Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- מניחים כיסוי עם תאי ביצה מנותח על שלב המיקרוסקופ.
תאי עצב Drosophila הם קבוצה של 15 תאים בתוך תא הביצים אחראי להפקדת חומרים מזינים שמקורם באם וביומולקולות לתוך הביצית המתפתחת.
ודא כי אין אוויר לכוד בקצה נימי וכי יש זרימה רציפה של הפתרון.
הפרוטוקול הבא מדגים microinjecting Drosophila תאים אחות עם בדיקות אוליגונוקלאוטיד פלואורסצנטי, הנקרא משואות מולקולריות, נגד תעתיקי mRNA שתרמו אימהית להדמיית תאים חיים.
- עבור microinjection משואה מולקולרית, לבחור את המטרה שמן 40x ולהרכיב תלוש כיסוי עם תא הביצים מנותח על שלב המיקרוסקופ.
באמצעות מוט ההיגוי micromanipulator, בעדינות להוריד מחט טעון עם מיקרוליטר אחד של פתרון משואה מולקולרית לתוך טיפת השמן.
התמקד בתא הביצים כדי להיות microinjected, ולהביא את המחט בחזרה לפוקוס ליד קצה תא הביצה.
- כדי להבטיח הצלחה microinjection לשחזור, להתמקד בזהירות על הממברנה המפרידה בין תאי הזקיק ותאי האחות שיוזרקו, תוך הבאת קצה המחט לפוקוס עם micromanipulator.
- כאשר כל המשואות המולקולריות הוזרקו, להסיר בעדינות את המחט ולפתוח אותו למיקום הבית.
