תגובת חוטם הרחבה (PER) Assay ב תסיסנית

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

בתגובה חוטם הארכה או PER היא התנהגות טעם assay כי נעשה שימוש זבובים וכן דבורי דבש. כאשר חוטם הופך במגע עם חומר אטרקטיבי, לטוס מרחיב חוטם שלה לצרוך את החומר. פתרונות של סוכרים שונים הם אטרקטיביים מאוד לטוס.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Shiraiwa, T., Carlson, J. R. Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila. J. Vis. Exp. (3), e193, doi:10.3791/193 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

בתגובה חוטם הארכה (PER) היא התנהגות טעם assay כי נעשה שימוש זבובים וכן דבורי דבש.

על פני השטח של הפה של זבוב (labellum), ישנם מבנים דמויי שיער הנקרא sensilla אשר בתים נוירונים טעם. כאשר חומר אטרקטיבי יוצר קשר עם labellum, לטוס מרחיב חוטם שלה לצרוך את החומר. תגובת חוטם הרחבה (PER) assay מודד את התגובה התנהגות הטעם, היא שיטה יעילה כדי ללמוד על העדפות מזון זבוב אחד. פתרונות של סוכרים שונים, כגון גלוקוז סוכרוז, פרוקטוז ו, הם אטרקטיביים מאוד לטוס. ההשפעה של חומרים מרתיעה גם יכול להיבדק כמו הפחתה של PER כאשר מעורבים פתרון מתוק.

למרות הפשטות של התהליך הבסיסי, יש הרבה דברים שיכולים למנוע ממנו לעבוד. אחד הגורמים הדורש תשומת לב הוא מצב תגובה של הזבוב. בפעם רעב הנדרש כדי להביא את המדינה לטוס מענה הולם משתנה באופן דרסטי 36-72 שעות. הקמנו סדרה של בקרות כדי להעריך מצב של זבוב המאפשר סינון החוצה של בעלי חיים יחידים שאינם מגיבים או Hyper-תגובה. גורם חשוב נוסף הוא רמת ההשפעה ואת המיקום של איש הקשר של labellum, אשר יהיה קשה לתאר במילים. מצגת וידאו זה מדגים את כל אלה, יחד עם שיפורים נוספים אשר יגדילו את שחזור של שיטה זו.

Protocol

רעב

  1. ראשית, להרעיב את לעוף.
  2. לשים חתיכה קטנה של קים, לנגב ספוגה מים בקבוקון ריק.
  3. העברת 20-30 המדושנים טס הבקבוקון הריק.
  4. בדוק כל 12 -24 שעות כדי לוודא נייר לח.
  5. להרעיב את לטוס על 36-72 שעות.

תקן את הזבוב

  1. קח אחד לטוס aspirator.
  2. המקום טיפ 200 μl צהוב על פתיחת. במקביל להטלת ונשף על זה, אתה יכול ללחוץ על לטוס אל קצה צהוב.
  3. בעדינות להחיל קצת אוויר כדי לדחוף את לטוס עד לנקודה שבה הוא לא יכול לזוז.
  4. באמצעות סכין גילוח, לשים סימן כ בעין של זבוב, אז למצוץ את לטוס הלוך לחתוך את קצה.
  5. בעדינות המכה לטוס בחזרה למצב, אבל רק לפני שהגיע סוף מאוד, לעשות בשיפוע לחתוך במיקום שבו חוטם הוא הולך להיות ממוקם. אתה יכול לעשות את זה בלי לחתוך באלכסון, אבל זה בהחלט להפוך את התהליך הבא קל יותר.

הכינו פתילות סוכרוז

  1. טוויסט רצועה ברוחב של 6 מ"מ Kimwipes ® נייר לתוך חוט, ולמשוך בנפרד לחתיכות קטנות של הפתיל כמו בצורת קונוס (<1 ס"מ).
  2. פתילים אלה קטן היו טבל פתרונות סוכרוז או מים בפני חוטם על ידי יצירת קשר.

