Drosophila ( Drosophila ) Y-maze Assay: Une méthode pour évaluer les réponses olfactives chez les mouches

- Un labyrinthe en Y se compose d’un connecteur en forme de Y avec trois flacons de mouches reliés par des tubes droits ou coniques. Les mouches se déplacent à travers le labyrinthe vers le côté avec le stimulus qu’elles préfèrent. Pour commencer l’expérience, placez un papier de soie avec la solution contenant les produits chimiques volatils dans chaque flacon. Puis, connectez-les aux tubes coniques. Les tubes coniques limitent la capacité des mouches à retourner au centre du labyrinthe et ralentissent la diffusion des produits chimiques volatils.

Ensuite, refroidissez les mouches affamées pour les ralentir. N’utilisez pas d’anesthésie chimique, car cela peut affecter le résultat de l’analyse. Connectez rapidement le flacon avec les mouches réfrigérées jusqu’au côté final du labyrinthe. Laissez les mouches explorer le labyrinthe. Pour réduire toute préférence causée par la lumière vive, effectuez cette étape sous une lumière rouge lointaine, que les mouches ne voient pas. Enfin, comptez les mouches de chaque côté du labyrinthe. Leur emplacement dans le labyrinthe indique leur préférence pour ce parfum chimique volatil.

Dans le protocole d’exemple, nous verrons une configuration de l’essai de labyrinthe Y avec le type sauvage Drosophila.

- Avant d’effectuer l’analyse le lendemain matin, en fin de journée, transférer des cohortes de 10 à 20 lignes expérimentales vers des flacons de verre avec de l’humidité fournie par une serviette humide. Les mouches doivent être testées en 16 à 18 heures, ou elles pourraient mourir à cause de la dessiccation ou de la famine. Le lendemain, assemblez le labyrinthe Y. Commencez par joindre le connecteur en forme de Y à deux flacons de verre à l’aide de connecteurs en mousse avec des pointes de pipette taillées qui font les conduits. Leur forme effilée fait ces passages à sens unique.

La troisième branche du « Y » est fixée à un tube de chargement, fabriqué à partir de la grande partie d’une pointe de pipette, et permet le passage du flacon de chargement au point de choix du labyrinthe. Au-delà de chaque tunnel conique se trouve un flacon de verre, dont l’un doit être chargé d’un odorant. Chargez-les sous forme de bolus de 40 microlitres trempés dans des carrés de papier de soie de 28 millimètres. Lequel des deux contient l’odorant doit alternativement être aléatoire.

Pour effectuer l’essai, refroidissez d’abord brièvement les mouches sur la glace, de sorte que les mouches sont ralenties. Cela devrait être sous la lumière rouge lointaine des ampoules LED et à 25 degrés Celsius. Déposez doucement la cohorte de mouches dans le flacon de chargement et chargez le labyrinthe Y avec les mouches d’essai. N’utilisez pas d’anesthésie au gaz.

- Il est vraiment essentiel de transférer les mouches sur le flacon de chargement à la fois rapidement et doucement. C’est en fait l’étape la plus difficile de cette expérience parce que les mouches doivent se réveiller rapidement avant la diffusion des odeurs dans le labyrinthe Y.

- Les mouches doivent être autorisées à explorer le labyrinthe pendant 24 heures, de sorte qu’un nombre maximal de mouches se déplacent vers l’une ou l’autre fiole de verre. Le nombre de mouches présentes dans les différents tubes sert à calculer l’indice olfactif. Des méthodes statistiques standard devraient être appliquées à cette valeur, recueillies à partir du comportement de jusqu’à 10 mouches.

Si les cohortes de 10 mouches ne fournissent pas de résultats cohérents, les essais peuvent être exécutés avec des cohortes de 20 mouches. Pour nettoyer les composants du labyrinthe, les tremper, les démonter, dans rbs 35 MD pendant la nuit. Suivez ceci avec des rinçages à l’eau du robinet et un rinçage final à l’eau DI avant le séchage à l’air.