ショウジョウバエナース細胞の微小注射:細胞内送達法

-解剖された卵室を持つカバースリップを顕微鏡のステージに置く。マイクロインジェクションのための適切な発達段階と向きの卵室を見つける。中期から後期の卵室は大きな目に見える卵子黄身を持ち、正しい向きの卵子は注射の方向に垂直である。

ショウジョウバエ神経細胞は、発達中の卵母細胞に母親由来の栄養素と生体分子を堆積させる卵室内の15個の細胞のグループです。

毛細血管の先端に空気が閉じ込められ、溶液の連続的な流れがあることを確認してください。次に、毛包細胞をナース細胞から分離する膜に焦点を当てる目的のZ位置を調整し、針を看護師細胞に挿入して注射を行います。

以下のプロトコルは、生細胞イメージングのための母親的に寄与したmRNA転写物に対して、分子ビーコンと呼ばれる蛍光オリゴヌクレオチドプローブを用いたショウジョウバエナース細胞をマイクロインジェクトすることを示す。

- 分子ビーコンマイクロインジェクションの場合は、40x油の目的を選択し、解剖された卵室を顕微鏡ステージにカバースリップを取り付けます。

マイクロマニピュレーターのジョイスティックを使って、1マイクロリットルの分子ビーコン溶液を入れた針を油滴にそっと下げ、先端を視野の周囲に向かって焦点を合わせます。

マイクロインジェクションする卵室に焦点を当て、卵室の端付近に針を焦点を当て直します。看護師細胞から卵胞細胞を分離する膜が焦点を当てるように目的のZ位置の微調整を行います。

- 再現性のあるマイクロインジェクションの成功を確実にするために、毛包細胞と注入される看護師細胞を分離する膜に注意深く焦点を当て、マイクロマニピュレーターで針の先端を焦点にします。

- すべての分子ビーコンが注入されたら、針をそっと取り出して自宅の位置に引き込み、目的を画像取得の目的の倍率に変更し、新しい目的の下で卵室に焦点を当てて画像取得を開始します。