가슴을 70 % 알코올로 적시습니다.

주사 부위를 정확히 찾아내려면 먼저 xiphoid 및 manubrium 흉골을 찾습니다. 그런 다음 두 랜드마크 사이의 중간점을 찾습니다. 이 점의 왼쪽 1-2 mm는 바늘 삽입 랜드 마크입니다. 면 팁 어플리케이터를 사용하여 포비도요드 요오드를 적용하여 바늘 삽입 부위를 표시합니다.

주입하려면 바늘을 테이블에 수직으로 지시하고 약 2mm깊이에 삽입합니다. 그런 다음 플런저에 약간의 재압을 적용합니다. 밝은 붉은 산소 혈액은 적절한 배치를 확인하는 주사기 허브에 들어와야합니다. 주사기를 같은 자리에 잡고 30~60초 동안 천천히 꾸준히 재료를 주입합니다. 신속한 주사는 세포의 응집및 동맥의 막힘, 체온보다 훨씬 낮은 물질의 온도로 인해 시스템에 충격, 또는 심실의 팽창 및 심장 리듬의 중단을 초래할 수 있다.

재료가 주사기를 지워지면 심장 근육을 손상시킬 수 있기 때문에 측면 움직임없이 바늘을 천천히 조심스럽게 제거하십시오. 그런 다음 즉시 앞다리와 복부에서 테이프를 방출하고 절연 층으로 작동하기에 충분히 깊은 침구와 깨끗한 케이지에 동물을 배치합니다. 이 복구 케이지의 절반은 난방 원에 있으며 마취 된 동물은 케이지의 가열 된 측면에 위치하고 있습니다. 이것은 저체온증을 방지하고, 동물이 마취에서 회복함에 따라 원하는대로 가열 된 면을 벗어날 수 있습니다.

다음으로, 쥐의 레트로 궤도 신경을 활용하는 정맥 주사방법을 알아봅시다. 다시 말하지만, 우리는 마우스에 절차를 시연할 것입니다, 그러나 랜드 마크와 쥐에 대한 프로토콜은 유사하다.

선택한 주사기에 적합한 바늘을 부착하고 사출 물질을 채웁니다. 일반적으로 가장 작은 주사기와 150 마이크로 리터의 최대 부피를 가진 27-30 게이지 바늘을 사용합니다.

절차를 시작하려면 먼저 동물을 마취하십시오. 그런 다음 측면 재복리 위치에 평평한 표면에 놓습니다. 이제 검지 손가락을 머리 위에 놓고 엄지 손가락을 턱에 놓고 부드럽게 뒤로 당겨 줍니다. 이것은 피부를 조이고 안구를 돌출하는 것입니다. 기관체에 압력을 가하고 공기 흐름을 제한하지 않도록주의하십시오. 여러 주사를 계획 하는 경우, 국 소 안 과 적 마취를 적용, 테트라카인 또는 프로 파라카인 처럼.

바늘을 코에 45° 각도로 눈의 내측 캔투스에 삽입합니다. 깊이는 결막 조직을 관통하고 안구 궤도로 진출하여 부비동으로 진출하기에 충분해야 합니다. 궤도 뒤쪽의 뼈를 마주해서는 안 됩니다. 혈관의 파열을 피하기 위해 바늘이 한 번 삽입된 최소한의 움직임을 가지고 있는지 확인하십시오. 배가 무너질 것이기 때문에 흡인하지 마십시오. 느리고 꾸준한 방식으로 기사를 주입. 그런 다음 바늘을 부드럽게 철회하고 눈에 가벼운 압력을 가하여 출혈을 제어하고 혈청을 제공합니다.

마지막으로, 쥐와 쥐에서 풋 패드 주입 방법을 검토 하자. 시작하려면 적절한 바늘을 부착하고 주사기를 올바른 부피로 채웁니다. 이 절차는 의식동물에서 할 수 있습니다.