הכן שולטת בחיות מעבדה

  1. לפני כל בדיקה tastants, לתת פתרון סוכרוז 4% לטוס. זה פועל כמו שליטה חיובית. מחק כל לעוף כי לא הגיב.
  2. בשלב הבא, מבחן DH 2 0 על לטוס. מעשה זה כביקורת שלילית. מחק את הזבוב אם הגיב.
  3. מבחן פקדים אלה לאחר בדיקות tastants שלך.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

במצגת זו, שעברנו את כל השלבים עבור assay בתגובה חוטם הארכה. השיטה נשמעת די פשוטה אבל כמו רבים מבחני התנהגות אחרים, דברים קטנים רבים יכולים למנוע את assay מעבודה. עברנו שלבים רבים כאלה שצריכים תשומת לב. הנה, אני reemphasize כמה מן הגורמים החשובים ביותר.

גורם אחד כזה הוא צורה של הפתיל. הראיתי כמה דוגמאות טובות מאוד, אבל כמובן, במציאות הכל יהיה ספקטרום רציף בין טוב מאוד רע מאוד. בהתחלה, ייתכן שאתה משתמש בדברים קרוב לצד טובים מאוד, אבל יום אחר יום רגיל שלך עלול להתחיל להעביר לאט לאט לתחום לא כל כך טוב. תפיסת האדם של כך נקרא "טוב" יכול בקלות משמרת במודע. אחת הדרכים למנוע זאת היא לקחת תמונה של הפתיל השתמשת בניסויים שלך, ולהשוות את כל התמונות על ידי צד בצד. או, לפחות לקחת תמונה אחת של פתילות זה עבד טוב מאוד, ובוהה בו זמן מה לפני הבדיקה Pers.

דבר נוסף חשוב הוא רמת ההשפעה של הקשר. זה יותר קל להתמודד עם כי המטרה היא להפוך את מגע עדין ככל האפשר. אם אינך רואה להזיז את ראשו של לטוס בכלל, כי הוא הטוב ביותר.

התנאי רעב הוא הגורם הכי קשה לשלוט. טעם רבים או מבחני התנהגות חוש הריח, בזמן רעב של 24 שעות משמש לעתים קרובות מאוד. 24 שעות עשוי להיות נוח מאוד לאנשים לעשות את הניסוי, אבל אם אתה טס האחורי שלך במצב טוב מאוד, זו תקופה קצרה למדי. אבל גם אם השתמשת מזון לטוס עשיר, ושליטה צפיפות בדיוק, חלון לבדיקות PER יכול לנוע בין 36 שעות ל 72 שעות. לכן, כניסוי, אני חייב להגיד שזה מאוד לא נוח לאנשים. ישנו גורם נוסף להקשות על נסיינים. כעניין של עובדה, יהיו קבוצות רבות, שבו חלון לצורך הניסוי עשוי להיות קצר מאוד, או אולי אפילו לא קיים כלל.

אז יש כמה המכשולים העיקריים שאתה צריך לעבור, אבל הדבר החשוב ביותר הוא שליטה חיוביות ושליליות שהזכרתי. על ידי שמירה על תקן אותם מאוד חמור, תוכל לאסוף אמין ערכות נתונים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

אנו מודים פול גרהם עבור משרת כאיש מצלמה במצגת וידאו.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
HDR-HC1 Camera Sony Corporation
SMZ800 Microscope Nikon Instruments
P-IBSS Camera Adapter Nikon Instruments
1x DC10LN Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
257010 Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
TREKKER Mk2 Tripod BENBO
Gorillapod SLR Tripod Joby
iMac G5 Computer Apple
Power Mac G5 Computer Apple
iMovie Software Apple
MPEG Streamclip Software SQUARED 5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dethier, V. G. The Hungry Fly. Harvard University Press. Cambridge. (1976).

Comments

2 Comments

  1.  Comments about the starvation protocol. I am currently performing research on fly appetitive learning and test fly sugar response as a control with an assay similar to the one described in Kim et al. (J Neurosci. ²007 Jul 18;²7(²9):7640-7.) In my experiments flies are starved for ²1h before conditioning at ²5°C. In my experience, the temperature during starvation is of huge importance: In preliminary experiments, I got similar sugar responses for flies starved for 7h at ²5° and ²4h at 18°. So information about the temperature during starvation is highly welcomed. The density of flies during starvation also appeared critical. Using bigger tubes, I did another quick experiment transferring 40 or 80 flies in my tubes for starvation. One day after, the majority of the flies were dead while kept in groups of 80, while no death was seen in the tubes of 40 flies. So maybe a difference from ²0 to 30 flies in the vials might have big influence.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 8:05 AM
  2. I am very interested in the drosophila probosics extension response assay, and want to know more about this assay methods. Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 20, 2011 - 12:46 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics