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JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

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Preparazione scivolo nematode

 
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Preparazione scivolo nematode: un metodo per montare gli animali su un tampone di agar

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- In primo luogo, posizionare uno scivolo al microscopio tra altre due diapositive con nastro adesivo. Questi forniscono supporto e distanziali per la preparazione del cuscinetto di agarosio. Successivamente, posizionare una goccia di agarosio fuso sulla diapositiva. Premere immediatamente verso il basso con un'altra diapositiva.

Dopo che l'agarosio si solidifica, separare accuratamente le diapositive in modo che l'agarosio rimanga su una diapositiva. Utilizzare sempre pastiglie appena fatte in quanto i cuscinetti essiccati possono disidratare gli animali. Assicurarsi che non vi siano crepe o bolle, che possono interrompere l'integrità del pad.

Aggiungere quindi una goccia di anestetico al centro del pad e trasferirne da 10 a 15 animali, portando con sé il maggior numero possibile di batteri. I batteri in eccesso potrebbero interferire con l'imaging. Se la soluzione anestetica si asciuga, aggiungere una seconda goccia sugli animali.

Posizionare delicatamente un coverslip sul pad. Evitare di formare bolle o di esercitare troppa pressione su di esso per evitare di danneggiare gli animali. Infine, etichettare lo scivolo, pronto per l'imaging.

- Iniziare preparando le diapositive per l'imaging. Posizionare una goccia di agarosio fuso su uno scivolo al microscopio e premere immediatamente la goccia con un altro vetrino del microscopio appiattire delicatamente l'agarosio È necessario asciugare l'agarosio per un minuto.

Quindi, separare accuratamente le due diapositive e lasciare il pad solidificato su una delle diapositive. Posizionare la diapositiva sul palco del microscopio e aggiungere una goccia di anestetico da 5 a 10 microliter al centro del pad agras.

Utilizzare un piccone sterilizzato termicamente per trasferire rapidamente da 10 a 15 animali dalla piastra di serie alla goccia anestetica prima che la soluzione si ascili. Quindi, applicare un coverslip posizionandolo appena sopra il tampone di agarosio e facendolo cadere delicatamente verso il basso.

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