Drosophila Y-labyrint Assay: En metode til at vurdere olfaktoriske svar i fluer

- En Y-labyrint består af et Y-formet stik med tre flueglas forbundet med det med lige eller koniske rør. Fluer bevæger sig gennem labyrinten mod siden med den stimulus, de foretrækker. For at starte eksperimentet skal du placere et silkepapir med opløsningen, der indeholder de flygtige kemikalier i hvert hætteglas.

Dernæst chill sultede fluer til at bremse dem ned. Brug ikke kemisk anæstesi, da dette kan påvirke resultatet af analysen.

I eksemplet protokol, vil vi se en opsætning af Y-labyrint assay med vilde type Drosophila.

- Før du udfører analysen den følgende morgen, i slutningen af dagen, overføre kohorter på 10 til 20 eksperimentelle linjer til glas hætteglas med fugt fra et vådt håndklæde. Fluerne skal testes i 16 til 18 timer, eller de kan dø på grund af udtørring eller sult. Den næste dag, samle Y-labyrinten. Start med at tilslutte Y-formet stik til to glas hætteglas ved hjælp af skum stik med trimmet pipette tips, der gør ledningerne. Deres aftagende form gør disse envejs passager.

Den tredje gren af "Y" er fastgjort til en lastning rør, lavet af den store del af en pipette spids, og giver passage fra lastning hætteglas til valg punkt i labyrinten. Ud over hver aftagende tunnel er et glas hætteglas, hvoraf den ene skal indlæses med en lugt.

For at gennemføre testen afkøles fluerne først kortvarigt på isen, så fluerne bremses. Dette skal være under langt rødt lys fra LED-pærer og ved 25 grader Celsius. Slip forsigtigt kohorten af fluer ind i lasteglasset og læg Y-labyrinten med testfluerne. Brug ikke gasbedøvelse.

- Det er virkelig afgørende at overføre fluerne til læsseglasset både hurtigt og forsigtigt. Det er faktisk det sværeste trin i dette eksperiment, fordi fluer skal vågne hurtigt op før spredning af lugt i Y-labyrinten.

- Fluerne skal have lov til at udforske labyrinten i 24 timer, så et maksimalt antal fluer flytter til det ene eller det andet glasglas. Antallet af fluer, der er til stede i de forskellige rør, tjener til at beregne olfaktorisk indeks. Standard statistiske metoder skal anvendes på denne værdi, indsamlet fra op til 10 fluer.

Hvis 10-fly kohorter ikke giver ensartede resultater, kan forsøgene køres med 20-fly kohorter. For at rydde op i labyrinten komponenter, suge dem, demonteret, i RBS 35 MD natten. Følg dette med skylninger i vand fra hanen og en endelig skylning i DI vand før lufttørring.