تشريح 6.5 أجنة الفئران DPC

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

عزلة postimplantation مرحلة الأجنة يسمح احد لدراسة وتحليل الجينات الزخرفة الخلية نسب عمليات صنع القرار خلال التطور الجنيني ، ولكن التشريح السليم للجنين في وقت مبكر يمكن أن يكون تحديا. يصف هذا البروتوكول وسيلة لعزل متتالية في وقت مبكر البدائية ، مرحلة أجنة (~ 6.5 أيام تال للجماع [DPC]).

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Shea, K., Geijsen, N. Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos. J. Vis. Exp. (2), e160, doi:10.3791/160 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

يمكن تحليل أنماط التعبير الجيني خلال المراحل المبكرة من التطور الجنيني الثدييات توفر أدلة مهمة حول تفاعل الجينات وظيفة خلية خلية ، وآليات دليل يشير إلى أن الزخرفة الجنينية. ومع ذلك ، يمكن تشريح الجنين الماوس من الساقط بعد وقت قصير من إجراء زرع تكون صعبة ، ومفصلة خطوة بخطوة توثيق هذه العملية غير متوفرة.

نحن هنا لشرح كيفية معزولة بعد الزرع (6.5 DPC) من الأجنة تشريح أولا رحم فأرة حامل (الكشف عن عين قابس المهبلية اليوم coitum poist 0.5) وبعد تشريح الجنين الساقط من الأمهات. يوصف تشريح غشاء رايخرت فضلا عن إزالة مخروط المشيمة الظاهر.

Protocol

تشريح الجهاز التناسلي من فئران

  1. يصرح باستخدامها في الحيوانات الحوامل خنقا 2 أكسيد الكربون باستخدام غاز مضغوط.
  2. وضع الاستلقاء على لوحة ماصة الحيوانية ونقع في الايثانول 70 ٪ للحد من مخاطر تلوث تشريح الفأر مع الشعر.
  3. قرصة الجلد وإحداث شق صغير الجانبية في خط الوسط مع مقص الجراحية العادية. الاستمرار على الجلد بقوة فوق وتحت شق الجلد وسحب بعيدا في اتجاه الرأس والذيل لفضح البطن.
  4. فهم الصفاق مع ملقط وقطع لفضح تجويف البطن.
  5. تحديد الأعضاء التناسلية في المنطقة الظهرية من تجويف الجسم : قرنان الرحم ، وقناة البيض والمبيض.

التلم البدائي في مرحلة (6.5 DPC) تشريح

  1. إزالة قرن الرحم بواسطة استيعاب الرحم أسفل قناة البيض وقطع عليه مجانا على طول mesometrium. تشريح الرحم في مكان بارد PBS الجليد.

    الشكل 1

    الشكل 1

  2. كل فصل الجنين عن طريق خفض بين المواقع على امتداد القرن زرع الرحم.

    الشكل 2

    الشكل 2


  3. فهم بطانة الرحم عن طريق تحريك العضلات ملقط ساعاتي بين طبقة العضلات المحيطة بها ، ويلفها الأنسجة الساقط. قشر طبقة العضلات والظهر ، ويعرض الساقط.

    الشكل 3

    الشكل 3

  4. مقطع قبالة جزء من يتعرض الساقط في ذروة (حوالي 1 / 5 من النسيج الساقط) الذي سيعرض تلميح midventral أو البعيدة الجنين المغلقة.

    الشكل 4

    الشكل 4

  5. ويمكن للجنين قصفت بها باستخدام الملقط نصائح. يخترق الساقط مع ملقط الجنين المحيطة وملقط المسيل للدموع لفتح الساقط على حدة.

    الشكل 5

    الشكل 5

  6. بمجرد إزالة الجنين ، قد لا يزال الغشاء رايتشارت وترفق كذلك مخروط المشيمة الظاهر (الأرومة الغاذية). يمكن تشريح الجنين مزيدا من تشريح دقيق.

    الشكل 6
    الشكل 6

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Postimplantation في الماوس يحدث بين 4.5 DPC والولادة. ويمكن تطبيق هذه الطريقة تشريح ، وأساسا كما وصفها ، لعزل في وقت سابق أو لاحق الأجنة في مرحلة DPC 5،5-8،5.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Micro Dissecting Forceps serrated, straight Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5130 2 pairs
Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5010 2 pairs
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1X) Reagent Invitrogen 14190
Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish Tool Fisher Scientific 08-757-12
4% Paraformaldehyde in PBS Reagent
Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors Tool Fisher Scientific 08-940
Pregnant female mice Animal
Dissecting Microscope Microscope

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Nagy, A., et al. Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. (2003).

Comments

6 Comments

  1. How you set the exactly time of embryos stage?
    thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 6, 2008 - 12:47 PM
  2. One option for obtaining pre-implantation embryos is to set up natural matings.  To set up matings, females (6 weeks to 4 months of age) are placed with males (one or two females in each cage with one male) overnight.  The morning after mating, the females can be checked for the presence of a copulation plug in the vagina.  The presence of the vaginal plug indicates that the mating occured, but it dŒs not always mean that a pregnancy will result.  The convention for timed pregnancy assumes that fertilization takes place around midnight during a 7pm to 5am dark cycle, then at noon on the following day (i.e., the day on which the vaginal plug is found), the embryos are aged "0.5 dpc (days post coitum)".  At noon on the next day, the embryos are 1.5 dpc, and so on. It is important to check for plugs early in the morning because they fall out or are no longer detectable ~1² hours after mating, or sometimes earlier.  It is important to note that embryos within a litter can vary with regard to stage of development.  Therefore, morphological criteria are used when more precise embryo staging is required such as the "Theiler Staging Criteria for Mouse Embryonic Development". 

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 19, 2008 - 7:59 PM
  3. I just want to thank you for posting this video, it was extremely useful.  I am a high school student in Wisconsin and I am doing research in stem cells and I'm trying to perfect my dissection method.  I love learning new methods and new information on this subject.  Thank you again. Sara

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 6, 2008 - 6:35 PM
  4. HI! How do you dissect the embryo out of Reichardt's membrane and ectoplacental cone (passage Fig 6A to B)? Thanks - Delphine

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 19, 2009 - 11:36 AM
  5. Do you know if there are any workshops for isolating e5-e9 mouse embryos? You're video was very helpful.

    Reply
    Posted by: Monika L.
    January 14, 2010 - 6:12 PM
  6. I have the same question. How do you dissect the embryo out of Reichardt's membrane and ectoplacental cone (passage Fig 6A to B)? Are their any tricks? Thanks

    Reply
    Posted by: Zhuoqing F.
    December 27, 2012 - 5:34 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics