Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Tip 1 diabetes mellitus, bağışıklık sisteminin pankreastaki insülin yapımı beta hücrelerini yok ettiği bir insan hastalığıdır. Streptozocin zebra balığında tip 1 diabetes mellitus'a neden olabilir. İlk olarak, balık suyunda 2 fenoksyethanol çözeltisinde bir balığı uyuşturun. Balığı alın ve yukarı bakan bir Petri kabına yerleştirin. Streptozocin dozunu balığın ağırlığının gramı başına 0.35 miligrama göre hesaplayın ve salin çözeltisinde seyreltin.
Streptozocin'i zebra balığının ventral tarafındaki pelvik korsenin altına intraperitoneal enjeksiyonla uygulayın. Streptozocin yapısal olarak N-asetillglukozanin'e benzer, glut2 resepttörünü pankreas beta hücrelerine bağlayan ve insülin salgılanmasına yol açan bir liganddır. Böylece streptozocin, hücrelerin içinde taşıyan pankreas beta hücrelerinde bulunan GLUT2 reseptörlerine bağlanır.
Beta hücrelerine girdikten sonra, streptozocin otoantikojenlerin salınmaya yol açan bir bağışıklık yanıtını tetikler. Otoantikojenler, bağışıklık sisteminin beta hücrelerini yabancı olarak tanımasına ve insülin seviyelerinin azalmasına yol açan onları yok etmesine neden olur. Üç ve beş gün boyunca tekrarlanan streptozocin dozlarını ve ardından bağışıklık yanıtını korumak için haftalık dozları, her yedi günde bir uygulayın.
Aşağıdaki örnekte, tip 1 diabetes mellitus zebra balığı modeli üreteceğiz. Diabetes mellitus ile zebra balığı üretmek için, normal balık suyu ile bir geri kazanım tankı ve 2 fenoksyethanol 1 ila 1.000 seyreltme ile bir anestezik balık suyu tankı hazırlayın. Bir duman kaputunun altında, 2 mililitreye 0.09 sodyum klorür 6 miligram STZ ekleyerek% 0.3 streptozocin veya STZ çözeltisi hazırlayın ve çözeltiyi hemen buzun üzerine yerleştirin.
Ayrı bir tüpte, kontrol balıkları için yeterli tuzlu su. 27 ve 1/2 kalibrelik bir iğne ile donatılmış yarım CC şırıngayı STZ veya kontrol çözümleriyle doldurun, hava kabarcıklarının sıkışmamasını sağlayın. Tek bir balığı anestezik suya yerleştirerek ve yüzme hareketi bitene kadar yaklaşık bir ila iki dakika bekleyerek uyuşturun.
Uyuşturulduktan sonra, fazla suyu emmek için balığı kısaca bir kağıt havluya yerleştirin. Sonra, balığı bir tartım teknesine yerleştirin ve tartın. Sonra, balığı sıkı bir yüzeye yerleştirin. Daha sonra iğneyi eğimi geçerek ventral peritonun arka yönüne yerleştirin ve stz'nin gramı başına 0,35 miligram veya eşdeğer bir kontrol çözeltisini balığın periton boşluğuna enjekte edin.
Enjeksiyondan sonra, balıkları geri kazanım suyu deposuna yerleştirin ve normal yüzme aktivitesi için izleyin. Deney için yeterli balık enjekte ettikten sonra, normal yaşam tanklarına aktarın ve 22 ila 24 santigrat derece sıcaklıkta koruyun. Azaltılmış sıcaklık, hiperglisemi'nin verimli bir şekilde indüksiyonu için kritik öneme sahiptir.
