К. Элеганс Анализ выживаемости: Краткосрочный тест на токсичность

- Начните с подготовки соединения для проверки на токсичность, и распространять его в колодцы анализ пластины. Передача червей соответствующей стадии развития для каждой скважины, и сразу же начать таймер. Обратите внимание на любые черви, которые повреждены и не включают их в ваши расчеты выживания.

После заранее определенного времени, подсчитайте количество червей, которые все еще живы в каждом хорошо. Яркий свет микроскопа вскрытия или нежное постукивание по пластине должно привести к любым живым червям двигаться. Повторите это наблюдение после каждого промежутка времени, пока большинство животных мертвы. В следующем протоколе, мы будем наблюдать L4 личинок время выживания во время воздействия параквата, соединение, которое вызывает окислительный стресс.

- В этой демонстрации, окислительный стресс будет индуцирован с помощью paraquat. Подготовка свежих 100 миллимоляонных паракват решение, как описано в сопроводительном тексте протокола. Paraquat является опасным и высокотоксичным соединением, и должны быть обработаны в соответствии с соответствующими руководящими принципами.

Pipette 40 микролитров раствора параквата для каждой скважины 96-хорошо пластины. Используйте по крайней мере 12 скважин, как реплицирует каждое условие испытания. Использование платиновой проволоки червя забрать, передать от пяти до восьми L4 личинок животных в каждой скважине.

Укажите время начала и время окончания для каждого испытанного состояния. Поместите пластину 96-колодец при 20 градусах по Цельсию. Через час после начала, оценка мертвых и живых животных с помощью рассечения микроскопа.

Черви, которые не двигаются даже после обнаружения света высокой интенсивности, забиваются как мертвые. Посмотрите на форму червя, хвосты и движение головы с высоким увеличением, чтобы отличить мертвых червей от живых червей. Оценка выживания каждый час, пока большинство червей мертвы, и повторите этот анализ по крайней мере три независимых раза.

Чтобы определить процент выживаемости для каждой точки времени, сначала вычислите общее количество животных на состояние, добавив общее количество животных, переданных в каждую колодец. Игнорировать животных, которые были повреждены или убиты при передаче. Далее, за каждый момент времени, рассчитать общее количество мертвых животных на состояние.