Sporing fritt vandrende fluer: En metode for å vurdere bevegelse i Drosophila

- Bruk en overbygd arena - for eksempel en Petri-tallerken fylt med klar silikon - for å sikre at fluer kan gå fritt, men ikke kan fly inne i arenaen når den er dekket. Plasser parabolen på en hvit opplyst overflate og plasser et kamera rett over.

Når lokket er åpent, overfør bedøvede fluer inn i parabolen, dekk det og la forsøkspersonene komme seg. Fluer vil bevege seg fritt rundt arenaen under rettssaken. For å vurdere bevegelse, spor posisjonen til hver flue over tid og beregn parametere som karakteriserer bevegelse, for eksempel avstand reist av hver flue. I denne eksempelprotokollen vil vi se en demonstrasjon av analysen og analysen ved hjelp av videosporingsprogramvare.

- For å spore fluebevegelser i en Petri-tallerken, fyll først en 6 centimeter tallerken med gjennomsiktig silikonelastomer for å gjøre sporingsarenaen. La det være et 3 millimeter mellomrom mellom silikonet og lokket, slik at fluer kan gå fritt i gapet, men ikke ta fly. Under sporingsarenaen har du en hvit bakgrunn.

Deretter bedøver du fire fluer fra samme behandlingsgruppe og plasserer dem i arenaen. La fluene akklimatisere seg i en time til arenaen, som skal være fullt opplyst og ved ca. 22 grader Celsius, ikke varmere enn romtemperatur. Etter en time, bruk et lade koblet enhetskamera plassert over arenaen for å registrere flyets aktivitet i 5 minutter.

Etter 5-minutters innspillingen bedøver du fluene i arenaen og returnerer dem til et nytt hetteglass. Deretter kaster du arenaen. Senere analyserer du opptakene ved hjelp av den fritt tilgjengelige Ctrax-programvaren. Denne programvaren genererer sporingsdata, som kan eksporteres i et programmerbart språkkompatibelt format, for eksempel MATLAB-formatet.

Fra dataene beregner du tilbakelagt distanse per ramme, gjennomsnittlig gangavstand for hver flue og gjennomsnittlig tilbakelagt distanse per flue. For statistisk signifikans, forvent å teste ca. 100 fluer per behandlingsgruppe.