Abstract
PTMScan ® Technology von Cell Signaling Technology (CST) kombiniert proprietäre Methoden für Antikörper-basierte Peptid Anreicherung mit Flüssigchromatographie-Tandem-Massenspektrometrie (LC-MS/MS) quantitativ Profil post-translationale Modifikationen (PTM) wie Phosphorylierung (PhosphoScan ®) , Ubiquitinierung (UbiScan ®) und Acetylierung (AcetylScan ®).
PTMScan ® Technology beschäftigt CST ™ Motif Antikörper an vordefinierte Gruppen von posttranslational modifizierte Peptide, die von unmodifizierten Peptide in verdaut Zellextrakten zu trennen. Diese Immunaffinitätsreinigung Technik ist mit LC-MS/MS kombiniert zu identifizieren und zu quantifizieren Veränderungen in modifizierten Peptids Hülle und Fülle. Motif-Antikörper sind spezifisch zu binden phospho (Tyr, Ser, Thr)-Peptiden, acetyliert Peptide oder Ubiquitin-markierte Peptide, so dass die quantitative Profilierung der Phosphorylierung, Acetylierung, Ubiquitinierung oder Status der Zelle.
MAPK, mTOR und die PI3K/Akt Wege sind wichtige Signal stromabwärts von onkogenen Rezeptor-Tyrosin-Kinasen (RTK) Wegen aktiviert. Alle diese Wege zu aktivieren AGC-Kinase-Familie, einschließlich Akt, RSK und p70 S6-Kinasen, deren Protein-Substrate sind in der RxRxxS / T-Motiv phosphoryliert.
In einer kürzlich phosphoproteomic Studie von Wissenschaftlern CST (Sci. Signal (2010) 24, 3. (136).: Ra64) verfasste, wurden mehr als 300 mutmaßliche Substrate für diese AGC-Familie-Kinasen in drei Zelllinien, die jeweils entweder durch EGFR angetrieben identifiziert, c-Met oder PDGFR. Der experimentelle Ansatz beschäftigt PhosphoScan ® Technologie mit der RxRxxS / T Motif Antikörper als Affinitätsreagens selektiv Immunopräzipitat phosphorylierte Substrate von Akt, RSK und p70 S6-Kinasen. Einsatz von gezielten Krebsmedikamenten mit Inhibitoren spezifisch für PI3K, mTOR, und MEK für die Zuordnung von Signal-Netzwerk hinter diesen RTKs erlaubt. Substrate enthalten Proteine in vielen zellulären Funktionen beteiligt, darunter Gerüste, die Stabilität von Proteinen, Stoffwechsel, Menschenhandel und Motilität.
