Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Для измерения средней продолжительности жизни популяции нематод, начните с развития синхронизированных личинок L1 в буфере M9. Определите плотность личинок, затем добавьте 50 к каждой пластине. Подготовьте по крайней мере три пластины репликации на условие, а также резервные пластины.
Разрешить эти черви развиваться нормально, пока они не достигнут стадии L4. Теперь вы можете добавить FUdR к пластинам, которые будут препятствовать червей от производства потомства.
Далее удалите самцов. Это уберет переменные пола и спаривания из эксперимента. На следующий день подсчитайте количество живых червей на тарелке, ища спонтанное движение или ответ на нежное прикосновение. Удалите мертвых червей и зачитайте цифры.
- Загрузите подготовленные бактерии семенами пластин с 50 L1 животных каждый. Настройка пластин в 20 градусов по Цельсию инкубатор, пока эмбрионы развиваются до стадии L4. Нормальное развитие от L1 до L4 занимает около 40 часов.
Затем, чтобы предотвратить производство потомства, добавьте 160 микролитров 50x FUdR к каждой пластине. Затем удалите самцов, так как продолжительность жизни обычно измеряется только гермафродитами.
До тех пор, пока все черви мертвы, оценка их жизнеспособности на ежедневной основе. Для этого, осторожно коснуться каждого не-движущихся нематод на голове с платиновой проволоки или ресниц. Нереактивных животных мертвы и должны быть удалены из пластины. Принять к сведению любые аномалии во время этой рутины.
