फसल काटने वाले शुक्राणु और चूहे के कृत्रिम गर्भाधान

Published 4/28/2007
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Biology

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Summary

इस प्रोटोकॉल पुरुषों के वृषण से शुक्राणु निकालने और फिर महिला चूहों inseminating के लिए तरीकों को दर्शाता है. यह प्रक्रिया उपयोगी है जब विकासात्मक अध्ययन में ट्रांसजेनिक काम के रूप में के रूप में अच्छी तरह से सटीक समय की जरूरत है.

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Duselis, A. R., Vrana, P. B. Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice. J. Vis. Exp. (3), e184, doi:10.3791/184 (2007).

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Abstract

जीनस Peromyscus (हिरण चूहों) के कृन्तकों सबसे अधिक प्रचलित देशी उत्तरी अमेरिकी स्तनधारियों हैं. Peromyscus प्रजातियों अनुसंधान के एक विस्तृत रेंज सहित विष विज्ञान, जानपदिक रोग विज्ञान, पारिस्थितिकी, व्यवहार, और आनुवंशिक अध्ययन में किया जाता है. यहाँ वे कृत्रिम गर्भाधान के प्रदर्शनों के लिए एक उपयोगी मॉडल उपलब्ध कराते हैं.

यहाँ प्रदर्शित उन लोगों के लिए समान तरीके पहले कई हिरण माउस अध्ययन में इस्तेमाल किया गया है, अभी तक कोई विस्तृत प्रोटोकॉल प्रकाशित किया गया है. यहाँ हम कृत्रिम गर्भाधान के बुनियादी विधि प्रदर्शित करता है. इस विधि कृंतक से निकालने testes, तो अधिवृषण और वीएएस deferens से शुक्राणु अलग जरूरत पर जोर देता है. परिपक्व शुक्राणु, अब दूध मिश्रण में महिला प्रजनन पथ में ovulation के समय में रखा जाता है. निषेचन भ्रूण विकास के समय के लिए दिन 0 के रूप में गिना जाता है. भ्रूण तो वांछित समय बिंदु पर लिया जा सकता है और चालाकी.

कृत्रिम गर्भाधान कृंतक प्रजातियों की एक किस्म है, जहां सटीक भ्रूण समय महत्वपूर्ण है या प्राप्त करने के लिए कठिन है में इस्तेमाल किया जा सकता है. इस तकनीक प्रजाति या उपभेदों (ज्यादातर Peromyscus सहित) जो तुरंत और / या संभोग का आकलन करना मुश्किल है जहाँ दोस्त नहीं हो सकता है के लिए महत्वपूर्ण है. इसके अलावा, कृत्रिम गर्भाधान या तो विकास और प्रगति / या ट्रांसजेनिक काम मानचित्रण में भ्रूण के विकास के लिए सही समय प्रदान करता है. पशुओं की कम संख्या के बाद निषेचन की गारंटी है इस्तेमाल किया जा सकता है. इस विधि Peromyscus प्रणाली को आगे बढ़ाने के लिए महत्वपूर्ण हो गया है, और उम्मीद है कि दूसरों को लाभ होगा के रूप में अच्छी तरह से.

Protocol

कृत्रिम गर्भाधान

कृत्रिम गर्भाधान प्राकृतिक matings के बजाय प्रयोग किया जाता है संभावना है कि सभी महिलाओं को गर्भवती हो जाएगा में वृद्धि. 2 पुरुष हर 1 superovulated महिलाओं या एक महिला estrous में जाना जाता के लिए इस्तेमाल किया गया था. परिपक्व नर चूहों से caudae epididymides एक 9% दूध निलंबन में रखा गया और 18 गेज सुई के साथ खुला कटा हुआ. शुक्राणु के लिए एक कुछ मिनट के लिए स्वतंत्र रूप से तैरने की अनुमति दी गई थी और तब epididymides मिश्रण से ले जाया गया. निलंबन संगम और गतिशील शुक्राणु के लिए एक खुर्दबीन के साथ मूल्यांकन किया गया था. एक कुंद 22 एक गेज आधा इंच लंबी सुई शुक्राणु प्रशासन के लिए इस्तेमाल किया गया था. एक 120 ° मोड़ सुई नीचे 3 / 4 वें तरीका के बारे में रखा गया था. सुई योनि में डाला गया था मोड़ और 0.025 करने के लिए - 0.05mls इंजेक्शन. यदि एक सहायक के लिए उपयुक्त स्थिति में महिला को पकड़ प्रयोग किया जाता है, anesthetics के उपयोग की जरूरत नहीं है.

तैयार

  1. 6 महिलाओं के लिए 4 पुरुषों का प्रयोग करें
  2. मछली पालने का बाड़ा में पुरुषों euthanize
  3. दूध पाउडर से 9% के दूध के बारे में 5 मिलीलीटर की तैयारी
  4. छोटे पेट्री डिश में 1.5 मिलीलीटर रखो
  5. Epididymus और वीएएस deferens कट
  6. 9% के दूध के 1.5ml में रखो
  7. दो 18 गेज सुई का प्रयोग, और सुइयों के साथ लंबे समय काटने गति का उपयोग करते हुए, शुक्राणु जारी epididymus और वीएएस deferens खुला टुकड़ा
  8. बाहर ले जाओ ऊतक पर छोड़ दिया है और माइक्रोस्कोप के अंतर्गत शुक्राणु की जांच करने के लिए

