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Biology II: Mouse, Zebrafish, and Chick

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제브라피쉬 유지 관리 및 사육

Overview

제브라피쉬(Daniorerio)는새로운 치료법을 위한 개발, 모델링, 검진을 위한 강력한 척추동물 모델 시스템입니다. 작은 크기 때문에 많은 수의 제브라피쉬가 저렴한 비용으로 실험실에 보관할 수 있습니다. 제브라피쉬는 비교적 유지가 쉽지만, 생선 건강과 생식의 성공을 최적화하기 위해서는 식단과 수질 모두에 특별한 배려를 주어야 합니다.

이 비디오는 실험실에서 제브라피쉬 축산 및 유지 보수에 대한 개요를 제공합니다. 천연 제브라피쉬 서식지에 대한 간략한 검토 후, 실험실에서 이러한 환경을 재현하는 데 필수적인 기술에는 어류 시설 물 재순환 시스템의 핵심 요소와 제브라피시 식단의 일환으로 소금물 새우 를 준비하는 것이 포함됩니다. 또한, 프리젠 테이션은 DNA 추출 및 genotyping에 대한 꼬리 지느러미 샘플의 수집에 대한 특정 참조와 함께, 실험실 설정에서 특정 제브라피시 균주를 추적하는 방법에 대한 정보를 포함한다. 마지막으로, 제브라피쉬 환경의 실험적 수정은 이러한 물고기에 대한 이해를 증진시키는 수단으로, 그리고 그 자체로 논의될 것입니다.

Procedure

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적절한 축산은 제브라피시에서 수행 된 실험의 성공에 필수적입니다. 최적의 수질은 물고기 건강과 실험적 재현성을 촉진합니다. 또한, 제브라피시 계란 생산은 적절한 영양에 크게 의존합니다. 이 비디오는 물고기가 실험실에서 어떻게 보관되고 공급되는지, 주식 취급 및 관리에 대한 팁, 생물학적 실험에서 제브라피시 환경이 어떻게 조작되는지를 보여줍니다.

먼저 물고기 서식지의 기본을 살펴보겠습니다.

야생 얼룩말물고기는 신선한 히말라야 바다에서 유래합니다. 이 기후에서, 물고기는 신선한 물의 느린 이동 시체에 몸을 몸을 구부리는 대부분의 시간을 보낸다.

이 낙원은 실험실에서 어떻게 재현되는가? 가장 중요한 부분인 물부터 시작해 봅시다. 담수를 쉽게 얻을 수 있지만, 수돗물은 염소와 잠재적 인 오염 물질로 인해 얼룩말 물고기에 독성이 있습니다. 따라서 수족관물은 역삼투체와 같은 정화 시스템을 통과해야 한다. 염분 과 pH 버퍼는 염분과 pH를 최적화하기 위해 정제된 물에 다시 첨가됩니다.

실험 효율성을 극대화하기 위해 많은 물고기는 제한된 양의 물로 유지됩니다. 모든 물고기가 수영하면서 폐기물이 빠르게 쌓이므로 물 변화가 필수적입니다. 이러한 요구는 높은 물 수요를 생성하므로 어류 시설은 재순환 시스템을 사용하여 물 사용을 최소화합니다. 더러운 물은 시스템으로 다시 흐르기 전에 UV 처리에 의해 여과되고 살균됩니다.

Zebrafish는 여러 크기로 제공되는 특수 탱크에 보관됩니다. 탱크는 증발을 줄이고 물고기 탈출을 방지하기 위해 덮여있다. 탱크가 시스템에 통합될 수 있도록 뚜껑에는 깨끗한 물이 끊임없이 흐르는 구멍이 있습니다. 탱크 뒤쪽의 오버플로 포트덕분에 수위는 안정적으로 유지되며, 이 포트는 더러운 물이 아닌 물고기가 흐르도록 허용하는 작은 구멍이 있는 배플로 덮여 있습니다.

물 교환에도 불구하고 조류와 고체 폐기물은 여전히 탱크에 축적 될 수 있으므로 정기적으로 청소해야합니다.

어류 시설의 환경 통제도 매우 중요합니다. 온도는 28°C 또는 80°F 근처에서 유지됩니다. 동물의 일주기 리듬을 유지하기 위해 조명은 14 시간의 빛과 10 시간의 어둠으로 주기에 제어됩니다.

이제 우리는 제브라피시 주거 조건을 넘어 갔으니, 그들의 식단에 대해 이야기해 봅시다.

그들의 자연 서식지에서, 제브라피쉬는 주로 동물 플랑크톤과 곤충을 소비합니다. 이 규정식은 마른 음식과 작은 유기체의 조합에 의해 실험실에서 다시 생겨립니다. 라발과 어린 물고기는 파라메시아와 같은 살아있는 미생물에서 번성하며, 성인 생선은 종종 시판되는 분말과 소금물 새우로 알려진 작은 갑각류를 먹입니다.

