Encyclopedia of Experiments: Biology
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- नेमाटोड आबादी की औसत उम्र को मापने के लिए, M9 बफर में विकासात्मक सिंक्रोनाइज्ड एल 1 लार्वा के साथ शुरू करें। लार्वा के घनत्व को निर्धारित करें, फिर प्रत्येक प्लेट में 50 जोड़ें। प्रति स्थिति कम से कम तीन प्रतिकृति प्लेटें तैयार करें, साथ ही बैकअप प्लेटें।
इन कीड़े को सामान्य रूप से विकसित होने दें जब तक कि वे L4 चरण तक न पहुंच जाएं। अब आप प्लेटों में एफडीआर जोड़ सकते हैं, जो कीड़े को संतान पैदा करने से रोकेगा । वैकल्पिक रूप से, आपको गिनती के बाद प्रत्येक दिन कीड़े को नई प्लेटों में स्थानांतरित करने की आवश्यकता होगी, ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि आप केवल एक पीढ़ी की उम्र को माप रहे हैं ।
इसके बाद, किसी भी पुरुष को हटा दें। यह प्रयोग से सेक्स और संभोग के चर को हटा देगा। अगले दिन, सहज आंदोलन या कोमल स्पर्श के जवाब की तलाश करके प्लेट पर जीवित कीड़े की संख्या गिनें। किसी भी मृत कीड़े को हटा दें और संख्या रिकॉर्ड करें। जब तक कोई नहीं रह जाता तब तक रोजाना जीवित कीड़े की गणना करें । उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम एक जीवन काल के आधार का प्रदर्शन देखेंगे ।
- तैयार बैक्टीरिया-वरीयता प्राप्त प्लेटों को 50 एल1 जानवरों के साथ लोड करें। 20 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में प्लेटों को तब तक सेट करें जब तक कि भ्रूण एल4 चरण में विकसित न हो जाए। L1 से एल4 तक सामान्य विकास में लगभग 40 घंटे लगते हैं।
फिर, संतान उत्पादन को रोकने के लिए, प्रत्येक प्लेट में 50x FUdR के 160 माइक्रोलीटर जोड़ें। फिर पुरुषों को हटा दें, क्योंकि उम्र आमतौर पर केवल हर्मेफ्रोडाइट्स के साथ मापी जाती है। एक बार पूरा होने के बाद, प्लेटों को 20 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में फिर से पैक करें।
जब तक सभी कीड़े मर न जाएं, तब तक उनकी व्यवहार्यता को दैनिक आधार पर स्कोर करें । ऐसा करने के लिए, धीरे से एक प्लेटिनम तार या बरौनी के साथ सिर पर प्रत्येक गैर चलती सूत्रकृमि को छूने । अट्रैक्टिव जानवर मर चुके हैं और प्लेट से हटा दिए जाने चाहिए । इस दिनचर्या के दौरान किसी भी विसंगतियों पर ध्यान दें ।