동물을 한 뒷발으로 분리하고 피부를 움켜쥐어 내밀고 있는 구속 튜브에 놓습니다. 주입하기 전에 이물질을 제거하기 위해 물이나 알코올로 발을 닦으부습니다. 발의 길이를 실행하는 혈관을 피하기 위해, 주사 랜드 마크는 중심에 있지만, 단지 중간선에서, 발가락에 가까운.

바늘을 발 뒤꿈치쪽으로 지시 하는 주입 사이트에 벨을 배치 합니다. 발 조직의 급속한 연소를 피하기 위해 천천히 꾸준히 기사를 주입하십시오. 이것은 사출 재료가 피하 공간을 채울 때 풋 패드가 팽창하게 됩니다. 작은 동물의 발에 주사에서 붓기발으로 확장 될 수 있습니다., 반면 더 큰 동물에 그것은 더 지역화 될 것입니다.

주사 후, 동물을 매일 관찰하고 지속적인 붓기가 존재하거나 실험 프로토콜의 결과로 병변이나 종양이있는 경우, 다음, 캘리퍼를 사용하여 풋 패드 측정을 수행합니다. 이 계측기는 밀리미터의 발 두께를 측정하고 붓기의 양에 도움이됩니다.

이제 내심장, 복고풍 궤도 및 풋 패드 주사를 활용하는 몇 가지 예제 실험에 대해 논의 해 봅시다.

심장 내 투여의 많은 응용 프로그램 중 하나는 암 전이의 동물 모델의 개발입니다. 여기, 연구원은 뼈 식민지에 대 한 성향을 소유 하는 종양 세포를 주입 하는이 경로 사용. 다음 날에, 그(것)들은 엑스레이 와 형광 화상 진찰 기술을 사용하여 뼈에 있는 종양 성장을 공부했습니다. 또 다른 연구에서는, 복고풍 궤도 경로 호중구를 표지 특정 항체를 주입 하는 데 사용 되었다. 그런 다음, 인트라바이탈 이미징의 도움으로 과학자들은 표지된 세포의 이동 패턴을 추적할 수 있었습니다.

마지막으로, 조사관은 종종 염증 반응을 분석하기 위해 풋 패드 주입을 사용합니다. 이 실험에서, 연구원은 인간 혈액 견본에서 말초 혈액 단핵 세포를 격리하고, 다른 시험 항원과 혼합하고 동물의 발판에 해결책을 주입했습니다. 마지막으로, 그들은 다른 항원으로 인해 붓기 반응을 정량화하기 위해 발 측정을 수행했습니다.

당신은 단지 평소및 전문 화합물 관리 기술에 JoVE의 마지막 할부를 보았다.

요약하기 만하면 첫 번째 부분에서 가장 일반적인 비경구 경로를 검토했습니다. 두 번째 장에서는 장내 및 국소 절차에 대해 논의했습니다. 세 번째 할부는 신산자의 상인, 내비강 및 두개 내과 같은 비정형 절차의 첫 번째 세트를 다루었습니다. 마지막으로, 여기에서 우리는 생물 의학 연구원이 특정 목적을 위해 실험실에서 사용하는 3개의 추가 경로를 토론했습니다.

이 시리즈를 시청 한 후 당신은 다른 행정 기술의 훨씬 더 나은 이해를해야하고 당신은 또한 화합물 관리의 이러한 프로토콜과 관련된 일반적이고 구체적인 고려 사항을 알고 있어야합니다 언제나처럼, 시청 주셔서 감사합니다!

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Applications and Summary

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동물로 화합물의 관리 동물의 웰빙과 실험 데이터 및 과학적 가치의 결과 모두에 중요 한 영향을 미칠 수 있습니다. 적절한 전달 방법은 실험의 성공에 필수적입니다. 연구의 과학적 목표, 물질의 pH, 필요한 투여량, 물질의 점도, 동물의 웰빙 등 최상의 경로를 결정하는 데 많은 요소를 고려해야 합니다. 기술 전문 지식은 또한 모든 주입 방법에 대한 요구 사항입니다.

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References

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Transcript

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