이 동물은 그들의 계란이 실온에서 휴면 낭종으로 저장될 수 있기 때문에 실험실 준비에 특히 순종적입니다. 새우를 먹기 위해 준비하기 위해 단단한 외부 껍질은 표백제로 치료에 의해 제거됩니다. 다음으로, 캡슐화된 계란은 철저히 세척됩니다. 계란은 약 하루 동안 바닷물의 성장을 허용하기 위해 무성 탑으로 전송됩니다. 마지막으로, 부화 새우는 메쉬 여과기에 수집 및 헹은 다음 먹이를 병에 넣습니다. 생선은 일반적으로 하루에 2 - 3 번 먹이고, 라이브 및 건조 사료를 번갈아 가며, 음식이 먹기 전에 떠다니지 않도록이 기간 동안 물 흐름이 꺼져 있습니다.

이제 물고기를 집에 보관하고 먹이는 방법을 알고 있으므로, 생선 주식을 함께 일하고 추적하는 방법을 배울 시간입니다.

실험실 물고기 시설은 야생 형 균주에서 부터 파괴포인트 돌연변이와 삽입 된 트랜스 유전자로 게놈을 수정한 물고기에 이르기까지 다양한 유형의 제브라피시를 수용합니다. 이 모든 물고기를 추적하기 위해 비슷한 유전 적 배경을 가진 동물은 표지 된 탱크에 함께 유지됩니다. 탱크 라벨에는 물고기 유전자형 및 생년월일을 포함한 철저한 식별 정보가 포함되어야 합니다.

제브라피쉬 다산은 생후 1년 후에 감소하기 시작하므로 주식은 매년 보충되어야 합니다. Zebrafish는 완전히 근친 근친 긴장뿐만 아니라 살아남지 못하므로 관련이없는 물고기또는 "아웃 크로스"의 십자가에서 자손을 수집하여 유전적 다양성을 유지해야합니다.

형질전환 또는 돌연변이 선을 넘어질 때, 원하는 유전적 변형을 베어링하는 자손은 형광발 또는 유전화에 의해 확인되어야 한다. 유전자형에, 먼저 트리카인에서 물고기를 마취. 그런 다음 DNA의 공급원으로 꼬리 지느러미의 작은 조각을 잘라냅니다.

마지막으로, 꼬리 샘플에서 DNA를 분리하고 특정 서열을 식별하기 위해 PCR 분석에 사용합니다. 결과를 기다리는 동안 각 물고기를 식별자로 표시된 작은 탱크에 보관하십시오.

이제 우리는 표준 어류 사육 조건을 통해 갔다, 이러한 표준이 생물학적 과정을 연구하기 위해 조작되는 몇 가지 방법을 살펴 보자.

시스템 물의 온도는 얼룩말 물고기 건강에 깊은 영향을 미칠 수 있습니다. 당뇨병 의 모형을 만들기 위하여는, 이 연구원은 췌장 독소, 연쇄상 조신으로 물고기를 취급하고, 감소된 수온을 가진 탱크에 그(것)들을 수용합니다. 당뇨병 물고기는 신장과 눈 손상과 같은 예상 표현형뿐만 아니라 감소된 꼬리 지느러미 재생을 나타내며 당뇨병의 생물학을 검사하는 데 사용할 수 있습니다.

탱크 시스템은 특정 실험 목적으로 수정할 수도 있습니다. 물고기에서 수영 행동의 연구는 불안에 대 한 판독으로 사용할 수 있습니다., 침략, 또는 사회적 행동. 여기서, 비디오 추적은 치료되지 않은 물고기와 신경 활성 약물로 치료된 물고기 사이의 수영 행동의 차이를 분석하는 데 사용됩니다. 이와 같은 연구는 신경 과학에 대한 우리의 이해를 발전시키고 약물 발견을위한 도구가 될 수 있습니다.

변경된 빛 조건은 제브라피시에도 영향을 줄 수 있습니다. 강렬한 빛 처리는 망막의 빛 감지 세포를 축하하기 위하여 조차 이용될 수 있습니다. 이 물고기는 세포 증식에 의해 손상된 망막 조직을 복구 할 수있는 능력을 가지고, 이는 사람들의 망막 변성을 연구하는 과학자들에게 중요한 관심이다.

당신은 제브라피시 유지 보수 및 축산에 대한 JoVE의 비디오를 방금 보았습니다. 우리는 실험실에서 물고기가 보관, 먹이 및 관리하는 방법의 필수품을 넘어 갔습니다. 시청해 주셔서 감사합니다!

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