Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Plasser først et mikroskopsklie mellom to andre lysbilder med tape. Disse gir støtte og avstandsstykker til agarose pad-preparatet. Deretter plasserer du en dråpe smeltet agarose på lysbildet. Trykk straks ned på den med et annet lysbilde.
Etter at agarose størkner, separer forsiktig lysbildene slik at agarose forblir på ett lysbilde. Bruk alltid nylagde pads som tørkede puter kan dehydrere dyrene. Forsikre deg om at det ikke er sprekker eller bobler, noe som kan forstyrre putens integritet.
Deretter legger du til en dråpe bedøvelse til putesenteret og overfører 10 til 15 dyr til det, og bringer så lite bakterier med dem som mulig. Overskytende bakterier kan forstyrre avbildningen. Hvis bedøvelsesløsningen tørker ut, legg til en ny dråpe på dyrene.
Legg forsiktig en deksle over puten. Unngå å danne bobler eller legg for mye press på den for å unngå å skade dyrene. Til slutt merker du lysbildet, som er klart for avbildning.
- Begynn med å klargjøre lysbilder for avbildning. Plasser en dråpe smeltet agarose på en mikroskopsklie og trykk straks ned dråpen med et annet mikroskop som forsiktig flater ut agarose Trenger agarose å tørke i ett minutt.
Deretter skiller du forsiktig de to lysbildene og lar den størkne puten stå på en av lysbildene. Plasser lysbildet på mikroskopstadiet og legg til en 5- til 10-mikroliterdråpe bedøvelse i midten av agrasputen.
Bruk et varmesterilisert plukk for raskt å overføre 10 til 15 dyr fra lagerplaten til bedøvelsesdråpen før oppløsningen tørker ut. Deretter bruker du en deksleslip ved å plassere den like over agaroseputen og forsiktig slippe den ned.