इंजेक्शन

  1. 120 ° के कोण पर कुंद सुई का प्रयोग करें
  2. हाथ में माउस पकड़ो और मिश्रण इंजेक्षन. यदि एक व्यक्ति पकड़ और इंजेक्शन के साथ असहज, दो लोगों का इस्तेमाल किया जा सकता है. नहीं चतनाशून्य करनेवाली औषधि, इस्तेमाल किया जाना चाहिए एक पर के रूप में जानता है कि कैसे इस प्रक्रिया प्रभावित हो सकता है.
  3. महिला प्रति शुक्राणु / दूध मिश्रण के 0.05ml का उपयोग करें

प्राप्तकर्ता महिलाओं

  1. प्राप्तकर्ता महिलाओं पर योनि स्मीयर (इस समय तक प्राप्तकर्ता महिलाओं proestrus / मद में होना चाहिए) करो
  2. मादा है कि मद 5 दिन से नहीं पहुंचे हैं शायद नहीं किया जाना चाहिए

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Acknowledgements

मैं Peromyscus अपने बहुमूल्य अंतर्दृष्टि के लिए आनुवंशिक स्टॉक केंद्र, धैर्य, और कृंतक प्रजनन पर ज्ञान से माइक डेवी धन्यवाद देना चाहूंगा.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Petri Dish Tool Fisher Scientific 08-772-30
18 gauge needle Tool BD Biosciences 305195
Powdered milk Reagent Any Supplier
1 ml syringe Tool National Scientific Company S7510-1
Forceps Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5060
Scissors Tool Roboz Surgical Instruments Co. RS-5882
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Reagent GIBCO, by Life Technologies 14200-075
22 gauge blunt needle Tool Give to me

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Comments

15 Comments

  1. can you tell me the resolution power of the microscope at which you have shown the video and the make of the mcroscope used.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 17, 2007 - 12:56 AM
  2. The total magnification to do the AI is between 10-²0x depending on the user for basic dissection. The sperm can be seen at 400x

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 1, 2007 - 2:09 PM
  3. Hello Amanda!  Thank for this article. I d like if you can give me more information about the powered milk, and if there is any posibility of create "make in home" powered milk. Too , if you can please give me the aprox. milimeters that need introduce the nedlle into the vagina. You understand my english? Thank you. Carolina (from Buenos Aires, Argentina)

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 29, 2008 - 9:09 AM
  4. Hi Carolina, The milk is a commercial powdered milk bought from a regular grocery store. I am not sure what it contains if you wanted to make it at home. A little less than 1 cm of the needle was inserted into the vagina for sperm delivery but if you want to test it...I would use a dead mouse to check the insertion length when making a new needle. Good luck Amanda  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 15, 2008 - 12:19 PM
  5. Would there be any difference in the dimention of the insemination needle for rats. Is there a non-invasive method of extracting sperm in rats. How can the vaginal smear indicate prŒstrus/estrus.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 26, 2008 - 2:28 AM
  6. I know it is been a while since you posted the video. But what is the success rate of this protocol? thanks Ming

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 11, 2008 - 11:45 AM
  7. Amanda, Our lab is just beginning to look into artificial insemination.  After watching your video and looking at a few other artificial insemination protocols, I have a couple of questions: (1) How to you assess or induce ovulation? (²) How do you induce pseudopregnancy? Thank you, Rob

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 2, 2009 - 6:02 PM
  8. Hola, respuesta para Robert Stiles, mira si tu problema es matar a los machos, lo que puedes hacer castrar a los animales, de esa manera no es necesario sacrificarlos. Por lo tanto puedes obtener los espermas necesarios sin sacrificar al animal.   Saludos desde México Roberto Lazzarini, Biologo experimental    

    Reply
    Posted by: Roberto L.
    January 29, 2009 - 8:45 PM
  9. Hy Amanda, I would like to know  some things: 1 - what is your success rate? ² - Do you use the vaginal tampon like described by LECKIE et al, 1973 (Biology of Reproduction, Vol 9, 4²0-4²5)? 3 - I tested the techinique using dye solution and, afterwards, I sacrified the female, but I didn't see any solution inside the uterus. Do you introduce the needle in the cervix (like in human intra-uterine insemination) or you just put the needle very closely to it. Because don't have how to have sure about introducing into the cervix, unless using a special speculus. Thank you Daniela  

    Reply
    Posted by: Daniela F.
    March 4, 2009 - 9:44 AM
  10. Please send me the full video of collection of sperm from mice. Because i could not able to see the full video content in my institution so send full video to my mail. thanking you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 18, 2009 - 1:18 AM
  11. Hi, please contact us at support@jove.com and we'll see what we can do.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 18, 2009 - 3:19 PM
  12. hi Amanda ,please Iwant a copy of the video and any related subjects if you can support them to me I will very gratful .
    with my regards

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 9, 2009 - 9:16 AM
  13. do you induce pseudopregnancy in the recipient female or do
    you literally just inject the donor sperm??
    If you induce how do you do this?
    What are the pregnancy rates like from using this AI?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 29, 2010 - 4:50 AM
  14. Hi dear Amanda, I want to collect semen from rat, but when I removed the seminal vesicles and I cut them, semen was coagulated immediately. . In fact I need a protocole for rat semen collection. Thanks for help.
    Ameneh immunology MS student

    Reply
    Posted by: Anonymous
    December 12, 2011 - 8:52 AM
  15. Good day maam! Can i ask the procedure how to extract the sperm form the cauda epididymis? thank you.

    Reply
    Posted by: jamee d.
    November 23, 2012 - 6:55 AM

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